2 結(jié)果與分析

2.1 色譜-質(zhì)譜條件的優(yōu)化

配制1μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液于進(jìn)樣瓶中，采用儀器自動(dòng)進(jìn)樣進(jìn)入質(zhì)譜儀，在Masslynx軟件中設(shè)置質(zhì)譜條件，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)行離子調(diào)諧，根據(jù)響應(yīng)穩(wěn)定、信號(hào)強(qiáng)度較高、干擾少的碎片確定定量離子對(duì)和定性離子對(duì)，具體參數(shù)見(jiàn)表1。

本文比較了HSST3色譜柱和BEHC₁₈色譜柱對(duì)四種化合物的分離效果，兩種色譜柱對(duì)四種化合物的分離效果見(jiàn)圖1。可以看出，HSST3色譜柱對(duì)四種化合物的分離效果明顯優(yōu)于BEHC₁₈色譜柱，且峰形良好。尤其是對(duì)于麥芽酚和乙基麥芽酚的峰形和響應(yīng)有很好的改善作用，這是由于T3色譜柱可以更好地保留麥芽酚等極性較大的化合物。楊華梅等采用BEHC₁₈色譜柱分離四種化合物時(shí)存在香蘭素和乙基麥芽酚保留時(shí)間重疊嚴(yán)重的現(xiàn)象，而林仙軍等采用HSST3色譜柱分離乙基麥芽酚和香蘭素時(shí)，兩種化合物可實(shí)現(xiàn)基線分離且峰形較好?？疾炝怂?乙腈和水-甲醇流動(dòng)相體系對(duì)四種化合物的分析效果影響，發(fā)現(xiàn)以水-甲醇作為流動(dòng)相時(shí)，四種化合物的響應(yīng)明顯優(yōu)于水-乙腈流動(dòng)相體系。并在此基礎(chǔ)上考察了甲醇-水、甲醇-0.05%甲酸水、甲醇-0.1%甲酸水對(duì)色譜峰的影響，發(fā)現(xiàn)添加甲酸后，質(zhì)譜響應(yīng)增強(qiáng)，0.05%甲酸水和0.1%甲酸水響應(yīng)無(wú)明顯差別，故最終采用甲醇-0.05%甲酸水作為流動(dòng)相，在此條件下，四種化合物色譜圖見(jiàn)圖1B。

2.2凈化富集方法的選擇

為了提高方法檢出限和準(zhǔn)確度，需要對(duì)提取液進(jìn)行富集及凈化，本文采用富集倍數(shù)同為5倍的4種方式對(duì)空白加標(biāo)樣品進(jìn)行處理，分別為：a.取5mL叔丁基甲醚直接吹干后定容上機(jī)分析；b.取5mL叔丁基甲醚用5mL堿液反萃后調(diào)節(jié)pH用HLB富集；c.取5mL叔丁基甲醚用5mL堿液反萃后用PAX富集；d.取5mL叔丁基甲醚用1mL堿液反萃后調(diào)酸上機(jī)分析；結(jié)果發(fā)現(xiàn)，四種香料化合物在氮吹的過(guò)程中均有一定程度的損失，尤其是香蘭素和麥芽酚回收率低于80%。采用固相萃取柱富集時(shí)，微量的叔丁基甲醚會(huì)造成目標(biāo)物大量損失，即使采用真空除去叔丁基甲醚后，麥芽酚回收率仍低于80%難以滿足要求。而采用堿液和叔丁基甲醚比例為1:5進(jìn)行反萃時(shí)四種化合物的回收率均大于90%，故最終采用的凈化富集方式為堿液反萃。不同處理下四種化合物回收率見(jiàn)表2。

麥芽酚、乙基麥芽酚、香蘭素和乙基香蘭素均呈弱酸性，在高堿性條件下能形成離子狀態(tài)，使其在水中溶解性大大提高，可從醚相中提取出來(lái)。考察了在不同堿液和叔丁基甲醚比例下，四種化合物的回收率和基質(zhì)效應(yīng)，由圖2可以看出，當(dāng)堿液和叔丁基甲醚比例低于1:5時(shí)，四種化合物回收率超過(guò)90%，而堿液和叔丁基甲醚比例達(dá)到1:10時(shí)，麥芽酚和乙基麥芽酚回收率大大降低。以陰性的奶粉基質(zhì)按照方法進(jìn)行提取，按相應(yīng)的堿醚比例反萃得到的基質(zhì)液配制50ng/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn)品與純?nèi)軇┡渲频?0ng/mL混合標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)值進(jìn)行比較考察其基質(zhì)效應(yīng)，基質(zhì)效應(yīng)（ME）=陰性樣品基質(zhì)添加標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰面積/純?nèi)軇┡渲茦?biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積）×100。結(jié)果表明隨著堿醚比例的降低，基質(zhì)效應(yīng)逐漸減弱，說(shuō)明減少堿醚體積比可以有效去除雜質(zhì)，當(dāng)堿醚比例為1:1和1:3時(shí)，麥芽酚存在較強(qiáng)的基質(zhì)抑制效應(yīng)，而當(dāng)堿醚比低于1:5時(shí)，各項(xiàng)目的基質(zhì)效應(yīng)均在80%～100%之間。為獲得最大的富集倍數(shù)，提高方法的靈敏度，同時(shí)保證較好的回收率，最終采用堿液和叔丁基甲醚比例為1:5進(jìn)行反萃，可實(shí)現(xiàn)5倍富集并獲得良好的凈化效果。

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