受控提取供試液的前處理：取上述材料提取液2ml于10ml具塞刻度試管中，用甲醇稀釋至4ml，即得受控提取供試液，同法制備空白溶液。

模擬提取供試液的制備：(1)膠塞：以模擬溶劑I～Ⅳ為提取溶劑，分別按每西林瓶10ml灌裝，加待測膠塞，壓鋁蓋，倒立放置，121℃高壓滅菌lh，放冷至室溫，將各提取液分別合并至燒杯內，得膠塞供試液I～Ⅳ，同法制備空白。(2)EPDM卡箍密封圈：以模擬溶劑I～Ⅳ為提取溶劑，將EPDM卡箍密封圈裝入管道中，灌裝，密封，60℃高溫烘箱放置24h，取出放冷，得EPDM卡箍密封圈供試液I～Ⅳ，同法制備空白。

模擬提取供試液的前處理：取上述模擬提取供試液I～Ⅲ各25ml，分別加入6mol／L鹽酸溶液20、40、80μl，調至pH1.8～2-3，混勻。取甲醇、水各5ml依次活化固相萃取小柱，提取液以流速1.5～2ml／min通過固相萃取小柱，取水20m1淋洗，甲醇4ml洗脫，收集洗脫液于5ml具塞刻度試管，用甲醇定容，即得。取供試液Ⅳ10ml，加入6mol／L鹽酸溶液100μl，調至pH1.2～1.5，加入氯化鈉4g吸水，加入甲基叔丁基醚2ml，渦旋3min，取上清液于10ml具塞刻度試管中，萃取3次，合并上清液，40℃水浴，氮吹至0.5ml，甲醇定容至2m1，即得。制得模擬提取加標供試液Ⅰ～Ⅲ，同法制備空白溶液，色譜柱TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相A為5mmol／L磷酸二氫鉀溶液，B為乙腈：甲醇(9:1)，梯度洗脫(旺8min，A75％；8-12min，A75％-40％：12-25min，A40％：25-27min，A40％-75％；27L-35min，A75％)；流速1.0ml／min；柱溫40℃；檢測波長300nm；進樣量20μl。記錄峰面積，計算目標化合物在3種提取溶劑中的平均回收率(，n=3)，結果見表3。(2)取模擬溶劑Ⅳ10ml，加入低濃度對照品溶液8、20、40μl，搖勻，制得低、中、高濃度加標溶液，受控提取供試液的制備：取橡膠材料約1.0g，剪碎，置于中硼硅玻璃瓶內(規(guī)格100m1)，加入二氯甲烷40ml后密封，(16士5)℃超聲波水浴提取30min，取出放冷，過濾，采用適量二氯甲烷蕩洗容器，濾液及洗液置于100ml量瓶中，同法提取2次，合并濾液并定容，得材料提取液。

受控提取供試液的前處理：取上述材料提取液2ml于10ml具塞刻度試管中，用甲醇稀釋至4ml，即得受控提取供試液，同法制備空白溶液。

模擬提取供試液的制備：(1)膠塞：以模擬溶劑I～Ⅳ為提取溶劑，分別按每西林瓶10ml灌裝，加待測膠塞，壓鋁蓋，倒立放置，121℃高壓滅菌lh，放冷至室溫，將各提取液分別合并至燒杯內，得膠塞供試液I～Ⅳ，同法制備空白。(2)EPDM卡箍密封圈：以模擬溶劑I～Ⅳ為提取溶劑，將EPDM卡箍密封圈裝入管道中，灌裝，密封，60℃高溫烘箱放置24h，取出放冷，得EPDM卡箍密封圈供試液I～Ⅳ，同法制備空白。

模擬提取供試液的前處理：取上述模擬提取供試液I～Ⅲ各25ml，分別加入6mol／L鹽酸溶液20、40、80μl，調至pH1.8～2-3，混勻。取甲醇、水各5ml依次活化固相萃取小柱，提取液以流速1.5～2ml／min通過固相萃取小柱，取水20m1淋洗，甲醇4ml洗脫，收集洗脫液于5ml具塞刻度試管，用甲醇定容，即得。取供試液Ⅳ10ml，加入6mol／L鹽酸溶液100μl，調至pH1.2～1.5，加入氯化鈉4g吸水，加入甲基叔丁基醚2ml，渦旋3min，取上清液于10ml具塞刻度試管中，萃取3次，合并上清液，40℃水浴，氮吹至0.5ml，甲醇定容至2m1，即得。制得模擬提取加標供試液Ⅳ，同法制備空白溶液，按色譜柱TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相A為5mmol／L磷酸二氫鉀溶液，B為乙腈：甲醇(9:1)，梯度洗脫(旺8min，A75％；8-12min，A75％-40％：12-25min，A40％：25-27min，A40％-75％；27L-35min，A75％)；流速1.0ml／min；柱溫40℃；檢測波長300nm；進樣量20μl，記錄峰面積，計算目標化合物在15％乙醇中的平均回收率(n=3)，結果見表3，各目標化合物在模擬介質中的回收率良好，符合方法學驗證要求。

三、討論

本研究建立了HPLC法測定醫(yī)用橡膠中4種添加劑，以膠塞作為醫(yī)用橡膠代表性材料，考察了膠塞中2在不同提取溶劑、提取方法、提取溫度下的提取量，確定了不同用途材料的最佳受控提取條件。

二氯甲烷可使材料發(fā)生充分溶脹，使可提取物快速、充分釋放。超聲與回流提取效果相當，且超聲溫度對提取效率的影響不顯著。通過對膠塞和EPDM卡箍密封圈進行受控提取，發(fā)現(xiàn)1、2、4均從材料基體中溶出，存在浸出風險，需進行進一步的模擬提取。在模擬提取試驗中，1、2浸出量在15％乙醇溶液中濃度最高，說明1、2在脂溶性強的藥物制劑中遷移的風險較大。此外，2的浸出量與介質的pH呈現(xiàn)一定相關性，在氫氧化鈉溶液(pH11.0)中浸出量較高，說明在堿性環(huán)境中，2可能更容易浸出。

在整個藥品生命周期內，醫(yī)用橡膠與藥品接觸情況(震蕩、高溫、輻照等)多樣，藥品處方中的輔料同樣可能與橡膠發(fā)生相互作用。理想的相容性研究，應選用具體的藥物處方或空白藥物處方(不含主藥)作為提取溶劑。然而，市面上藥物品種繁多，合理的模擬提取試驗將會大大減少相容性研究的工作量。本研究考察了藥品pH值、脂溶性對醫(yī)用橡膠中4種添加劑浸出量的影響。根據(jù)不同用途橡膠，模擬其與藥品的接觸情況，選用滅菌和高溫提取作為膠塞和EPDM卡箍密封圈的模擬提取條件，為藥品與醫(yī)用橡膠的相容性研究提供了參考。

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