基于質(zhì)量標(biāo)志物篩選的成分傳遞與溯源、特有性、復(fù)方配伍、有效性和可測(cè)性五個(gè)原則，綜合辨析舒筋活血膠囊中的質(zhì)量標(biāo)志物?；?ldquo;傳遞與溯源”原則，篩選由原藥材傳遞至復(fù)方制劑的化合物；基于特有性原則，篩選復(fù)方中的特有性指標(biāo)成分；基于配伍原則，依據(jù)其原藥材在復(fù)方中的君臣佐使配伍規(guī)律歸屬化合物；基于可測(cè)性原則，根據(jù)藥典和文獻(xiàn)，結(jié)合含量評(píng)價(jià)各指標(biāo)成分的可測(cè)性；基于有效性原則，通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)舒筋活血膠囊治療骨質(zhì)疏松癥作用機(jī)制研究，作為有效性的評(píng)價(jià)指標(biāo)。將上述篩選的化學(xué)成分作為候選質(zhì)量標(biāo)志物，繪制“蛛網(wǎng)模式”圖，按綜合得分排序確定該復(fù)方的關(guān)鍵質(zhì)量標(biāo)志物。基于五原則繪制“蛛網(wǎng)模式”圖辨析出羥基紅花黃色素A、絡(luò)石苷、刺五加苷B、α-香附酮、原兒茶酸、原兒茶醛和4-甲氧基水楊醛，作為舒筋活血膠囊的質(zhì)量標(biāo)志物。

舒筋活血膠囊（Shujin Huoxue Capsules，SHC）是由紅花、香附、香加皮、槲寄生、絡(luò)石藤等十味中藥組成的復(fù)方制劑，具有舒筋活絡(luò)、活血散瘀之功效，臨床上用于筋骨疼痛、肢體拘攣、腰背酸痛和跌打損傷等。該產(chǎn)品以現(xiàn)代中醫(yī)藥理論為基礎(chǔ)，采用先進(jìn)生產(chǎn)工藝，作為某中藥企業(yè)的暢銷(xiāo)專(zhuān)利產(chǎn)品，年產(chǎn)值在5000萬(wàn)以上，且市場(chǎng)銷(xiāo)售量呈逐年上升趨勢(shì)。但是，該處方組成復(fù)雜，現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅采用薄層色譜法對(duì)香附、紅花和香加皮進(jìn)行定性鑒別，HPLC法測(cè)定4-甲氧基水楊醛的含量。從質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的科學(xué)性角度分析，舒筋活血膠囊的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)仍存在諸多問(wèn)題，單一指標(biāo)成分難以表征該復(fù)方質(zhì)量屬性的完整性，需要進(jìn)行合理的標(biāo)準(zhǔn)提升。

由于制藥原料的來(lái)源不同、配伍不同、工藝不同，使中藥復(fù)方制劑中的化學(xué)成分種類(lèi)和含量波動(dòng)較大，從而增加了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建立的復(fù)雜性。中藥質(zhì)量標(biāo)志物（Q-marker）是2016年劉昌孝院士首次提出針對(duì)中藥產(chǎn)品質(zhì)量控制的新理念。Q-marker的提出有利于建立質(zhì)量溯源及全程控制中藥質(zhì)量體系，提高了中藥有效性-物質(zhì)基礎(chǔ)-質(zhì)量控制標(biāo)志性成分的關(guān)聯(lián)度。Q-marker的重要意義是聚焦中藥質(zhì)量屬性的本質(zhì)特征以及質(zhì)量評(píng)價(jià)，以“五原則”統(tǒng)領(lǐng)復(fù)方中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制：①質(zhì)量評(píng)價(jià)體系與有效性的關(guān)聯(lián)和專(zhuān)有性的特點(diǎn)，通過(guò)“有效”和“特有”的原則反映；②“配伍環(huán)境”能夠使質(zhì)量研究回歸和還原到中醫(yī)藥理論和臨床作用的本質(zhì)特點(diǎn)；③以“可測(cè)性”的基本原則和研究思路再現(xiàn)中藥質(zhì)量屬性的全貌；④以“質(zhì)量傳遞與溯源”指導(dǎo)和應(yīng)用全程質(zhì)量控制體系的建立。本文基于上述五原則從化學(xué)成分傳遞與追溯、配伍原則、特有性、有效性、可測(cè)性五個(gè)方面綜合辨析舒筋活血膠囊的Q-marker作為新的指標(biāo)成分。

1儀器與試藥

1.1儀器與設(shè)備

Agilent Technologies 1260 infinity II高效液相色譜儀，萬(wàn)分之一分析天平(BS124，上海菁海儀器有限公司)，離心機(jī)（LD4-2A，北京京立離心機(jī)有限公司），超聲波清洗機(jī)（PS-40A，深圳市深華泰超聲清洗設(shè)備有限公司），電熱恒溫水槽（HH-4，常州澳華儀器有限公司），玻璃夾套加熱裝置(自制)。

Cytoscape3.6.1、整合藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)（http://www.tcmip.cn/TCMSP/index.php）、Genecards（https://www.genecards.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)、Uniprot（https://www.uniprot.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)、DAVID（https://david.ncifcrf.gov/）數(shù)據(jù)庫(kù)、軟件Rsudio1.2.5042、String（https://string-db.org/cgi/input.pl）數(shù)據(jù)庫(kù)、WebGestalt（http://www.webgestalt.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)。

1.2試劑與藥材

舒筋活血膠囊由華東藥業(yè)集團(tuán)康潤(rùn)藥業(yè)有限公司提供（批號(hào)：180111，中國(guó)杭州）。絡(luò)石苷（批號(hào)110820-201607）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院，羥基紅花黃色素A（批號(hào)17082905）、芒柄花黃素（批號(hào)17285290）和刺五加苷B（批號(hào)18072465）均購(gòu)自成都曼思特生物科技有限公司。甲醇和乙腈（色譜純，TEDIA），甲酸、磷酸和乙醇（色譜純，成都科隆化學(xué)試劑有限公司），純凈水（杭州娃哈哈有限公司）。

2方法與結(jié)果

2.1基于“傳遞與溯源”原則辨析SHC潛在的Q-marker

查閱相關(guān)文獻(xiàn)從10味原料藥材中共辨識(shí)出560多種化合物。其中袁琴琴等總結(jié)出紅花藥材目前辨識(shí)出75個(gè)化合物，包括黃酮類(lèi)、糖類(lèi)、黃色素、脂肪酸類(lèi)、酚酸及香豆素類(lèi)等。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，香附發(fā)揮藥理作用的主要成分為揮發(fā)油物質(zhì)，目前辨識(shí)出140多種，主要包括多種單萜、倍半萜及其氧化物；還包括黃酮類(lèi)、糖類(lèi)等化合物。狗脊目前辨識(shí)出80多種化合物，主要是揮發(fā)油類(lèi)、蕨素類(lèi)、芳香族類(lèi)、酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)、皂苷類(lèi)、糖苷類(lèi)及氨基酸類(lèi)成分。曹朵等利用柱色譜技術(shù)及波譜分析等方法鑒定出槲寄生中9種化合物，包括糖苷類(lèi)和黃酮苷類(lèi)等物質(zhì)。楊雪等根據(jù)現(xiàn)有文獻(xiàn)總結(jié)出香加皮中121種化合物，主要包括54種C21甾體類(lèi)、5種強(qiáng)心苷類(lèi)、12種三萜類(lèi)、12種醛類(lèi)以及低聚糖、小分子脂肪酸、黃酮等38種其他化合物。賈有梅等通過(guò)親水/反相二維制備液相色譜分離純化出絡(luò)石藤中14種化學(xué)成分，主要包含木脂素類(lèi)、黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、甾醇類(lèi)和生物堿類(lèi)等成分。蔡卓亞等總結(jié)出伸筋草中159種化合物，主要類(lèi)型包括生物堿類(lèi)、三萜類(lèi),少量蒽醌類(lèi)成分及揮發(fā)油等，其中生物堿類(lèi)46種、三萜類(lèi)28種、蒽醌類(lèi)三種及揮發(fā)油類(lèi)81個(gè)化合物。澤蘭葉的主要化學(xué)成分揮發(fā)油，鄭勇龍等利用氣質(zhì)聯(lián)用法分析出共48種揮發(fā)油類(lèi)化合物。目前從雞血藤中分離鑒定出的化學(xué)成分約100余種,劉曉艷等分離鑒定出23個(gè)黃酮類(lèi)化合物、1個(gè)色原酮類(lèi)化合物和11個(gè)酚酸酯類(lèi)、1個(gè)香豆素類(lèi)、7個(gè)苯丙素類(lèi)、6個(gè)萜類(lèi)和2生物堿類(lèi)化合物。

本課題組基于HPLC-QTOF-MS/MS鑒定舒筋活血膠囊的化學(xué)成分。通過(guò)Scifinder數(shù)據(jù)庫(kù)及相關(guān)文獻(xiàn)檢索，建立舒筋活血膠囊中所含化學(xué)成分的化學(xué)名稱(chēng)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量及一級(jí)碎片等信息數(shù)據(jù)庫(kù)。利用Peakview軟件，根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜、二級(jí)質(zhì)譜及裂解規(guī)律共鑒定了舒筋活血膠囊中27個(gè)化合物，主要包括酚酸類(lèi)、木質(zhì)素類(lèi)、黃酮類(lèi)及苯丙素類(lèi)化合物。舒筋活血膠囊的(-)ESI-MS和(+)ESI-MS的質(zhì)譜總離子流圖見(jiàn)圖1。原藥材中含有的化合物有27個(gè)可以“傳遞”到制劑中，具體信息見(jiàn)表1所示。

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