由新型冠狀病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2, SARS-CoV-2）導(dǎo)致的新型冠狀病毒肺炎（corona virus disease 2019, COVID-19）自2019年肆虐全球，給人類帶來(lái)了重大的生物安全威脅。COVID-19主要通過(guò)呼吸道飛沫、密切接觸以及氣溶膠等途徑傳播，傳染性強(qiáng)、傳播速度快、流行范圍廣，已導(dǎo)致全球210多個(gè)國(guó)家和地區(qū)暴發(fā)疫情。如何預(yù)防新冠病毒以及治療感染患者，對(duì)全球公共衛(wèi)生是一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)。

目前全球都在積極開(kāi)展藥物研發(fā)，但針對(duì)COVID-19的特效藥尚未研發(fā)成功，“老藥新治”是快速控制疫情的一種有益手段，“老藥”相比于全新結(jié)構(gòu)藥物，其合成工藝成熟、安全性和藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)已知，和新藥相比有一定的優(yōu)勢(shì)。法維拉韋（favipiravir，又稱法匹拉韋，圖1）是一種新型廣譜抗RNA病毒藥物，新近的體內(nèi)外研究證實(shí)它對(duì)SARS-CoV-2有明確的抑制作用。法維拉韋于2014年3月在日本批準(zhǔn)上市，由富士膠片集團(tuán)富山化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社開(kāi)發(fā)，作為日本的國(guó)家戰(zhàn)略儲(chǔ)備藥物，被納入《日本新型冠狀病毒疾病治療方案》。2016年6月，浙江海正藥業(yè)股份有限公司與日本富山化學(xué)工業(yè)株式會(huì)社簽訂化合物專利獨(dú)家授權(quán)協(xié)議，負(fù)責(zé)含法維拉韋的抗流感病毒藥物在中國(guó)的研發(fā)、制造與銷售。2020年2月15日，由海正藥業(yè)生產(chǎn)的法維拉韋獲國(guó)家藥品監(jiān)督管理局有條件批準(zhǔn)上市，劑型為片劑，商品名為Avigan®，適應(yīng)證為治療成人新型或復(fù)發(fā)流感（僅限于其它抗流感病毒藥物治療無(wú)效或效果不佳時(shí)使用）。2020年2月在深圳市第三人民醫(yī)院進(jìn)行臨床試驗(yàn)，比較了法維拉韋（35例）與洛匹那韋/利托那韋（45例）治療COVID-19的療效，結(jié)果表明法維拉韋的抗病毒療效優(yōu)于洛匹那韋/利托那韋，副作用較低，法維拉韋已被納入《軍隊(duì)支援湖北醫(yī)療隊(duì)新型冠狀病毒感染疾病診療方案》。2020年在工信部統(tǒng)一調(diào)撥下，海正藥業(yè)生產(chǎn)的法維拉韋片已經(jīng)馳援全球26個(gè)國(guó)家或地區(qū)，用于協(xié)助治療COVID-19。

目前美、歐、日、中四國(guó)藥典均未收載法維拉韋，為了有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，滿足企業(yè)注冊(cè)上市及生產(chǎn)的需要，亟需制備法維拉韋首批國(guó)家化學(xué)對(duì)照品。本研究對(duì)法維拉韋進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證，然后針對(duì)其特性進(jìn)行了理化性質(zhì)檢查、純度分析以及穩(wěn)定性考察，采用質(zhì)量平衡法賦值，并通過(guò)氟核磁共振定量法、進(jìn)口對(duì)照品外標(biāo)法及差示掃描量熱法對(duì)定值的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，最終建立了法維拉韋首批國(guó)家化學(xué)對(duì)照品。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

三重四級(jí)桿液相質(zhì)譜儀（Quattro Premier XE QQQ，Waters公司）、核磁共振儀（Bruker Ascend 600，Bruker公司）、5 mm PABBO探頭、試驗(yàn)控制及數(shù)據(jù)處理軟件（Topspin4.0，Bruker公司）、傅立葉紅外光譜儀（Frontier，PerkinElmer公司）、高效液相色譜儀（e2695-2998，Waters公司）、氣相色譜儀（7890B-7697A，Agilent公司）、電子天平（XP205，Mettler公司）、超聲儀（KQ-500DB，昆山市超聲儀器有限公司）、酸度計(jì)（S40K，Mettler公司）、水分測(cè)定儀（V30S，Mettler公司）、馬弗爐（FP311C，yamato公司）、動(dòng)態(tài)蒸氣吸附儀（DVS advantage，SMS公司）、恒溫恒濕箱（HPP260，Memmert公司）、差示掃描量熱儀（DSC3，Mettler公司）。

1.2 試藥

法維拉韋待標(biāo)品（海正藥業(yè)），法維拉韋進(jìn)口對(duì)照品（批號(hào)3812-027A1，TLC公司），法維拉韋雜質(zhì)Ⅰ~Ⅴ（海正藥業(yè)），甲醇（批號(hào)191614，F(xiàn)isher公司，含量為99.9％），氘代二甲基亞砜（批號(hào)STBJ0941，Sigma公司），溴化鉀（批號(hào)20160307，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），乙腈（批號(hào)JB091230，Merck公司），磷酸二氫鉀（批號(hào)20181209，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），磷酸（批號(hào)20171026，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），無(wú)水碳酸鈉（批號(hào)20170106，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），N,N-二甲基乙酰胺（批號(hào)18210305G901，Oceanpak公司），Composite-5卡氏試劑（批號(hào)I1710，F(xiàn)luka公司），4,4’-二氟二苯甲酮（批號(hào)：H7H4B-ND，TCI chemicals公司），去離子水（18.2 MΩ，實(shí)驗(yàn)室自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)確證

2.1.1 質(zhì)譜

質(zhì)譜離子源為電噴霧離子源（ESI），正離子模式檢測(cè)，離子源溫度120 ℃，毛細(xì)管電壓3.5 kV，錐孔電壓10 V，錐孔氣流量50 L/h，脫溶劑氣溫度350 ℃，脫溶劑氣流量600 L/h，流動(dòng)相為甲醇-水（50：50），流速0.2 mL/min。待標(biāo)品的質(zhì)譜圖如圖2所示，加氫、加鈉的準(zhǔn)分子離子峰分別為157.86、179.86，與法維拉韋的理論相對(duì)分子質(zhì)量157.10一致。

2.1.2 核磁共振鑒別

將待標(biāo)品溶解于氘代二甲基亞砜制成溶液，于600 MHz核磁共振儀中分別測(cè)定本品的氫譜和碳譜，見(jiàn)圖3。

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