2.2 萃取劑及其用量的選擇

2.2.1 萃取劑

對(duì)于油脂含量較低的樣品，可直接經(jīng)0.45μm的水系過(guò)濾膜過(guò)濾測(cè)定，但杏仁中油脂含量高達(dá)50.33%，易造成濾膜堵塞，不宜過(guò)濾。在了解杏仁中脂肪及蛋白質(zhì)的含量及特性后，選擇易過(guò)濾樣品，經(jīng)正己烷處理后測(cè)定，結(jié)果數(shù)據(jù)見表1。由表1可知，樣品加標(biāo)回收率為98.0%～104.7%，符合測(cè)定要求，正己烷對(duì)于測(cè)定結(jié)果并未產(chǎn)生偏差影響，因此選用正己烷為萃取劑。

2.2.2 正己烷用量

分別采用5、10、20mL正己烷完成萃取過(guò)程，所得試驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知，樣品加標(biāo)回收率為98.3%～97.3%，符合測(cè)定要求。經(jīng)t檢驗(yàn)，在此樣本量下，分別加入5、10、20mL正己烷后，結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但在實(shí)際操作中，為保證油脂量高樣品的萃取效率，推薦加入10mL正己烷進(jìn)行萃取。

2.3 樣品放置時(shí)間及溫度選擇

參照食品風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)中氣相色譜法的前處理?xiàng)l件，為了使樣品能夠水解地更加充分，將樣品于25～40℃條件下放置48h密封水解，樣品充分水解后，放至冰箱冷藏2h再離心，可使樣品更好地脂水分離，且提高了正己烷的萃取效果，因此樣品水解溫度為25～40℃，放置時(shí)間為48h。

2.4 線性方程與檢出限

2.4.1 線性方程

在1.5儀器工作條件下測(cè)定氰化物系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以氰化物質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，吸光度（y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，若取0～2.00mg/L濃度區(qū)間，線性方程為y=0.00064x+0.00236，相關(guān)系數(shù)（r）為0.9994；若取0～1.00mg/L濃度區(qū)間，線性方程為y=0.00066x–0.00055，相關(guān)系數(shù)（r）為0.9999。比較發(fā)現(xiàn)，濃度過(guò)高易造成峰與峰之間的距離過(guò)小，峰面積疊加掩蓋，導(dǎo)致曲線r值降低，因此連續(xù)流動(dòng)分析法測(cè)定氰化物標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的線性范圍為0～1.0mg/L，超出范圍的樣品需稀釋后進(jìn)行測(cè)定。

2.4.2 檢出限

采用連續(xù)流動(dòng)分析法測(cè)定空白樣品11次，若杏仁取樣為1.000g，定容100mL時(shí)，用2.764倍標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算檢出限，檢出限為0.05mg/kg，定量限為0.15mg/kg。

2.5 回收率與精密度

在已知含量的樣品溶液中加入1.4中低、中、高濃度的加標(biāo)樣品溶液，在1.5儀器工作條件下重復(fù)測(cè)定6次，試驗(yàn)結(jié)果見表3。由表3可知，平均回收率為98.0%～104.7%，測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.56%～1.34%，表明該方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，滿足檢測(cè)要求。

2.6比對(duì)試驗(yàn)

連續(xù)流動(dòng)分析方法與氣相色譜法從以下幾個(gè)方面進(jìn)行比對(duì)：

（1）開機(jī)穩(wěn)定時(shí)間、樣品用量及穩(wěn)定性。連續(xù)流動(dòng)分析儀開機(jī)到穩(wěn)定耗時(shí)較短，從進(jìn)樣蒸餾到測(cè)定僅需約0.5h，全程密閉蒸餾加試劑，連續(xù)進(jìn)樣后，每個(gè)樣品分析時(shí)間約為2min，每次進(jìn)樣為2mL，在分析過(guò)程中序列可以連續(xù)加入后續(xù)樣品。氣相色譜儀穩(wěn)定耗時(shí)較連續(xù)流動(dòng)分析儀長(zhǎng)，每個(gè)樣品分析時(shí)間約為10min，每次進(jìn)樣為10mL，且在現(xiàn)階段技術(shù)條件下，樣品序列編輯運(yùn)行后不能隨時(shí)加入后續(xù)樣品，需重新編輯序列及測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。樣品量少時(shí)，二者耗時(shí)區(qū)別不大，隨著樣品量增加，連續(xù)流動(dòng)法測(cè)定耗時(shí)明顯較氣相色譜法短。連續(xù)流動(dòng)法在樣品提取后加入了氫氧化鈉以保留氰基，使樣品中被測(cè)物質(zhì)在水中穩(wěn)定性增加，因此從耗時(shí)耗量及樣品穩(wěn)定性上看，連續(xù)流動(dòng)法優(yōu)于氣相色譜法。

（2）線性范圍。連續(xù)流動(dòng)法測(cè)定過(guò)程中氰化物濃度過(guò)高易造成峰過(guò)大，峰間距過(guò)小，峰面積疊加掩蓋，從而導(dǎo)致測(cè)定值準(zhǔn)確度低，因此連續(xù)流動(dòng)分析法測(cè)定氰化物的質(zhì)量濃度應(yīng)在0～1.0mg/L范圍內(nèi)，超出線性范圍的樣品需稀釋后測(cè)定。氣相色譜法的線性范圍超過(guò)1.0mg/L后，相關(guān)系數(shù)降低，在0～1.0mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，連續(xù)流動(dòng)法的r值為0.9999，優(yōu)于氣相色譜法r值（0.9986），因此在此濃度范圍內(nèi)連續(xù)流動(dòng)法優(yōu)于氣相色譜法。

（3）檢出限。氣相色譜ECD檢測(cè)器對(duì)氰基響應(yīng)靈敏度高，檢出限較連續(xù)流動(dòng)法低。雖氣相色譜法檢出限優(yōu)于連續(xù)流動(dòng)法，但兩法檢出限均能滿足檢測(cè)要求。

（4）回收率。兩種方法的回收率均能滿足檢測(cè)要求，但氣相色譜法回收率跨度遠(yuǎn)大于連續(xù)流動(dòng)分析法，且方法的不可控因素更多(如氯胺T)，因此，在0～1.0mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)連續(xù)流動(dòng)法回收率要優(yōu)于氣相色譜法。

（5）精密度。在0～1.0mg/L濃度范圍內(nèi)，對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行用F檢驗(yàn)，低、中、高濃度組的F值均大于F值表中F(5，5)=5.05，即連續(xù)流動(dòng)分析法的精密度優(yōu)于氣相色譜法。

連續(xù)流動(dòng)分析法與氣相色譜法比對(duì)結(jié)果如表4所示。

3 結(jié)語(yǔ)

建立了連續(xù)流動(dòng)分析法測(cè)定杏仁中的氰化物。樣品超聲過(guò)程應(yīng)密封且時(shí)間不能連續(xù)過(guò)長(zhǎng)，以防止樣品過(guò)熱造成噴濺；樣品水解后離心冷藏（4～8℃）時(shí)間應(yīng)在30min以上，利于油脂分離；樣品經(jīng)正己烷萃取，并在濾液中加入氫氧化鈉，以增加氰化物在水溶液中的穩(wěn)定性；試劑在測(cè)定過(guò)程中均在較密閉空間內(nèi)。連續(xù)流動(dòng)分析的精密度、加標(biāo)回收率等較氣相色譜法的誤差小，雖檢出限較氣相色譜法略高，但在實(shí)際工作中能滿足檢測(cè)要求，因此連續(xù)流動(dòng)儀測(cè)定杏仁中氰化物的方法整體優(yōu)于氣相色譜法，其在線分析時(shí)間更短，穩(wěn)定性及安全性更好，適于推廣應(yīng)用。

相關(guān)鏈接：正己烷，氫氧化鈉，氰化物

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