流行性感冒（簡稱流感）是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病，其主要臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、頭痛、鼻塞、咳嗽等，嚴重影響了人們生命健康和日常生活。近年來流感時有爆發(fā)，隨著病毒的變異，使得抗病毒藥物的研發(fā)越來越受到人們的關注。乃孜來顆粒（臨床批件號CXZL1900019）是國醫(yī)大師巴黑·玉素甫臨床20余年的經(jīng)驗方，由一枝蒿、神香草、天山堇菜、萵苣子、破布木果、洋甘菊、大棗和薄荷8味藥材組成，用于治療病毒引起的上呼吸道感染、發(fā)熱、頭痛、鼻塞、咳嗽、流鼻涕等，臨床療效顯著。前期開展并完成了制備工藝、藥效學和毒理學等相關研究，但尚未系統(tǒng)研究其物質(zhì)基礎。

中藥化學成分復雜，尤其是復方，但明確藥物化學成分組成對于中藥臨床使用的安全性、有效性具有至關重要的作用，超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜法（UHPLC-Q-Orbitrap-MS）因其具有高分辨率、高靈敏度、高質(zhì)量精度等特點，被廣泛用于中藥化學成分的快速定性分析?；诖?，本實驗擬采用UHPLC-Q-Orbitrap-MS對乃孜來顆粒進行化學成分分析和歸屬，提供全面的化學輪廓，以期為其質(zhì)量評價體系提升，藥效作用機制和代謝特征闡釋、臨床合理應用等奠定基礎。

1材料

UltiMate3000型超高效液相色譜儀（美國Dionex公司），Q-Orbitrap型四級桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀（美國ThermoFisherScientific公司），SQP型1/10萬電子分析天平。

綠原酸、菊苣酸、芹菜素、沒食子酸、紫云英苷、山柰苷、高車前素對照品（上海純優(yōu)生物科技有限公司，批號分別為19121609，11050701，19070308，15051904，13062403，p0571，200062707），迷迭香酸、金絲桃苷、異槲皮苷、蘆丁、蒙花苷、秦皮乙素、異鼠李素、阿魏酸、原兒茶酸、木犀草素、槲皮素、山柰酚、齊墩果酸、熊果酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號分別為111871-201505，111521-201809，111809-201804，100080-201811，111528-01509，110741-200607，110860-201611，110773-201313，110809-200604，111520-200504，100081-201408，110861-201310，0709-9803和110742-200312），異綠原酸C對照品（北京世紀奧科生物技術有限公司，批號18031603）；新綠原酸，隱綠原酸，異綠原酸A，異綠原酸B，對香豆酸，咖啡酸對照品（北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術研究院，批號分別為18031001，18032403，18032601，18031602，130316，130305）；1，3-二咖啡?；鼘幩?，鞣花酸，木犀草苷，D-（-）-奎寧酸，異鼠李素-3-O-蕓香糖苷對照品（成都普菲德生物技術有限公司，批號分別為MUST-14052604，MUST-14110807，151111，MUST-15012208，151110）；一枝蒿酮酸（中國科學院新疆理化技術研究所，批號JSP11-2530-2014）；所有對照品的純度均≥98%。水為屈臣氏蒸餾水，甲醇、甲酸、乙腈為質(zhì)譜純，其他試劑均為分析純。

乃孜來顆粒（批號200405）由中國科學院新疆理化技術研究所民族藥關鍵技術與工藝工程研究中心生產(chǎn)，方中所含8味藥材一枝蒿、神香草、破布木果、天山堇菜、薄荷、大棗、萵苣子和洋甘菊均購自新疆恩薩爾維吾爾醫(yī)飲片藥業(yè)有限公司（批號依次為20200902，20190708，20190901，20201225，20200914，20200402，20201201，206202007），經(jīng)中國科學院新疆理化技術研究所劉戈宇研究員鑒定，大棗和薄荷符合2020年版《中華人民共和國藥典》（一部）相關規(guī)定；神香草、天山堇菜、破布木果和洋甘菊均符合1999年版《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準》（維吾爾藥分冊）規(guī)定；一枝蒿符合《衛(wèi)生部頒藥品標準》（中藥材第一冊）相關規(guī)定；萵苣子符合1992年版《維吾爾藥材標準》（上冊）相關規(guī)定。

2方法與結果

2.1色譜及質(zhì)譜條件

2.1.1色譜條件

WatersACQUITYUPLCBEHShieldRPC18色譜柱（2.1mm×100mm，1.7µm），柱溫35℃，進樣量2μL，流速0.3mL·min-1，流動相0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）梯度洗脫（0~3min，1%B；3~16min，1%~11%B；16~30min，11%~34%B；30~37min，34%~52%B；37~42min，52%~100%B；42~44min，100%B）。

2.1.2質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源（ESI），輔助氣和離子傳輸管溫度分別為300，350℃，輔助氣體積流量10μL·min-1；正離子模式下噴霧電壓3.5kV，鞘氣體積流量40μL·min-1；負離子模式下噴霧電壓2.8kV，鞘氣體積流量38μL·min-1。采用正、負離子同時掃描的FullMS/dd-MS2模式，其中包括FullMS分辨率7萬，dd-MS2分辨率17500，碰撞能量35eV，掃描范圍m/z100~1500。

2.2溶液制備

乃孜來顆粒研細后過100目篩，取0.2g，精密稱定，置25mL量瓶中，加水適量，超聲30min（功率500W，頻率35kHz），取出，冷卻至室溫，用水定容至刻度，搖勻，12000r·min-1離心5min（離心半徑14mm），取上清液，得8.0g·L-1提取液（以生藥量計），過0.22μm微孔濾膜，作為供試品溶液備用。取各對照品約5.0mg，精密稱定后置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度均約為0.2g·L-1的單一對照品儲備液；分別量取上述儲備液適量，置于同一量瓶中混合后加甲醇稀釋，得質(zhì)量濃度均處于2~4mg·L-1的混合對照品溶液。

2.3質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析

結合ChemSpider，PubChem，ChemicalBook數(shù)據(jù)庫中化合物，以及乃孜來顆粒中單味藥材的質(zhì)譜信息，建立化學成分信息庫，根據(jù)乃孜來顆粒的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)提供的準分子離子及加合離子信息，推測一級質(zhì)譜的精確相對分子質(zhì)量，選擇誤差（δ）在5ppm（1ppm=1×10^-6）以內(nèi)的化合物，經(jīng)Xcalibar4.0軟件擬合計算相應的分子式，初步對各化學成分的分子式進行前期推測，再結合對照品、相關文獻對色譜峰進行指認和歸屬。

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