全氟化合物(perfluorinatedcompounds，PFCs)是化合物分子巾與碳原子連接的氫原子全部被氟原子取代并帶有不同功能團(tuán)的一類人工合成有機(jī)化合物。PFCs主要包括全氟烷基羧酸類(PFCAs)、全氟烷基磺酸類(PFSAs)、全氟烷基磺酰胺類(PFOSAs)、全氟調(diào)聚醇(FTOHs)、全氟磷酸及其酯等，其中全氟烷基辛酸(PFOA)和全氟烷基磺酸(PFOS)是兩種最受關(guān)注的八碳鏈PFCs。全氟化合物的C-F共價鍵具有極高的化學(xué)鍵能，不易被水解、光解或生物降解，可在環(huán)境中持久性存在、可長距離傳輸、可沿生物鏈積累放大，是國際上備受關(guān)注的新型有機(jī)污染物。近年來，在全球生態(tài)環(huán)境系統(tǒng)、生物體、人體、食品等多種介質(zhì)中均有檢出。鑒于PFCs廣泛存在性以及具有神經(jīng)毒性、生殖毒性和免疫毒性等毒性效應(yīng)，國內(nèi)外研究學(xué)者開始關(guān)注PFCs對人體的健康風(fēng)險，并普遍認(rèn)為膳食暴露是人類攝入PFCs的重要途徑。

人類膳食中水產(chǎn)品、乳及乳制品、肉及肉制品、果蔬等均有不同程度PFCs污染。盡管人們已經(jīng)認(rèn)識到PFCs可能帶來的膳食攝入風(fēng)險，但國內(nèi)外關(guān)于食品中PFCs的限量標(biāo)準(zhǔn)仍是空白。基于PFCs易與蛋白質(zhì)結(jié)合而累積于生物體組織器官的富集特性，膳食占比較大的動物源性食品，特別是肝臟、腎臟、肌肉等蛋白質(zhì)含量較高的器官組織中寓集現(xiàn)象普遍但含量較低(通常在μg/kg級別)。因此，快速、準(zhǔn)確、靈敏的動物源性產(chǎn)品中多種類PFCs含量的檢測方法可以為人群暴露于PFCs風(fēng)險評估提供重要技術(shù)支持。

目前，PFCs檢測方法主要有氣相色譜法(GC)、氣相色譜質(zhì)譜法(GC-MS)、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(GC-MS/MS)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)?；赑FCs極性大、沸點(diǎn)高、不能直接氣化的特點(diǎn)，GC、GC-MS、GC-MS/MS法在分析前需要對PFCs進(jìn)行衍生化，但處理過程繁瑣，易引入污染和干擾物質(zhì)，這使得上述三種方法在應(yīng)用上受到局限。HPLC-MS/MS的多反應(yīng)監(jiān)測模式(multi-reactionmonitoring，MRM)，背景干擾少，選擇性好、檢出限低，在痕量PFCs檢測分析中具有顯著優(yōu)勢。HPLC-MS/MS對應(yīng)的前處理方法，主要采用離子對液液萃取、液固萃取、堿消解提取結(jié)合弱陰離子交換柱WAX或HLB固相萃取柱凈化，但是這些傳統(tǒng)的前處理方法步驟多、耗時長，重現(xiàn)性差。本實(shí)驗(yàn)采用酸化乙腈提取輔以分散固相萃取技術(shù)(QuEChERS)進(jìn)行樣品前處理。QuEChERS是目前廣泛應(yīng)用于食品中目標(biāo)物測定的方法，也已逐步應(yīng)用到動物源性食品中PFCs檢測，郭萌萌等采用十八烷基鍵合硅膠(C18)和石墨化碳黑(GCB)分散固相萃取法測定水產(chǎn)品中23種全氟化合物，朱萍萍等、何建附等、白文薈等采用C18、GCB和N-丙基乙二胺(PSA)3種混合吸附劑凈化法測定羊肝、牛肝、豬肝和豬肉中多種全氟化合物。上述改進(jìn)的QuEChERS-LC-MS/MS方法都具有合理的回收率及較高的靈敏度，但存在樣品基質(zhì)類型不全或檢測項日少等缺點(diǎn)。我國人群膳食暴露頻繁且PFCs寓集普遍的動物源性食品(豬、牛、羊)的肝臟、腎臟、肌肉中PFCAs和PFSAs多種類PFCs同時檢測的方法報道較少。同時，國內(nèi)外頒布的檢測方法標(biāo)準(zhǔn)也只關(guān)注了食品中最典型的PFOA和PFOS，而對同樣具有危害性的其它PFCs沒有涉及。因此，本實(shí)驗(yàn)采用酸化乙腈提取，C18、GCB和PSA混合吸附劑分散同相萃取凈化，UPLC-MS/MS檢測9種基質(zhì)(豬、牛、羊的肝臟、腎臟、肌肉)13種PFCs(包括9種PFCAs，4種PFSAs)，同位素內(nèi)標(biāo)法定量。該方法步驟簡化、定量準(zhǔn)確、靈敏度高，可廣泛應(yīng)于動物源性食品中多種PFCs的分析。

1.材料與方法

1.1材料與儀器

甲醇、乙腈、正己烷色譜純，德國Merck公司；甲酸、乙酸銨色譜純，美國FisherChemical公司；鹽酸、氯化鈉優(yōu)級純，天津康科德公司；C18、GCB40～60μm，北京迪馬公司；PSA40～63μm，上海安譜公司；聚丙烯離心管15、50mL，美國ThermoFisherScientific公司；標(biāo)準(zhǔn)品全氟丁烷羧酸(PFBA)、全氟戊烷羧酸(PFPeA)、全氟己烷羧酸(PFHxA)、全氟庚烷羧酸(PFHpA)、全氟辛烷羧酸(PFOA)、全氟壬烷羧酸(PFNA)、全氟癸烷羧酸(PFDA)、全氟十一烷羧酸(PFUdA)、全氟十二烷羧酸(PFDoA)、全氟己烷磺酸鈉(PFHxS)、全氟辛烷磺酸鈉(PFOS)、全氟癸烷磺酸鈉(PFDS)、全氟十二烷磺酸鈉(PFDoS)、同位素內(nèi)標(biāo)物13C4-PFOA(Perfluoro-n-[1，2，3，4-C4]octanoicacid，MPFOA)、同位素內(nèi)標(biāo)物C4-PFOS(Sodiumperfluoro-1-[1，2，3，4-C4]octanesulfonate，MPFOS)均為50μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備液，溶劑甲醇，陰涼避光放置，加拿大Wellington公司；實(shí)驗(yàn)所用的動物源性食品均為市售豬、牛、羊的肝臟、腎臟、肌肉，取可食用部分絞碎并均質(zhì)，取2.00g均質(zhì)樣品于50mL聚阿烯離心管中，待檢，其余樣品密封保存于-18℃冰箱中。

UltiMate3000超高效液相色譜儀、TSQQuantiva三重串聯(lián)網(wǎng)極桿質(zhì)譜儀：美國ThermoFisherScientific公司；T25數(shù)顯型高速分散機(jī)、Vortexgenius3渦流混合器：德國IKA公司；TD25-WS離心機(jī)：湖南湘儀公司；THZ-98A恒溫振蕩器：上海一恒公司；L-119A氮?dú)獯蹈蓛x：北京來亨科貿(mào)有限公司；BiofugeStratos俞式高速冷凍離心機(jī)：美國ThermoFisherScientific公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

13種PFCs和2種同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中問液的配制：分別準(zhǔn)確移取13種PFCs、2種同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液(50μg/mL)適量于10mL容最瓶中，甲醇定容，分別配制成濃度均為5μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中問液，濃度以全氟烷基羧酸或全氟烷基磺酸計，-18℃避光保存，有效期12個月。

混合標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：分別準(zhǔn)確移取13種PFCs標(biāo)準(zhǔn)中間液各1mL，于50mL容量瓶中，甲醇定容。該溶液中每種PFCs濃度為100ng/mL。-18℃避光保存，有效期3個月。

混合同位素內(nèi)標(biāo)中問液的配制：分別準(zhǔn)確移取同位素內(nèi)標(biāo)中間液MPFOA1.5mL、MPFOS3mL，于50mL容囂瓶中，甲醇定容。該溶液中MPFOA濃度為150ng/mL、MPFOS濃度為300ng/mL。-18℃避光保存，有效期6個月。

混合同位素內(nèi)標(biāo)工作液：準(zhǔn)確移取混合同位素內(nèi)標(biāo)中間液1mL于10mL容量瓶中，甲醇定容。該溶液中MPFOA濃度為15ng/mL、MPFOS濃度為30ng/mL。一18℃避光保存，有效期3個月。

系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制：準(zhǔn)確移取13種PFCs混合標(biāo)準(zhǔn)工作液、混合同位素內(nèi)標(biāo)工作液適量，用甲醇配制濃度為0.05、0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10ng/mL(同位素內(nèi)標(biāo)MPFOA濃度為1.5ng/mL、MPFOS濃度為3.0ng/mL)的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。MPFOA是定量9種PFCAs的同位素內(nèi)標(biāo)，MPFOS是定量4種PFSAs的同位素內(nèi)標(biāo)。

1.2.2儀器條件

1.2.2.1色譜條件

色譜柱：AtlantisT3色譜柱(2.1mmx150mm，3μm)；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；流動相：2.5mmol/L乙酸銨-甲醇溶液(A)(2.5mmol/L乙酸銨溶液(B)；梯度洗脫程序：0～3min，90％～40％B；3～12min，40％～10％B；12～14min，10％B；14～14.5min，10％-90％B；14.5～18min，90％B。

1.2.2.2質(zhì)譜條件

電噴霧離子源(ESI)；掃描方式：負(fù)離子掃描；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；噴霧電壓：3500V；蒸汽溫度；290℃；離子傳輸管溫度：270℃；鞘氣流速：30arb；輔助氣流速：10arb；二級碰撞氣：氬氣；碰撞氣壓力：1.5mTorr；保留時間、定性離子對、定量離子對、碰撞能量見表1。

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