3.3.2 超氧陰離子清除能力的測定

a.試劑配制

Tris溶液：稱取6.05gTris（三羥甲基氨基甲烷）用水溶解定容至500mL，得0.1mol/L的Tris溶液。0.05mol/LHCl溶液：量取4.29mL濃鹽酸（36%～38%）用水溶解定容至1000mL水中，得0.05mol/LHCl溶液。10mmol/LHCl溶液：將0.05mol/LHCl溶液用水稀釋5倍即得10mmol/LHCl溶液。Tris-HCl緩沖液（pH8.2）：分別用0.1mol/L的Tris溶液和0.05mol/L的HCl溶液調(diào)pH為8.2即可。3mmol/L鄰苯三酚溶液：稱取0.0378g鄰苯三酚（焦性沒食子酸）用10mmol/LHCl溶液溶解定容至100mL，得3mmol/L鄰苯三酚溶液?，F(xiàn)配現(xiàn)用，4h內(nèi)有效。

b.實驗步驟

分別取Tris-HCl緩沖液4.5mL二組（A組為待測樣品，B組為空白對照），至于25℃水浴鍋中保溫20min，保溫結(jié)束后在A組中加入5.0mL待測樣溶液，在B組中加入5.0mL待測樣溶劑作為空白對照。分別在各組中加入0.3mL鄰苯三酚溶液，迅速搖勻充分反應(yīng)4min后加入0.2mLHCL溶液終止反應(yīng)。在325nm處測定吸光度值，計算超氧陰離子清除，陽性對照為抗壞血酸。

c.計算方法

式中：OD_A為加樣品溶液的吸光度值；

OD_B為加乙醇水溶液的吸光度值。

4 結(jié)果與討論

4.1 不同產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量

采用紫外分光光度法測定了寧夏、內(nèi)蒙及陜西三個產(chǎn)地的銀柴胡提取物黃酮含量，銀柴胡提取物黃酮含量測定結(jié)果如下圖所示。

結(jié)果表明，寧夏、內(nèi)蒙及陜西三個產(chǎn)地的銀柴胡提取物黃酮含量存在顯著差異，寧夏產(chǎn)地黃酮含量最高，為41mg/g，內(nèi)蒙產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量最低為21mg/g，陜西產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量為33mg/mL，寧夏和陜西產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量差異較內(nèi)蒙而言較小。

4.2 不同產(chǎn)地銀柴胡提取物的抗氧化能力

4.2.1 不同產(chǎn)地銀柴胡提取物ABTS自由基清除率測定

各產(chǎn)地銀柴胡提取物對ABTS自由基的清除率如圖所示，由圖中可知，三個產(chǎn)地銀柴胡提取物對自由基的清除率呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，隨著銀柴胡提取物黃酮濃度的增加對ABTS自由基的清除率也逐漸增加。寧夏銀柴胡提取物黃酮對ABTS自由基的半數(shù)清除濃度（IC50）為0.18mg/mL，陜西銀柴胡提取物黃酮對ABTS自由基的IC50為0.22mg/mL，內(nèi)蒙銀柴胡提取物黃酮對ABTS自由基的IC50為0.31mg/mL，抗壞血酸的IC50為0.11mg/mL，內(nèi)蒙產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮ABTS自由基清除率最低，說明銀柴胡提取物黃酮具有較好的清除ABTS自由基的能力，其中寧夏和陜西的銀柴胡最好。

4.2.2 不同產(chǎn)地銀柴胡提取物超氧陰離子清除率測定

各產(chǎn)地銀柴胡提取物對超氧陰離子基的清除率如圖所示，由圖中可知，三個產(chǎn)地銀柴胡提取物對自由基的清除率呈現(xiàn)明顯的劑量依賴關(guān)系，隨著銀柴胡提取物黃酮濃度的增加對超氧陰離子的清除率也逐漸增加。寧夏銀柴胡提取物黃酮對超氧陰離子的半數(shù)清除濃度（IC₅₀）為0.13mg/mL，內(nèi)蒙銀柴胡提取物黃酮對超氧陰離子的IC₅₀為0.15mg/mL，陜西銀柴胡提取物黃酮對超氧陰離子的IC₅₀為0.24mg/mL，抗壞血酸的IC₅₀為0.09mg/mL，說明銀柴胡提取物黃酮具有一定的清除超氧陰離子的能力。

4.3 討論

野生銀柴胡主要分布于干旱少雨的荒漠、半荒漠草原區(qū)，極耐干旱、耐貧瘠、耐寒，忌澇，近年來隨著人們的過度采挖，銀柴胡野生資源急劇減少，因此銀柴胡的人工種植是替代野生資源的重要途徑，目前人工種植基地主要集中在寧夏、內(nèi)蒙古、甘肅、陜西等地，其中，寧夏作為銀柴胡的主要道地產(chǎn)區(qū)，銀柴胡的種植時間較早，規(guī)模較大。

銀柴胡中含有的黃酮類成分具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤等功效，周麗等通過超聲乙醇提取銀柴胡得到總黃酮含量在0.8%左右，本研究通過進(jìn)一步的大孔樹脂吸附純化得到黃酮含量提高了約5倍左右，同時本文對于三個產(chǎn)地的銀柴胡提取物黃酮類成分及體外抗氧化能力進(jìn)行了對比研究，測得寧夏產(chǎn)地的黃酮類成分含量最高，陜西次之，內(nèi)蒙產(chǎn)地較低，寧夏產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮含量為41mg/g；比較了三種產(chǎn)地銀柴胡提取物黃酮體外對ABTS自由基和超氧陰離子的清除能力，得到三種產(chǎn)地的銀柴胡提取物黃酮均具有較好的體外抗氧化能力，其中寧夏產(chǎn)地抗氧化能力最強(qiáng)。綜上所述，寧夏作為銀柴胡道地產(chǎn)區(qū)之一其生產(chǎn)的銀柴胡提取物黃酮含量最高，抗氧化能力最強(qiáng)，可作為一種天然抗氧化成分應(yīng)用于食品中，具有廣闊的市場前景，但其具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究，本文為銀柴胡的種植及在食品方面的應(yīng)用研究提供了參考。

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