黃曲霉毒素(aflatoxin，AF)是由黃曲霉(Aspergilusflavu)和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)經(jīng)聚酮途徑所產(chǎn)生一組有毒次生代謝產(chǎn)物，其結(jié)構(gòu)含有一個(gè)二呋喃環(huán)與一個(gè)氧雜萘鄰?fù)?。目前已知的黃曲霉毒素有20多種，已分離鑒定出的有黃曲霉毒素有 B 1、B 2、G 1、G 2 等18種，其中AFB1毒性和致癌性最強(qiáng)。自然環(huán)境下，農(nóng)作物如水稻、油菜籽、花生等，在種植后生長(zhǎng)、收獲的過(guò)程中，很容易被產(chǎn)毒真菌污染，被污染的谷物，在儲(chǔ)藏、加工、運(yùn)輸?shù)冗^(guò)程通過(guò)食物鏈各個(gè)環(huán)節(jié)傳遞最終危害人類健康。聯(lián)合國(guó)糧食與農(nóng)業(yè)組織（FAO）統(tǒng)計(jì)，每年全球糧食將近有四分之一受到真菌毒素污染，造成了數(shù)以億計(jì)的經(jīng)濟(jì)損失。AF的產(chǎn)毒需要適宜的溫濕度和經(jīng)濟(jì)發(fā)展情況有關(guān)，熱帶和亞熱帶地區(qū)降水多、溫度高的地區(qū)食品受黃曲霉毒素的污染情況較嚴(yán)重，歐美經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)的污染狀況遠(yuǎn)低于東南亞等經(jīng)歷落后地區(qū)。

經(jīng)過(guò)大量文獻(xiàn)查閱，胡佳薇等人評(píng)價(jià)過(guò)2012-2015陜西市售食品中AF的污染情況，對(duì)于陜南地區(qū)總體的市售食品進(jìn)行了調(diào)查，未見(jiàn)關(guān)于漢中地區(qū)植物油中黃曲霉毒素的系統(tǒng)污染調(diào)查分析，也為見(jiàn)關(guān)于該地區(qū)植物油中毒素超標(biāo)的相關(guān)報(bào)告和處罰。漢中地處陜西南部，全年氣候濕潤(rùn)，降水豐沛，陜西最大的優(yōu)質(zhì)油菜籽種植基地，有“陜西魚米之鄉(xiāng)”的美稱，菜籽油是當(dāng)?shù)鼐用裆攀辰Y(jié)構(gòu)中的主要品種。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，商品流通加速，漢中市場(chǎng)上除了本地產(chǎn)菜籽油外，還有來(lái)自其他地區(qū)的大豆油、花生油、調(diào)和油、香油等。本研究結(jié)合漢中當(dāng)?shù)氐姆N植條件和飲食習(xí)慣，從8個(gè)行政區(qū)縣中采集了160份植物油，進(jìn)行4種AF的聯(lián)合污染狀況的調(diào)查，評(píng)估該地區(qū)植物油中AF污染狀況，系統(tǒng)掌握該地區(qū)AF的污染情況，為食品安全控制和當(dāng)?shù)鼐用竦腁F膳食暴露評(píng)估提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1材料

1.1.1樣品

2019年1月至2020年12月，陸續(xù)對(duì)漢中市的8個(gè)行政區(qū)縣的超市商場(chǎng)、糧油店、生產(chǎn)企業(yè)、餐飲店按照行政區(qū)域?yàn)榉殖商卣鬟M(jìn)行隨機(jī)采集（見(jiàn)圖1、圖2）。累計(jì)共采集到食用植物油160份（其中菜籽油120份，花生油、大豆油、調(diào)和香油等40份）。逐批采樣后封存，干燥陰涼處保存，備檢。

1.1.2 儀器設(shè)備

水浴恒溫振蕩器（常州億能實(shí)驗(yàn)儀器廠），分析天平（日本島津 d=0.01 g）；氮吹儀（?？瓶萍加邢薰荆?；高效液相色譜儀（日本島津LC-20AD，熒光檢測(cè)器）；光化學(xué)衍生器、C18色譜柱（月旭科技有限公司）；黃曲霉毒素免疫親和柱3mL（Rome labs）；MIlli-Q純水機(jī)（美國(guó)密理博公司）。

1.1.3 試劑

甲醇（色譜純，賽默飛）；吐溫-20（分析純，科密歐）氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、氯化鉀（分析純，科龍），黃曲霉毒素標(biāo)準(zhǔn)溶：AFG2 0.537 μg/mL，AFG1 0.539 μg/mL , AFB2 2.08 μg/mL，AFB1 2.07 μg/ mL（青島普瑞邦 STD#1081）。

1.2 方法

1.2.1樣品預(yù)處理

按照國(guó)標(biāo)GB5009.22-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定》第三法高效液相色譜-柱后衍生法進(jìn)行試驗(yàn)。

樣品提?。悍Q取5.0 g（精確至0.01g）粉碎混合均勻樣品于離心管中，加入甲醇水溶液（80+20）20 mL渦旋混合，搖床中震蕩1 h，玻璃濾紙過(guò)濾，濾液備用。

樣品凈化：將免疫親和柱取出恢復(fù)至室溫，準(zhǔn)確吸取2 mL濾液，加入25 mL的PBS溶液于25 mL注射器中，以2 mL/min速度勻速下滴，樣液滴完后，用10 mL的水淋洗親和柱2次，最后用2 mL甲醇洗脫親和柱，收集洗脫液，氮?dú)獯蹈捎昧鲃?dòng)相定容至1mL，渦旋，過(guò)濾膜，裝瓶上機(jī)檢測(cè)。該法的檢出限為AFG2 0.01 μg/mL，AFG1 0.03 μg/mL，AFB2 0.01 μg/mL，AFB1 0.03 μg/ mL。

1.2.2液相條件

流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水（47：3：50，V/V）；進(jìn)樣量：20 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)：360 nm，發(fā)射波長(zhǎng)440 nm；流速：0.8 mL /min；柱溫：35℃；色譜柱：月旭C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）。

1.2.3評(píng)價(jià)依據(jù)

全球有 100 多個(gè)國(guó)家和地區(qū)制訂了食品和飼料中 AFT限量標(biāo)準(zhǔn)。我國(guó)在GB2761-2017僅對(duì)食品中AFB1采取了嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)，植物油（不包括玉米油、花生油）均要求≤10 μg/kg，玉米油、花生油要求≤20 μg/kg，暫時(shí)沒(méi)有關(guān)于AF總量的限量要求。

1.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線

用AF混標(biāo)配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，具體梯度為（ng/mL）：AFB₁:1.04、2.08、3.12、4.16、5.20、10.4；AFB₂:1.03、2.07、3.10、4.14、5.18、10.3；AFG₁:0.27、0.54、0,81、1.08、1.35、2.70；AFG₂:0.27、0.53、0,80、1.06、1.33、2.66，通過(guò)光化學(xué)衍生器柱后衍生，帶熒光檢測(cè)器的高效液相色譜分離測(cè)定，得出各組分不同濃度下的峰面積，以峰面積對(duì)標(biāo)品的濃度進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果見(jiàn)表1。

聲明：本文所用圖片、文字來(lái)源《中國(guó)油脂》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)與本網(wǎng)聯(lián)系刪除。

相關(guān)鏈接：黃曲霉毒素，色譜，樣品