2 結(jié)果與分析

2.1 LPX3和LPG2的純化

從新鮮和十制龍眼果肉中分離純化得到LPX3和LPG2兩種多糖。LPX3和LPG2的串聯(lián)凝膠柱色譜圖如圖1所示。結(jié)果顯示，LPX3和LPG2均呈現(xiàn)單一對稱的色譜峰且相對分子質(zhì)量分布較窄，出峰時間分別為19.45min和26.50min，表明LPX3和LPG2具有較好的均一性。

2.2 LPX3和LPG2對腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞增殖的影響

南圖2可知，與空白對照組相比，隨著LPX3和LPG2質(zhì)量濃度的增加(6.25～200μg/mL)，腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的增殖分?jǐn)?shù)顯著增加(P＜0.05)。當(dāng)LPX3和LPG2質(zhì)量濃度為200μg/mL時，腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的增殖分?jǐn)?shù)分別為235.45％和227.60％，兩者問無顯著差異(P＞0.05)。表明LPX3和LPG2均對小力更強。鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞無毒性作用，且能促進其增殖。

2.3 LPX3和LPG2對巨噬細(xì)胞增殖的影響

由圖3可知，與空白對照組相比，隨著LPXLPG2質(zhì)量濃度的增加(100～400μg/mL)，巨噬細(xì)胞的增殖分?jǐn)?shù)顯著增加(P＜0.05)。當(dāng)質(zhì)量濃度為100μg/mL和200μg/mL時，LPX3和LPG2之問對巨噬細(xì)胞增殖的促進能力無顯著差異(P＞0.05)。當(dāng)LPX3和LPG2質(zhì)量濃度為400μg/mL時，巨噬細(xì)胞增殖分?jǐn)?shù)分別為135.90％和143.70％，兩者間存在顯著差異(P＜0.05)。結(jié)果表明，新鮮和十制龍眼多糖均對巨噬細(xì)胞無毒性作用，且具有促進其增殖的作用；在400μg/mL時，LPG2促進巨噬細(xì)胞增殖的能力更強。

2.4 LPX3和LPG2對巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響

如圖4所示，與空白對照組相比，LPX3和LPG2隨著質(zhì)量濃度的增加(50～400μg/mL)，巨噬細(xì)胞的吞噬分?jǐn)?shù)顯著增加(P＜0.05)。在LPX3和LPG2質(zhì)量濃度為400μg/mL時，吞噬分?jǐn)?shù)分別為192.03％和198.28％，兩者問無顯著差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，LPX3和LPG2均能有效促進巨噬細(xì)胞吞噬抗原。巨噬細(xì)胞的活化在機體免疫應(yīng)答過程中扮演著重要角色，吞噬能力的增強是其活化的標(biāo)志之一。巨噬細(xì)胞通過吞噬清除受損細(xì)胞或外來抗原，誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IL-1B、TNF-α等細(xì)胞因子調(diào)節(jié)機體免疫阻。有報道顯示龍眼多糖組分和硫酸化修飾的龍眼多糖組分能顯著增強巨噬細(xì)胞的吞噬能力。

2.5 LPX3和LPG2對巨噬細(xì)胞分泌NO的影響

NO作為一種重要的細(xì)胞信號分子，廣泛參與細(xì)胞和機體的免疫調(diào)節(jié)。如圖5所示，與空白對照組相比，NO分泌量隨著LPX3質(zhì)量濃度的增加而顯著增加(P＜0.05)。LPG2在25～200μg/mL范同內(nèi)，能顯著促進NO分泌(P＜0.05)。當(dāng)LPX3和LPG2的質(zhì)量濃度均為200μg/mL時，NO分泌量分別為空白對照組的5.4倍和5.6倍，兩者問無顯著差異(P＞0.05)。結(jié)果表明，25～200μg/mL的LPX3和LPG2引起了細(xì)胞促炎信號分子NO分泌量的顯著改變，可能誘導(dǎo)了巨噬細(xì)胞相關(guān)信號通路的激活。同時，研究顯示炎癥因子的過度釋放會誘導(dǎo)機體的炎癥因子風(fēng)暴，對機體造成損傷，LPX3和LPG2促進巨噬細(xì)胞分泌NO的活性有待進一步研究。

2.6 LPX3和LPG2對巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響

如圖6所示，與空白對照組相比，LPX3和LPG2(25～400μg/mL)可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌IL-6和TNF-α，并呈現(xiàn)出一定劑量關(guān)系。當(dāng)質(zhì)量濃度為400μg/mL時，TNF-α的分泌量分別為空白對照組的17.67倍(296.20pg/mL)和H31.54倍(528.65μg/mL)，兩者具有顯著性差異(P＜0.05)：IL-6的分泌量分別為空白對照組的18.42倍(73.69pg/mL)和27.31倍(109.22pg/mL)，兩者具有顯著性差異(P＜0.05)。結(jié)果表明，LPX3和LPG2均能顯著促進巨噬細(xì)胞分泌TNF-α和IL-6。當(dāng)質(zhì)量濃度為400μg/mL時，LPG2促進巨噬細(xì)胞分泌IL-6和TNF-α的能力更強。IL-6和TNF-α在宿主防御病原體和急性應(yīng)激中起著關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞IL-6和TNF-α分泌量的增加可能與細(xì)胞的激活和防御有一定關(guān)系。

3 結(jié)語

作者采用小鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞模型，比較了LPX3和LPG2誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和細(xì)胞因子分泌的活性。結(jié)果表明，LPX3和LPG2均能促進小鼠腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞增殖和激活巨噬細(xì)胞，且具有劑量依賴性的促進巨噬細(xì)胞吞噬和誘導(dǎo)細(xì)胞分泌IL-6、TNF-α。同時，與LPX3相比，LPG2表現(xiàn)出更強的激活巨噬細(xì)胞的活性。

多糖的生物活性與其結(jié)構(gòu)密切相關(guān)，新鮮和干制龍眼果肉多糖的分子結(jié)構(gòu)差異及其激活巨噬細(xì)胞的分子機制差異還有待進一步研究。

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