氰化物是含氰基的一類化合物的總稱，是廣泛存在于自然界的劇毒物質(zhì)，可抑制組織細(xì)胞生物氧化酶活性，阻滯三羧酸循環(huán)，造成“細(xì)胞內(nèi)窒息”。生活中氰化物中毒以口服為主(如誤食含氰果仁）。GB5009.36—2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)　食品中氰化物的測(cè)定》中提及的定量檢測(cè)方法主要有分光光度法及氣相色譜法，但并未包含杏仁中的氰化物檢測(cè)。在食品監(jiān)測(cè)工作中，杏仁中氰化物的檢測(cè)一般采用氣相色譜法，但該方法精密度偏差過大且偏差方向難控，方法中因試劑等影響造成批次間電子俘獲（ECD）響應(yīng)重復(fù)性差。目前連續(xù)流動(dòng)儀測(cè)定氰化物的方法廣泛應(yīng)用于職業(yè)衛(wèi)生檢測(cè)、環(huán)境檢測(cè)及食品檢測(cè)等眾多領(lǐng)域。韋小燁等建立的鮮木薯中氰化物的流動(dòng)注射測(cè)定法線性范圍寬、重復(fù)性好，對(duì)于油脂含量較少的樣品，可以直接水解提取，取上清液過濾后進(jìn)行分析。然而，對(duì)于含有大量油脂的樣品，如杏仁，如何在前處理過程中除去干擾，同時(shí)做到高回收率及高精密度等結(jié)果的測(cè)定方法尚未見報(bào)道。結(jié)合食品監(jiān)測(cè)方法及部分研究成果，研究人員建立了連續(xù)流動(dòng)分析儀測(cè)定氰化物的方法，杏仁樣品經(jīng)前處理后，儀器密閉蒸餾出氫氰酸，與氯胺T反應(yīng)生成氯化氰，以異煙酸–巴比妥酸作染料，代替異煙酸–吡唑啉酮規(guī)避苯甲醛與吡唑啉酮反應(yīng)產(chǎn)生白色混濁的干擾，生成物于600nm處比色定量。筆者建立連續(xù)流動(dòng)分析法測(cè)定杏仁中的氰化物，采用正己烷萃取除去油脂，濾膜過濾除去固體顆粒，拓展了杏仁中氰化物檢測(cè)的方向。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

連續(xù)流動(dòng)分析儀：SKALARSAN5000型，帶有四針自動(dòng)進(jìn)樣器及循環(huán)冷卻水系統(tǒng)，荷蘭SKALAR公司。氣相色譜儀：安捷倫7890A，帶有CTC頂空進(jìn)樣器及ECD檢測(cè)器，美國(guó)安捷倫科技公司。超聲清洗儀；KQ2200DB型數(shù)控，昆山超聲儀器有限公司。電子分析天平：AL204–IC型，感量為0.001g，瑞士梅特勒–托利多公司。低溫冷凍離心機(jī)；SIGMA2–16K型，德國(guó)希格瑪公司。氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液：50mg/L，編號(hào)為GBW（E）080115，中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院。水相針式濾器（聚醚砜）：13mm×0.45μm。氫氧化鈉、鄰苯二甲酸氫鉀、氯胺T、1，3-二甲基巴比妥酸、異煙酸、正己烷：分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。鹽酸：分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠。月桂醇聚氧乙烯醚（Brij35）：CAS號(hào)為9002–92–0，荷蘭SKALAR公司。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 溶液配制

pH5.2的緩沖溶液：稱取氫氧化鈉2.3g溶解于500mL超純水中，加入20.5g鄰苯二甲酸氫鉀，加超純水至975mL后，分別用1mol/L的鹽酸和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.2，定容至1L后加入1mL月桂醇聚氧乙烯醚，充分溶解后過濾，于棕色瓶中冷藏，待用。

氯氨T溶液：稱取氯胺T2.0g，用超純水定容至1000mL，過濾后使用。

顯色劑：稱取氫氧化鈉7g于約500mL超純水中，再加入1，3-二甲基巴比妥酸16.8g、異煙酸13.6g，加入970mL超純水溶解，用1mol/L的鹽酸和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.2。

氰化物系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：吸取2mL氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液于50mL容量瓶中，用超純水定容至標(biāo)線，得2.0mg/L氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液，再分別吸取0、0.25、0.50、1.0、1.5、2.5、5.0、12.5mL上述2.0mg/L氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液于比色管中，用超純水定容至25.0mL，配制成氰化物質(zhì)量濃度分別為0.02、0.04、0.08、0.12、0.20、0.40、1.00、2.00mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3 樣品前處理

低溫下準(zhǔn)確稱取1.000g（精確至0.001g）已粉碎均勻的樣品于樣品管中，加入約40mL的超純水，立即蓋緊密封，超聲提取3次，每次提取10min，每次提取間隔為1h，以防止其內(nèi)部液體溫度過高產(chǎn)生膨脹，繼而頂出密封蓋，從而造成樣品損失。于25～40℃放置48h，使樣品充分水解（應(yīng)充分振搖，使樣品無結(jié)塊，振搖時(shí)應(yīng)按住樣品管蓋，防止樣品溢出），再把樣品管放入冰箱于4℃冷藏2h后，以10000r/min冷凍離心10min，取出上清液，在樣品管中加入超純水10mL，振搖，冷凍離心，將取出的上清液合并后，加入10mL正己烷，充分振搖，靜置分層后舍去正己烷，水層經(jīng)過0.45μm的水系過濾膜過濾，濾液定容至100mL，加入氫氧化鈉0.2g使氫氧化鈉質(zhì)量濃度為2g/L，冷藏，待混勻，待測(cè)。

1.4 加標(biāo)樣品制備

稱取6個(gè)均勻樣品1.000g（精確至0.001g）于樣品管中，分3個(gè)批次加入50mg/L氰化物標(biāo)準(zhǔn)溶液0.2、0.7、1.0mL，同1.3方法進(jìn)行處理，分別得到質(zhì)量濃度為0.1、0.35、0.5mg/L的加標(biāo)樣品。

1.5 儀器工作條件

進(jìn)樣時(shí)間：80s；沖洗時(shí)間：90s；探測(cè)峰起始值：0.01AbS；峰形寬度：30%（5%～100%）；加熱器溫度：155、40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：600nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 氫氧化鈉加入時(shí)機(jī)的優(yōu)化

氫氧化鈉的加入時(shí)機(jī)，分為在提取初和提取后加入。在提取初加入氫氧化鈉可以更好的保留樣品中氰化物的含量，但實(shí)際操作中，在提取初加入氫氧化鈉易致使樣品“膠質(zhì)化”嚴(yán)重，溶液不易經(jīng)0.45μm的水系過濾膜過濾，故選擇在低溫提取后加入氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。

相關(guān)鏈接：鄰苯二甲酸氫鉀，3-二甲基巴比妥酸，聚氧乙烯醚，氫氧化鈉

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