迷迭香現(xiàn)在全世界各國(guó)廣泛栽培。迷迭香中含有多種化學(xué)物質(zhì)，主要成分為黃酮類、萜類、有機(jī)酸類和其他類，萜類是含量最多的一類，目前已經(jīng)分離鑒定的化合物有迷迭香酸、鼠尾草酚、鼠尾草酸、齊墩果酸和熊果酸。迷迭香酸易溶于甲醇、乙醇水溶液、水，而難溶于氯仿、石油醚等有機(jī)溶劑；耐高溫能力強(qiáng)，可耐受長(zhǎng)期240℃高溫油炸而保持高抗氧化能力，可代替熱不穩(wěn)定的超氧化物歧化酶SOD作為自由基清除劑。迷迭香酸在不同植物中的含量各異，其應(yīng)用價(jià)值也各不相同。迷迭香酸提取純化方法主要有水提法、有機(jī)溶劑提取法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、膜分離技術(shù)、大孔樹(shù)脂吸附法、結(jié)晶法等。水提法既提取出水溶性有效成分，同時(shí)也提出一些水溶性雜質(zhì)，如水提法分離的迷迭香酸粗品中含有較多的焦糖色素、蛋白和多糖類雜質(zhì)，為后續(xù)純化增加了困難。超聲波和微波輔助提取法具有提取效率高、提取時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)，但均為輔助提取方法，且需超聲或微波設(shè)備。有機(jī)溶劑提取法可以有效減少一些水溶性雜質(zhì)的溶出，便于后續(xù)的分離和純化。目前采用乙醇提取得到的迷迭香酸粗品含量基本在3～6%。

本文以5%含量的迷迭香酸粗品為原料，優(yōu)選萃取劑種類、萃取時(shí)間、次數(shù)、時(shí)間等因素，使產(chǎn)品中迷迭香酸含量大于≥35%（GB1886.172—2016《食品添加劑迷迭香提取物》要求大于5%），并且實(shí)現(xiàn)脫色，為實(shí)施迷迭香酸的工業(yè)化生產(chǎn)及應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實(shí)驗(yàn)所用乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷、重鉻酸鉀、硫酸鈷、鹽酸等分析純?cè)噭┚少?gòu)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。迷迭香干葉由河南尚佳農(nóng)業(yè)科技有限公司提供。迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品（含量：98%），購(gòu)自西安利時(shí)生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

1260高效液相色譜儀：安捷倫科技有限公司；752N紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海精密科學(xué)儀器有限公司；GL-20G-C高速冷凍離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；BSA224S-CW電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；RNF-0460卷式膜多功能小試設(shè)備：廈門世達(dá)膜科技有限公司；YC-1800噴霧干燥機(jī)：上海雅程儀器設(shè)備有限公司；20升多功能提取系統(tǒng)：河南寧爍儀器設(shè)備有限公司。

1.3 迷迭香酸粗品制備

取迷迭香干葉按1∶10加含75%乙醇水溶液（pH=2），加入到20L萃取罐中，85℃回流提取1.0h，放出萃取液，再加入8倍75%乙醇水溶液（pH=2），回流提取1.0h離心后，合并提取液，過(guò)四層紗布，閃蒸儀濃縮蒸餾出酒精，卷式膜過(guò)濾，噴霧干燥得含量約為5%粗品。

1.4 迷迭香酸含量及色度測(cè)定

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)品及樣品配制

用甲醇溶解標(biāo)準(zhǔn)品配置成0.2mg/mL迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

將待測(cè)迷迭香酸粗品配制為2mg/mL的水溶液（pH=2），測(cè)定色度和迷迭香酸含量。

1.4.2 高效液相色譜法測(cè)定迷迭香酸含量

色譜條件：二極管陣列檢測(cè)器（DAD），流動(dòng)相為甲醇∶水=60∶40，流速為1mL/min，進(jìn)樣量為10μL。

1.4.3 色度標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及脫色率的計(jì)算

（1）色度標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

標(biāo)準(zhǔn)色度單位：1L水中溶解有1mg鉑和0.5mg鈷，稱該溶液所具有的色度為1度。500色度標(biāo)準(zhǔn)使用液配制：稱取0.0437g重鉻酸鉀和1.0g硫酸鈷，加水溶解后繼續(xù)加入0.5mL硫酸，配成500mL的溶液。以蒸餾水為對(duì)照液，在340nm～360nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定500色度標(biāo)準(zhǔn)使用液的吸光度，選出最大吸收波長(zhǎng)。分別用移液槍移取1mL、2mL、3mL、4mL500色度標(biāo)準(zhǔn)使用液到四個(gè)5mL容量瓶中，加蒸餾水定容（稀釋后，色度分別是100、200、300、400）。在最大波長(zhǎng)處測(cè)吸光值。以溶液色度為橫坐標(biāo)，以吸光值為縱坐標(biāo)，繪制色度標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（2）計(jì)算脫色率：

將提取液稀釋一定的倍數(shù)，在最大波長(zhǎng)處測(cè)吸光值，將吸光值代入色度線性回歸方程，求得產(chǎn)品色度。脫色率按下式計(jì)算：
 

1.5 萃取溶劑的選擇

稱取9份10g原料，用60mL酸水溶解，離心去除不溶物。分別用1.0倍體積的乙醚、乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙醚、石油醚、正丁醇、三氯甲烷、正己烷進(jìn)行萃取，共萃取兩次，采用高效液相色譜儀檢測(cè)上下相中迷迭香酸的含量，確定最佳的兩相分配工藝。

1.6 溶劑萃取工藝優(yōu)化實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.6.1 正丁醇萃取水相和含醇水相迷迭香酸的分配情況

分別用15%乙醇和純水溶解含量為90%的迷迭香酸樣品配制成0.2mg/mL樣液，加入等體積的正丁醇進(jìn)行萃取，各重復(fù)3份，測(cè)定上下相中迷迭香酸的含量。

1.6.2 正丁醇萃取不同pH水相迷迭香酸的分配情況

分別以不同pH的水相溶解含量為90%的迷迭香酸樣品，用等體積正丁醇萃取，分相后，高效液相色譜法檢測(cè)上下相中迷迭香酸的含量及分配情況。

1.6.3 萃取劑的選擇

按料液比1∶8加入酸水溶解迷迭香粗提物，離心去除不溶物，分別用乙醚、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、三氯甲烷、正丁醇、石油醚、正己烷萃取按照1∶1的體積比進(jìn)行萃取，共萃取兩次，檢測(cè)兩次萃取后上相和最后的下相迷迭香酸的含量。

1.6.4 四種萃取劑的對(duì)比實(shí)驗(yàn)

選用含量為5%的迷迭香酸粗品，用pH2～3的酸水溶解配制為1mg/mL樣液，分別用等體積的正丁醇、乙酸甲酯、乙酸乙酯和乙酸甲酯萃取后，測(cè)定所得產(chǎn)品的色度及迷迭香酸的含量，確定最佳的萃取劑。

1.6.5 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

設(shè)計(jì)L₉（3⁴）的三因素三水平正交實(shí)驗(yàn)考察萃取劑種類、萃取水相的pH和萃取劑用量（為水相的倍數(shù)）對(duì)脫色率及含量的影響。

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS16軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

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