1.2.3前處理

稱取樣品(肝臟、腎臟、肌肉)2g(精確至0.01g)于50mL聚丙烯離心管中，加入混合同位素內(nèi)標工作液100μL，冉加入2mL水，渦旋混合1min。加入0.2％鹽酸-乙腈溶液10mL，200r/min振蕩10min，加入2g氯化鈉，再振蕩10min，5000r/min離心5min。將全部上清液轉(zhuǎn)移至15mL聚丙烯離心管并40℃氮吹至約5mL，加入100mgPSA、80mgC₁₈、30mgGCB，渦旋混合1min，振蕩10min，5000r/min離心10min。取全部上清液至另一個15mL聚丙烯離心管中，40℃氮吹至近干，1mL甲醇定容，15000r/min離心5min，上清液供上機測定。

為減少實驗過程中帶來的污染及背景干擾，全程盡量避免使用聚四氟乙烯器皿而使用聚丙烯材質(zhì)器皿。

1.3方法學(xué)考察

1.3.1基質(zhì)效應(yīng)

本實驗采用標準工作溶液的配制：準確移取13種PFCs混合標準工作液、混合同位素內(nèi)標工作液適量，用甲醇配制濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL(同位素內(nèi)標MPFOA濃度為1.5ng/mL、MPFOS濃度為3.0ng/mL)的系列標準工作溶液。MPFOA是定量9種PFCAs的同位素內(nèi)標，MPFOS是定量4種PFSAs的同位素內(nèi)標配制的系列標準工作溶液，按照標準工作溶液的配制：準確移取13種PFCs混合標準工作液、混合同位素內(nèi)標工作液適量，用甲醇配制濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL(同位素內(nèi)標MPFOA濃度為1.5ng/mL、MPFOS濃度為3.0ng/mL)的系列標準工作溶液。MPFOA是定量9種PFCAs的同位素內(nèi)標，MPFOS是定量4種PFSAs的同位素內(nèi)標條件測定，繪制標準曲線。同時，選取9種空白樣品基質(zhì)(豬肉、豬肝、豬腎、牛肉、牛肝、牛腎、羊肉、羊肝、羊腎)不加同位素內(nèi)標按照稱取樣品(肝臟、腎臟、肌肉)2g(精確至0.01g)于50mL聚丙烯離心管中，加入混合同位素內(nèi)標工作液100μL，冉加入2mL水，渦旋混合1min。加入0.2％鹽酸-乙腈溶液10mL，200r/min振蕩10min，加入2g氯化鈉，再振蕩10min，5000r/min離心5min。將全部上清液轉(zhuǎn)移至15mL聚丙烯離心管并40℃氮吹至約5mL，加入100mgPSA、80mgC₁₈、30mgGCB，渦旋混合1min，振蕩10min，5000r/min離心10min。取全部上清液至另一個15mL聚丙烯離心管中，40℃氮吹至近干，1mL甲醇定容，15000r/min離心5min，上清液供上機測定。

采用空白基質(zhì)溶液作為溶劑配制相同濃度范圍的系列基質(zhì)標準工作溶液，按照色譜柱：AtlantisT3色譜柱(2.1mmx150mm，3μm)；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10μL；流動相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨溶液(B)；梯度洗脫程序：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B繪制標準曲線。通過比較基質(zhì)標準曲線與溶劑標準曲線方程斜率的比值來判斷基質(zhì)效應(yīng)的影響。

1.3.2線性范同、檢出限、定量限

0.05、0.1、0.5、l、2、5、10ng/mL系列標準工作溶液按照色譜柱：AtlantisT3色譜柱(2.1mmx150mm，3μm)；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10μL；流動相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨溶液(B)；梯度洗脫程序：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B。電噴霧離子源(ESI)；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；噴霧電壓：3500V；蒸汽溫度；290℃；離子傳輸管溫度：270℃；鞘氣流速：30arb；輔助氣流速：10arb；二級碰撞氣：氬氣；碰撞氣壓力：1.5mTorr條件測定，同位素內(nèi)標法定量，以各個目標物與對應(yīng)的同位素內(nèi)標物的峰斷積比值為縱坐標、以各目標物濃度與與對應(yīng)的同位素內(nèi)標物的濃度比值為橫坐標，求線性方程及相關(guān)系數(shù)。按照GB/T27417-2017《合格評定化學(xué)分析方法確認和驗證指南》中5.4條款規(guī)定，在豬、牛、羊的肝臟、腎臟、肌肉空白樣品基質(zhì)中添加預(yù)估最低可接受濃度0.15μg/kg，每個樣品平行測定10次，計算方法檢出限(LOD)=0+3SD、方法定量限(LOQ)=0+10SD。

1.3.3回收率和精密度

按照GB/T27404-2008《實驗室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢驗要求》，對于未制定MRL限量的物質(zhì)，回收率實驗應(yīng)在方法測定低限、常見限量指標、一個合理的添加濃度三個水平進行。本實驗采用在豬肝、牛肝、羊肝、豬腎、牛腎、羊。腎、豬肉、牛肉、羊肉9個不同基質(zhì)空白樣品中添加0.2、1和2μg/kg三個濃度，每個濃度6個平行，稱取樣品(肝臟、腎臟、肌肉)2g(精確至0.01g)于50mL聚丙烯離心管中，加入混合同位素內(nèi)標工作液100μL，冉加入2mL水，渦旋混合1min。加入0.2％鹽酸-乙腈溶液10mL，200r/min振蕩10min，加入2g氯化鈉，再振蕩10min，5000r/min離心5min。將全部上清液轉(zhuǎn)移至15mL聚丙烯離心管并40℃氮吹至約5mL，加入100mgPSA、80mgC18、30mgGCB，渦旋混合1min，振蕩10min，5000r/min離心10min。取全部上清液至另一個15mL聚丙烯離心管中，40℃氮吹至近干，1mL甲醇定容，15000r/min離心5min，上清液供上機測定。色譜柱：AtlantisT3色譜柱(2.1mmx150mm，3μm)；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進樣量：10μL；流動相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨溶液(B)；梯度洗脫程序：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B。電噴霧離子源(ESI)；掃描方式：負離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；噴霧電壓：3500V；蒸汽溫度；290℃C；離子傳輸管溫度：270℃；鞘氣流速：30arb；輔助氣流速：10arb；二級碰撞氣：氬氣；碰撞氣壓力：1.5mTorr；同時做空白實驗，均扣除本底值后計算同收率及精密度。

1.4數(shù)據(jù)處理

采用美國ThermoFisherScientific公司Xcalibur3.0軟件、Origin8.0版本進行數(shù)據(jù)處理。

2.結(jié)果與分析

2.1色譜和質(zhì)譜條件優(yōu)化

2.1.1色譜條件優(yōu)化

PFCs具有親水性和疏水性以及一定的表面活性和極性，相關(guān)標準及文獻多數(shù)采川較低硅羥基活性填料的C18液相色譜柱分離、乙腈-乙酸銨水溶液或甲醇-乙酸銨水溶液流動相梯度洗脫，來實現(xiàn)這類化合物的良好分離。本實驗重點考察兩種流動相體系乙腈-乙酸銨水溶液、甲醇-乙酸銨水溶液對PFCs及同位素內(nèi)標的靈敏度差異。通過比較相同濃度標液峰而積(見圖1)發(fā)現(xiàn)，兩種流動相梯度洗脫條件下，15種物質(zhì)峰形均尖銳對稱。與乙腈-乙酸銨水溶液流動相相比，以甲醇-乙酸銨水溶液為流動相時，除PFBA峰面積減少29％之外，其他14種物質(zhì)的色潛峰峰面積增加了22％～151％。所以，本實驗選擇峰而積較大、靈敏度較高的甲醇-乙酸銨水溶液作為流動相體系。

13種PFCs及2種同位素內(nèi)標物是羧酸或磺酸鹽，在流動相中加入乙酸銨，能使溶液保持一定的pH及離子強度，可以有效地增強電噴霧離子化響應(yīng)值，并減少溶劑效應(yīng)，改善峰形。但也有研究表明，較高濃度的乙酸銨對質(zhì)譜檢測有較強的抑制作用。標準及文獻中常見的乙酸銨濃度為1～10mmol/L，本實驗以甲醇和水為溶劑，分別配制相同濃度的乙酸銨甲醇溶液及乙酸銨水溶液。通過比較1、2.5、5、10mmol/L四個不同濃度條件下的測定結(jié)果(見圖2)可以看出，PFOS和PFDoA在1、2.5mmol/L濃度的峰面積較高且?guī)缀跸嗟?，其?3種物質(zhì)均在乙酸銨濃度為2.5mmol/L時，色譜峰面積達到最大值。

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