茉莉花，系木犀科素馨屬綠灌木，原產(chǎn)于印度，根據(jù)花冠輪數(shù)，常分為單瓣茉莉、雙瓣茉莉、多瓣茉莉三種類型。茉莉花花量大，花期長，花香持久、被譽為“天下第一香”，是著名的花茶和香精原料，還具有較高的觀賞和藥用價值。我國種植茉莉花已有2000多年的歷史，現(xiàn)在我國廣西橫縣、福建福州市、四川犍為縣及云南元江縣等地規(guī)模種植，種植面積12300hm2，年產(chǎn)鮮花120600t，年產(chǎn)茉莉花茶110800t，是重要的“一帶一路”經(jīng)濟植物。白絹病是茉莉花最主要的病害，近年來發(fā)生日益嚴重，可導致茉莉花大面積枯死，嚴重影響茉莉花的產(chǎn)量及品質(zhì)，成為制約產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸問題。
茉莉白絹病，俗稱白毛病、菜籽病，是土棲真菌齊整小核菌引起的一種土傳根部危險性病害。該病菌的寄主范圍極廣，包括花生、芝麻、番茄、辣椒、蘋果等近100個科500多種植物，且病菌菌核在土壤中可存活5～6a，因此很難防治，在國內(nèi)外茉莉花產(chǎn)區(qū)普遍發(fā)生，發(fā)病率可達36.5%，甚至完全毀滅種植園。國內(nèi)外已有不少針對該病的化學防治及生物防治的相關(guān)研究報道，但有些化學藥劑殘留期較長，易造成環(huán)境污染。而以微生物菌劑、菌肥為主要載體的生物防治措施，防治成本較高，且生防菌的定殖易受土壤pH、水分、溫度等環(huán)境因素的影響，防治效果尚不夠穩(wěn)定。種植抗病品種是防治作物病害最經(jīng)濟有效的防治手段。種質(zhì)資源是育種的物質(zhì)基礎(chǔ)，鑒定抗病種質(zhì)是抗病育種的基礎(chǔ)工作。國內(nèi)外已有開展花生種質(zhì)對白絹病抗性鑒定的報道，Sennoi等進行了洋姜白絹病室內(nèi)抗性鑒定，Gholami等開展了菜豆抗白絹病評價。而茉莉花白絹病抗性評價及抗病資源篩選的相關(guān)研究尚未見報道。

本研究以收集的18份茉莉花品種（系）及8份素馨屬其他種為材料，開展了茉莉花白絹病露天接種技術(shù)及盆栽抗病性鑒定研究，旨在建立茉莉花白絹病露天接種方法并篩選抗源，為茉莉花抗性育種及種質(zhì)資源的科學利用提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗地點概況

試驗在廣西農(nóng)業(yè)科學院花卉研究所露天苗圃（22°48′N、108°22′E）進行，地面新鋪黑色地布。試驗地屬南亞熱帶季風氣候區(qū)，年平均氣溫21.6℃，年均降雨量1304.2mm，平均空氣相對濕度79%，無霜期334d。

1.1.2 試驗材料

供試材料包括18份茉莉花品種（系），8份素馨屬其他種的植物。茉莉白絹病菌菌株SRNN1分離自廣西橫縣校椅鎮(zhèn)茉莉種植園內(nèi)的感病植株，經(jīng)純化鑒定，菌株rDNA-ITS序列GenBank登錄號為MT634388。燕麥粒為市售燕麥，千粒重23.87g。病菌培養(yǎng)采用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基（PDA），配方為：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，水1L，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 帶菌燕麥粒的制備

制備方法參考晏立英等的方法，略作修改。將茉莉白絹病菌在PDA培養(yǎng)基平板上28℃培養(yǎng)3d，用滅菌打孔器在菌落邊緣打取直徑5mm的菌碟，備用。燕麥粒裝入三角瓶中，蒸餾水浸泡4h后，倒掉水分，121℃高壓滅菌60min。將白絹病菌碟接種于滅菌的燕麥粒中，置于28℃黑暗條件下培養(yǎng)7d，期間每隔12h搖動三角瓶1次，直至所有燕麥粒上均長滿菌絲。

1.2.2 不同接種方法的比較

以橫縣雙瓣茉莉的健壯扦插苗為試材，取3年齡種苗移栽到種植盆，種植盆直徑18cm，深17cm，栽培基質(zhì)為黃心土∶泥炭土=4∶1。移栽后露天養(yǎng)護6個月，選取長勢一致的盆苗進行接種試驗。共設(shè)置5種接種方法及對照共6個處理，每個處理10盆，3次重復。參考晏立英等的方法，修改了接種數(shù)量形成撒表土法、埋土法、貼莖法，增加覆蓋基質(zhì)或無菌燕麥粉形成蓋泥炭法及混合埋土法，具體方法如下：

（1）撒表土法。植株澆透水分，將帶菌的燕麥粒撒在植株莖基部周圍的土壤表面，15粒/盆。

（2）埋土法。帶菌燕麥粒埋入莖基部周圍2cm深的土層中，15粒/盆。

（3）貼莖法。帶菌燕麥粒粘于透明膠帶上，固定于莖基部，15粒/盆。

（4）蓋泥炭法。植株澆透水分，將帶菌的燕麥粒撒在植株莖基部周圍的土壤表面，15粒/盆。覆蓋一層2～3cm厚濕透的泥炭土。

（5）混合埋土法。帶菌燕麥粒與無菌燕麥粉混合埋入莖基部周圍2cm深的土層中，帶菌燕麥粒15粒/盆。

（6）對照（CK）。植株澆透水分，將不帶菌的燕麥粒撒在植株莖基部周圍的土壤表面，15粒/盆。

1.2.3 不同苗齡的植株感病情況比較

以橫縣雙瓣茉莉為試材，選取1、3、5、10、20年苗齡植株移入種植盆，種植盆直徑18cm，深17cm，栽培基質(zhì)為黃心土∶泥炭土=4∶1。移栽后露天養(yǎng)護6個月，選擇長勢較一致的盆苗進行接種試驗，采用帶菌燕麥粒埋土法進行接種。每個處理10盆，3次重復。

1.2.4 不同品種（系）抗病性鑒定

供試材料包括18份茉莉花品種（系），8份素馨屬其他種的植物，均為扦插繁殖的1年苗齡的盆栽。種植盆直徑18cm，深17cm，栽培基質(zhì)為黃心土∶泥炭±=4∶1。采用帶菌燕麥粒埋土法進行接種，每個處理10盆，3次重復。

1.2.5 病情調(diào)查

接種后每3d調(diào)查1次病情，計算病情指數(shù)和發(fā)病率。不同接種方法比較試驗連續(xù)調(diào)查14次，其他試驗連續(xù)調(diào)查8次。病情分級標準及計算參照杜嬋娟等的方法稍加修改，病情分級標準：0級指未見枯黃病葉病枝；1級指全株<25%以下萎蔫和死亡；3級指全株25%～50%表現(xiàn)萎蔫和死亡；5級：全株＞50%表現(xiàn)萎蔫，但未死亡；7級指整株枯死。病情指數(shù)的計算公式為：DI={[Σ(各級病株×對應(yīng)級數(shù)值)]/(調(diào)查總株數(shù)×7)}×100。發(fā)病率=(發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù))×100%。

1.2.6 抗性評價方法

采用相對抗病程度評價方法鑒定供試材料的抗性，以病情指數(shù)最高的茉莉花品種（系）為對照，計算其他品種的相對抗性。相對抗病指數(shù)=(最高病情指數(shù)-評價品種病情指數(shù))/最高病情指數(shù)。根據(jù)抗病指數(shù)抗病程度分為5級，免疫：相對抗病指數(shù)為1.0；高抗：相對抗病指數(shù)為0.80～0.99；抗?。合鄬共≈笖?shù)為0.40～0.79；中感：相對抗病指數(shù)為0.20～0.39；高感：相對抗病指數(shù)低于0.20。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel2007軟件進行數(shù)據(jù)處理及作圖，采用SPSS11.5軟件進行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 接種方法的比較

以主栽品種橫縣雙瓣茉莉3年生盆栽植株為試材，測試了5種不同接種方法的茉莉發(fā)病情況。由結(jié)果可知，不同接種方法的茉莉初始發(fā)病時間不同，病情指數(shù)及發(fā)病率亦有不同。接種6d后，埋土法、混合埋土法、貼莖法及蓋泥炭法開始發(fā)??；接種12d后，撒表土法開始發(fā)?。▓D1）。接種后6～42d，埋土法的病情指數(shù)均高于其他處理；接種42d后，埋土法的病情指數(shù)高達47.93，顯著高于其他接種方法，埋土法與混合埋土法發(fā)病率分別達到86.67%和90.00%，二者差異不顯著，但顯著高于撒表土法、蓋泥炭法及貼莖法（圖2，表1）。因此，埋土法為茉莉花露天接種白絹病的理想方法。

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