2.2.5 熾灼殘?jiān)?/h3>

按《中國藥典》2020年版四部通則0841熾灼殘?jiān)鼨z查法，取待標(biāo)品約1 g，精密稱定，置鉑坩堝中于700 ℃下熾灼至恒重，計(jì)算殘?jiān)繛?。

2.3 含量測定

2.3.1 質(zhì)量平衡法

根據(jù)水分、殘留溶劑、熾灼殘?jiān)癏PLC純度的測定結(jié)果，按質(zhì)量平衡法計(jì)算，本批對照品的含量＝（1-水分-殘留溶劑-熾灼殘?jiān)?times;HPLC純度＝（1-0.15％-0.12％-0）×100％＝99.73％，修約為99.7％。

2.3.2 氟核磁共振定量法

采用氟核磁共振定量法對質(zhì)量平衡法賦值結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，采用zgig脈沖序列在恒溫25 ℃下獲取19F核磁共振譜，見圖8，譜寬δ 60，射頻中心頻率δ -100，采樣點(diǎn)數(shù)131 072，采樣時間1.91 s，弛豫時間30 s，采樣次數(shù)16，空掃次數(shù)4，增益101。分別精密稱取法維拉韋約20 mg與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)4,4’-二氟二苯甲酮約10 mg，置同一離心管中，加2 mL氘代二甲基亞砜溶解，取約0.7 mL溶液轉(zhuǎn)入5 mm核磁管中測定。平行配制3份樣品溶液，采用δ -92.8處樣品信號和δ -106.5處內(nèi)標(biāo)響應(yīng)信號，以核磁共振定量法計(jì)算法維拉韋含量為99.0%（n=3，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）= 0.92%）。

2.3.3 進(jìn)口對照品外標(biāo)法

采用HPLC法測定，色譜柱為ACE Excel C18-AR（4.6 mm×150 mm，3 µm），柱溫40℃，流動相為磷酸二氫鉀緩沖液（pH 2.5）-乙腈（93:7），流速1.0 mL/min，檢測波長322 nm。待標(biāo)品和對照品溶液的質(zhì)量濃度均為0.2 mg/mL，按外標(biāo)法計(jì)算，以法維拉韋TLC進(jìn)口對照品作為對照，本批對照品含量為100.7％。

2.3.4 差示掃描量熱法

稱取法維拉韋待標(biāo)品約3 mg，置40 μL標(biāo)準(zhǔn)鋁坩堝中測定分析。溫度范圍175~205 ℃，升溫速率為0.5 ℃/min，氣氛氮?dú)怏w積流量為50 mL/min。結(jié)果見圖9，待標(biāo)品的起始熔點(diǎn)為189.0 ℃，DSC純度為99.8％，測試結(jié)束后待標(biāo)品粉末變黑，可能熔融分解，該項(xiàng)純度結(jié)果僅供參考。

2.4 均勻性和穩(wěn)定性考察

2.4.1 均勻性考察

法維拉韋待標(biāo)品分裝后，隨機(jī)抽取12支，每支獨(dú)立測定2次，稱樣量為20 mg，質(zhì)量濃度為0.2 mg/mL。按“2.3.3”項(xiàng)色譜條件采用HPLC法測定，按照隨機(jī)序列表進(jìn)樣，以峰面積/稱樣量為Y軸，瓶號為X軸，進(jìn)行單因子方差分析，P＝0.27>0.05，結(jié)果表明該批待標(biāo)品瓶間瓶內(nèi)均勻性良好。

2.4.2 穩(wěn)定性考察

將分裝后的法維拉韋待標(biāo)品置于40 ℃、RH 75%恒溫恒濕箱中，考察本品在極端運(yùn)輸條件下10 d內(nèi)的穩(wěn)定性，依次在第0、5、10天分別取樣2瓶，監(jiān)測HPLC純度變化情況。第0、5、10天的測定結(jié)果均未檢出雜質(zhì)，HPLC純度為100%，法維拉韋主峰響應(yīng)值一致，表明該批待標(biāo)品在極端運(yùn)輸條件下10 d內(nèi)穩(wěn)定性良好，可以常溫條件運(yùn)輸。

3 討論

法維拉韋首批國家對照品研制中，采用了質(zhì)量平衡法、氟核磁共振定量法、進(jìn)口對照品外標(biāo)法以及差示掃描量熱法4種不同原理的含量測定方法測定了對照品的含量，結(jié)果分別為99.7%、99.0%、100.7%、99.8%。由于質(zhì)量平衡法是WHO推薦的藥品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)定值方法，能夠更準(zhǔn)確地反映本品的真實(shí)含量，因此該批對照品以質(zhì)量平衡法的結(jié)果進(jìn)行賦值。研制得到的法維拉韋首批國家對照品具備純度高、量值準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好的特性。

氟核磁共振譜圖一般較寬，發(fā)生樣品響應(yīng)信號與內(nèi)標(biāo)信號重疊或干擾的可能性較小，內(nèi)標(biāo)選擇比氫核磁共振定量試驗(yàn)的限制更少。但較寬的圖譜容易導(dǎo)致基線不平，相位較差。為了消除這些影響，本試驗(yàn)將射頻中心頻率設(shè)定為δ -100.0，位于樣品信號（δ -92.8）與內(nèi)標(biāo)信號（δ -106.5）的中間，同時譜寬設(shè)置為δ 60，可以完整覆蓋樣品與內(nèi)標(biāo)的信號范圍，所得譜圖基線平整，適合進(jìn)一步的核磁定量積分。

法維拉韋作為首個在此次疫情期間批準(zhǔn)上市的抗病毒藥物，引起了各界高度關(guān)注，關(guān)于其治療COVID-19的臨床試驗(yàn)已在全國多家中心啟動。根據(jù)現(xiàn)有研究結(jié)果，法維拉韋對COVID-19有一定抗病毒療效，將其臨床適應(yīng)證擴(kuò)展至COVID-19值得期待，有待更大規(guī)模的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證。

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