醫(yī)用橡膠密封件的制備過(guò)程一般包括混煉、壓、壓出、硫化、沖切、清洗、包裝等工序，其中，硫化工藝是將線性聚合物通過(guò)插入交聯(lián)分子鏈，形成空間網(wǎng)狀大分子。硫化體系包括硫化劑、促進(jìn)劑、活化劑以及填料、炭黑增強(qiáng)劑等添加劑合集，橡膠經(jīng)硫化后可增強(qiáng)其抗撕裂強(qiáng)度、拉伸強(qiáng)度、彈性、韌性及抗壓縮變形性以延長(zhǎng)橡膠的使用壽命。

2-巰基苯并噻唑(2-mercaptobenzothiazole，1)是應(yīng)用最為廣泛的一類(lèi)噻唑類(lèi)促進(jìn)劑，但是近年來(lái)，其毒性受到毒理學(xué)家的廣泛關(guān)注。2006年，美國(guó)產(chǎn)品質(zhì)量研究院(productqualityresearchinstitIlte，PQ剛)發(fā)表的“鼻吸入制劑可提取物與浸出物安全關(guān)注閾值和最佳解決方案”中定義并解釋了安全關(guān)注閾值(safetyconcernthreshold，SCT)的概念，指出一些特殊化合物不適合采用SCT值計(jì)算安全閾值，應(yīng)采取更加靈敏的檢測(cè)儀器和方法，其中就包括1。由l衍生出的次磺酰胺類(lèi)促進(jìn)劑是目前世界上使用最為廣泛的促進(jìn)劑，具有與噻唑類(lèi)促進(jìn)劑相同的促進(jìn)基，同時(shí)增加了防焦基和活性基。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，次磺酰胺類(lèi)促進(jìn)劑熱分解后可釋放出l，并與脂肪酸鋅鹽活化劑形成活性促進(jìn)劑絡(luò)合物以加速硫化進(jìn)程。

本試驗(yàn)采用HPLC法同時(shí)測(cè)定橡膠中的l、2-巰基苯并咪唑(2-mercaptobenzimidazole，2)、苯并噻唑(benzothiazole，3)、2-甲硫基苯并噻唑(2-methylmercaptobenzothiazole，4)，以期為4種添加劑在醫(yī)用橡膠制品中的含量測(cè)定與其在藥品中的安全風(fēng)險(xiǎn)提供參考。

一、儀器與試藥

LC-20AD型高效液相色譜儀(日本島津公司)；NV-1lOO型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛(ài)明儀器有限公司)；OrganomationN-EVAPl2型氮吹儀(美國(guó)Organomation觸sociates公司)；HLB固相萃取小柱(美國(guó)Watcrs公司)。

1對(duì)照品(純度99.6％，批號(hào)NCVWD)、2對(duì)照品(純度＞98.0％，批號(hào)KLJ50-GN)、3對(duì)照品(純度96％，批號(hào)RTZFE.GM)、4對(duì)照品(純度＞98.0％，批號(hào)FZH01-ASBC)均購(gòu)于日本TCI公司；甲醇、乙腈、二氯甲烷均為色譜純，均購(gòu)于上海沃凱生物技術(shù)有限公司；其他試劑均為分析純，均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司：膠塞(企業(yè)B，規(guī)格φ20，批號(hào)l809308)；三元乙丙(EthylenePropyleneDieneMonomner，EPDM)卡箍密封圈(企業(yè)C，規(guī)格φ38)。

二、方法與結(jié)果

1、色譜條件

色譜柱TC-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動(dòng)相A為5mmol／L磷酸二氫鉀溶液，B為乙腈：甲醇(9:1)，梯度洗脫(旺8min，A75％；8-12min，A75％-40％：12-25min，A40％：

25-27min，A40％-75％；27L-35min，A75％)；流速1.0ml／min；柱溫40℃；檢測(cè)波長(zhǎng)300nm；進(jìn)樣量20μl。

2、溶液配制

（1）對(duì)照品溶液的配制

對(duì)照品溶液：分別精密稱(chēng)取l、2、3、4對(duì)照品25.1、25.3、266.4、25.3mg各置于10ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得對(duì)照品溶液。

高濃度混合對(duì)照品溶液：分別移取對(duì)照品溶液0.6、1.0、0.6、0.6ml置10ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻后即得高濃度混合對(duì)照品溶液。

低濃度混合對(duì)照品溶液：分別移取對(duì)照品溶液1.7、0.5、1.7、1.7ml置100ml量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻后即得低濃度混合對(duì)照品溶液。

（2）模擬溶劑

模擬溶劑I：0.00lmol/L鹽酸溶液。

模擬溶劑II：純化水。

模擬溶劑III：lmmol／L氫氧化鈉溶液。

模擬溶劑Ⅳ：15％乙醇溶液。

（3）供試品溶液的配制與前處理

受控提取供試液的制備：取橡膠材料約1.0g，剪碎，置于中硼硅玻璃瓶?jī)?nèi)(規(guī)格100m1)，加入二氯甲烷40ml后密封，(16士5)℃超聲波水浴提取30min，取出放冷，過(guò)濾，采用適量二氯甲烷蕩洗容器，濾液及洗液置于100ml量瓶中，同法提取2次，合并濾液并定容，得材料提取液。

受控提取供試液的前處理：取上述材料提取液2ml于lOml具塞刻度試管中，用甲醇稀釋至4ml，即得受控提取供試液，同法制備空白溶液。

模擬提取供試液的制備：(1)膠塞：以模擬溶劑I～Ⅳ為提取溶劑，分別按每西林瓶10ml灌裝，加待測(cè)膠塞，壓鋁蓋，倒立放置，121℃高壓滅菌lh，放冷至室溫，將各提取液分別合并至燒杯內(nèi)，得膠塞供試液I～Ⅳ，同法制備空白。(2)EPDM卡箍密封圈：以模擬溶劑I～Ⅳ為提取溶劑，將EPDM卡箍密封圈裝入管道中，灌裝，密封，60℃高溫烘箱放置24h，取出放冷，得EPDM卡箍密封圈供試液I～Ⅳ，同法制備空白。

模擬提取供試液的前處理：取上述模擬提取供試液I～Ⅲ各25ml，分別加入6mol／L鹽酸溶液20、40、80μl，調(diào)至pH1.8～2-3，混勻。取甲醇、水各5ml依次活化固相萃取小柱，提取液以流速1.5～2ml／min通過(guò)固相萃取小柱，取水20m1淋洗，甲醇4ml洗脫，收集洗脫液于5ml具塞刻度試管，用甲醇定容，即得。取供試液Ⅳ10ml，加入6mol／L鹽酸溶液100μl，調(diào)至pH1.2～1.5，加入氯化鈉4g吸水，加入甲基叔丁基醚2ml，渦旋3min，取上清液于10ml具塞刻度試管中，萃取3次，合并上清液，40℃水浴，氮吹至0.5ml，甲醇定容至2m1，即得。

3、受控提取因素考察

以乙醇、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正己烷為提取溶劑，考察采用回流、超聲2種提取方式對(duì)膠塞中目標(biāo)待測(cè)物提取效率的影響。結(jié)果顯示膠塞中只能檢測(cè)出2，如圖1所示，當(dāng)二氯甲烷與甲基叔丁基醚作為提取溶劑時(shí)，提取效率較高，且回流與超聲提取效率相當(dāng)。故本研究以二氯甲烷、甲基叔丁基醚為溶劑，進(jìn)一步考察回流溫度對(duì)提取效率的影響。結(jié)果如圖2所示，對(duì)于二氯甲烷和甲基叔丁基醚，溫度對(duì)其提取效率的影響不顯著，高于沸點(diǎn)20℃左右即可達(dá)到最大提取效率。雖然超聲提取操作簡(jiǎn)便、提取時(shí)間較短，但其在超聲過(guò)程中產(chǎn)熱不均、溫度難以控制。為了解決上述問(wèn)題，本試驗(yàn)通過(guò)使用循環(huán)水控溫的措施，使超聲過(guò)程中溫度維持在(16士5)℃，確定以二氯甲烷超聲提取為最佳提取方式。

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