2.5不同前處理?xiàng)l件下油菜幼苗中維生素C含量的比較

在前人研究中，對草莓、圣女果、獼猴桃進(jìn)行維生素C含量測定時，均是將新鮮樣品直接放置于組織勻漿機(jī)進(jìn)行勻漿處理。為驗(yàn)證前處理過程是否會對維生素C的含量檢測造成影響，本研究從液氮貯藏的樣品中隨機(jī)選擇8個油菜幼苗材料，分別采用兩種不同的前處理方式，即進(jìn)行液氮研磨與未研磨兩種處理。液氮研磨處理過程快速且破碎充分；未研磨的則是直接稱取樣品，用均質(zhì)機(jī)勻漿，一些組織難以完全破碎，且耗費(fèi)時間較長。樣品的其它處理過程相同，比較這兩種前處理方式下油菜中維生素C的含量。

前一種處理方式下8個油菜樣品中維生素C含量的平均值為115.71mg/100g，后者其平均值為99.96mg/100g（圖4）。利用液氮研磨之后的油菜樣品所測得的維生素C含量顯著高于未研磨處理的樣品。所選取的8種油菜樣品研磨之后較未研磨時的維生素C含量分別增加了16%、15%、14%、16%、17%、11%、20%、18%，測得維生素C的含量平均增加了約16%。說明利用液氮將樣品研磨成粉末狀后，再用均質(zhì)機(jī)進(jìn)行勻漿處理，更加有利于油菜樣品中維生素C的完全提取。

2. 6液氮貯藏不同時間油菜幼苗的維生素C含量

從液氮貯藏的樣品中隨機(jī)選擇6個油菜幼苗材料，對所選取油菜幼苗樣品進(jìn)行液氮研磨處理，利用多功能粉碎機(jī)將油菜葉片研磨成粉末狀，將磨好的樣品置于50mL離心管中放入液氮罐中貯藏。分別相隔1d、5d、10d、20d、30d測定每個油菜樣品中維生素C的含量，比較在液氮中貯藏的樣品不同時間下維生素C含量的變化情況。表3顯示，在液氮中貯藏的樣品在不同時間下維生素C含量并無顯著變化，測得的維生素C含量的RSD均小于2%，進(jìn)一步說明此方法的可重復(fù)性好。因此此方法可用于大量樣本的長周期檢測，且高效準(zhǔn)確。

3 討論與結(jié)論

維生素C具有很強(qiáng)的還原性，檢測過程要盡可能地在避光條件下進(jìn)行，以最大限度減少樣品中維生素C的氧化。維生素C在適當(dāng)?shù)乃嵝詶l件下比在堿性條件中穩(wěn)定。本研究在國標(biāo)高效液相色譜法測定新鮮樣品中維生素C含量的基礎(chǔ)上進(jìn)行改良建立了一種高效、準(zhǔn)確測定新鮮樣品中維生素C含量的方法，可用于周期長、大量樣本的可重復(fù)性檢測。

本研究選用三種低溫儲存的方式，即4℃、-20℃和液氮，并與新鮮樣品中維生素C含量進(jìn)行比較，結(jié)果表明貯藏溫度越低維生素C降解的速度越慢，利用液氮貯藏樣品可以更好地阻止樣品中維生素C損失。這與王宏霞、周穎君等通過對不同貯藏條件下水果和蔬菜中維生素C的含量比較，發(fā)現(xiàn)低溫條件下維生素C損失最少，貯藏溫度越高，維生素C損失越多的結(jié)果是一致的。

目前尚未有在液氮中貯藏大群體樣品以長期保存并準(zhǔn)確檢測樣品中維生素C含量的相關(guān)研究或報道。在測定范圍內(nèi)，維生素C呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r為0.9999。油菜中維生素C含量的回收率為97.97%～101.40%，精密度實(shí)驗(yàn)的RSD僅為1.84%，說明用該方法測定油菜中維生素C含量的可重復(fù)性較高。

維生素C測定的前處理?xiàng)l件很重要，利用液氮研磨樣品再進(jìn)行均質(zhì)化處理更有利于樣品中維生素C的提取，實(shí)際所測得的維生素C的含量更高，測得維生素C的含量與僅均質(zhì)化相比平均增加了約16%。由于維生素C在常溫條件下易降解，前處理的時間要控制，時間越長，測定的含量越低。優(yōu)化后的維生素C測定方法，一個樣品從前處理到上機(jī)檢測完成只需約10min的時間，大大提高了樣品維生素C的檢測效率。液氮中貯藏的樣品在不同時間下維生素C含量并無顯著變化，測得維生素C的RSD均小于2%。利用液氮可以較長時間保存樣品中的維生素C，可以對大量樣本進(jìn)行長周期、高效準(zhǔn)確且可重復(fù)的檢測。利用此技術(shù)可研究大群體在不同時期、不同部位中維生素C含量的變化情況，有利于作物中維生素C合成的遺傳調(diào)控解析。目前有對黃瓜、番茄、辣椒、擬南芥中維生素C含量的遺傳分析，但是很少報道有關(guān)于油菜的遺傳機(jī)理研究。

隨著生活質(zhì)量的不斷提升，提高蔬菜和水果中維生素C含量是最直接的方式。值得注意的是，油菜幼苗以及油菜薹中都含有豐富的維生素C，但是相關(guān)的研究報道甚少。在建立高效、準(zhǔn)確維生素C含量鑒定方法的基礎(chǔ)上，可開展對油菜種質(zhì)資源維生素C含量的測定，有助于解析遺傳機(jī)理，挖掘高維生素C含量的油菜種質(zhì)，加快培育高維生素C新品種，為以新需求為導(dǎo)向的油菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略，以及提高油菜的菜用價值奠定基礎(chǔ)。

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