目的研制玉米全粉中黃曲霉毒素B1成分分析的標準物質。方法采用高效液相色譜法對玉米全粉中黃曲霉毒素B1候選物進行均勻性檢驗、穩(wěn)定性考察,選取8家具有較高檢測水平的實驗室開展多家實驗室聯(lián)合定值。結果均勻性檢驗的方差分析結果顯示F統(tǒng)計值

0引言

黃曲霉毒素B1(aflatoxinB1)是二氫呋喃氧雜萘鄰酮的衍生物,含有一個雙呋喃環(huán)和一個氧雜萘鄰酮(香豆素)。黃曲霉毒素B1是已知的化學物質中致癌性最強的一種,被世界衛(wèi)生組織列為I類致癌物。其廣泛存在于棉籽、玉米、花生、堅果類食品和飼料中,嚴重威脅人類及禽畜的健康,受到世界各國的廣泛關注。為控制黃曲霉毒素的危害,我國GB2761—2017《食品中真菌毒素限量》規(guī)定糧油及其制品中黃曲霉毒素B1的限量值,其中玉米、玉米面及玉米制品限量值為20μg/kg。黃曲霉毒素B1的檢測方法很多,主要有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、膠體金試紙條法、高效液相色譜法和液相色譜–質譜聯(lián)用法等。為確保檢測結果的準確性、可靠性,需要具有溯源性的高準確度的黃曲霉毒素B1基體標準物質作為日常質控方式。

近年來隨著檢測技術的提高及真菌毒素檢測量的增加,對測量結果可靠性和溯源性需求日益增長。標準物質可用于量值溯源及實驗室質量保證能力的評價,在實驗室的檢驗活動中發(fā)揮著重要作用。根據標準物質數據庫檢索,真菌毒素的相關標準物質無論從品種上還是從數量上都無法滿足檢測需要。因此有必要開展系統(tǒng)的真菌毒素類標準物質的研制工作,對保證檢測結果準確可靠性具有重要意義。本研究通過對全國代表性區(qū)域玉米進行篩查,選擇適宜的玉米候選物,經粉碎、均勻化技術、均勻性和穩(wěn)定性檢驗及多家實驗室定值,研制成玉米全粉中黃曲霉毒素B1基體標準物質,以期可為糧油及其制品中黃曲霉毒素B1檢測質量控制、校準測量儀器、考核人員操作水平等提供基準物質,對我國糧食質量安全控制具有重要的意義。

1材料與方法

1.1儀器與試劑

Agilent1260高效液相色譜儀(美國Agilent公司);AutoEVA-60全自動濃縮氮吹儀;固相萃取儀(上海安譜實驗科技股份有限公司);GT10-1高速臺式離心機(北京時代北利離心機有限公司);HY-2調速多用振蕩器(常州國華電器有限公司)。

甲醇、乙腈(色譜純,德國Merk公司);氯化鈉(分析純,中國醫(yī)藥集團有限公司);超純水(香港Waston公司);AflaTest免疫親和柱(3mL,美國VICAN公司);0.2?mPTFE膜針頭過濾器(美國PALL公司);有證標準物質GBW(E)100302甲醇中黃曲霉毒素B1、玉米全粉空白(國家糧食和物資儲備局科學研究院)。

1.2實驗方法

1.2.1標準物質的制備

根據JJF1006—1994《一級標準物質技術規(guī)范》要求,從全國代表性區(qū)域樣品篩選出指標含量滿足要求的玉米候選樣品,候選樣品經除雜、粉碎、過篩、混合,用避光箔袋真空封裝,按100g/袋包裝,共包裝500個單元,進行輻照處理,(20±5)℃保存。

1.2.2均勻性檢驗

均勻性是標準物質的基本屬性,用于描述標準物質特性的空間分布特征。在標準物質的研制(生產)過程中必須進行均勻性評估。均勻性檢驗按照JJF1343—2012《標準物質定值的通用原則及統(tǒng)計學原理》技術規(guī)范要求,從已經分裝好的標準物質中抽取15個單元進行均勻性檢驗。檢驗方法與定值方法相同,每袋重復測定3次。

1.2.3穩(wěn)定性考察

穩(wěn)定性是標準物質的另一個基本屬性,用于描述標準物質的特性值隨時間變化的性質,即描述標準物質特性的時間分布特征。標準物質的穩(wěn)定性包括長期穩(wěn)定性和短期穩(wěn)定性2部分。長期穩(wěn)定性主要考察儲存條件下的穩(wěn)定性,本標準物質儲存于室溫(20±5)℃避光保存的條件下,分別在第0、1、2、3、6個月進行實驗,每次選取2個包裝單元包裝單元。

短期穩(wěn)定性實驗模擬運輸過程中出現的極端環(huán)境進行考察,將樣品置于60℃條件下,分別在0、1、3、5、7d進行監(jiān)測,測定方法與定值方法相同。

1.2.4定值方法研究

標準物質樣品用甲醇提取,以免疫親和柱凈化富集,采用液相色譜法對玉米全粉中黃曲霉毒素B1進行定值。

前處理方法:稱取玉米粉(5g,精確至0.001g)于50mL離心管中,加入1g氯化鈉,準確加入20mL70%甲醇水,渦旋提取30min,7000r/min離心5min,取2mL上清液于潔凈50mL離心管中,加入18mL水稀釋。將上述樣液過免疫親和柱,上樣后加10mL水淋洗2次,淋洗后用真空泵抽干親和柱,用2mL甲醇洗脫親和柱,真空泵抽干后,用氮氣吹干,用1mL流動相溶液定容,過0.22μm濾膜,待上機檢測。

液相色譜條件:Agilent1260高效液相色譜儀配光化學衍生器;AgilentZORBAXEclipsePlusC18液相色譜柱(4.6mm×150mm,5μm),柱溫:40ºC;流動相:A相:乙腈:甲醇(V:V=1:1),B相:水;A:B=35:65(V:V),等梯度洗脫;流速為1.0mL/min,進樣量為50µL;激發(fā)波長為360nm,發(fā)射波長為440nm。

1.2.5多家實驗室聯(lián)合定值

選擇具有中國合格評定國家認可委員會/國家認證認可監(jiān)督管理委員會等計量認可的實驗室為協(xié)作定值單位。定值過程中使用的儀器設備、容量器具都通過了計量檢定或校準。協(xié)助定值單位使用具有量值溯源的標準溶液繪制工作曲線,并用加標回收進行質量監(jiān)控,確保量值的溯源性和準確性。

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