試驗旨在建立檢測飼料中16種氨基酸的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS）方法。采用C18反相色譜柱進行組分分離，以0.1%甲酸水和甲醇按梯度洗脫程序進行洗脫，優(yōu)化色譜條件和質(zhì)譜參數(shù)。結(jié)果表明，16種氨基酸在0.01～50.00μmol/L范圍內(nèi)線性良好，線性相關(guān)系數(shù)均大于0.991 0，檢出限為1～10 ng/g，定性重復(fù)性為0.02%～0.12%，定量重復(fù)性為0.11%～0.94%，回收率為97.3%～104.0%。在不同種類的樣品測試中，該方法與國家標(biāo)準(zhǔn)方法的相對偏差均小于5%，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。試驗方法檢測效率高、靈敏度高、回收效果良好、定性和定量準(zhǔn)確，能夠滿足飼料中16種氨基酸的常規(guī)檢測。

氨基酸是含有堿性氨基和酸性羧基的一類有機化合物，是構(gòu)成生命體蛋白質(zhì)的基本物質(zhì)。蛋白質(zhì)作為人體必需的營養(yǎng)物質(zhì)，在人體內(nèi)不能被直接利用，而是在胃腸道中經(jīng)過多種消化酶的作用，將高分子蛋白質(zhì)分解為低分子的氨基酸后被人體吸收。氨基酸進入血液中與其輸出速度幾乎相等，使體內(nèi)氨基酸代謝處于動態(tài)平衡。當(dāng)攝入的蛋白質(zhì)含量適宜時，蛋白質(zhì)和氨基酸之間不斷合成和分解形成一種平衡，從而達(dá)到機體的營養(yǎng)平衡狀態(tài)。蛋白質(zhì)突然增加或減少攝入量時，平衡機制會被破壞。如果持續(xù)時間過長，可能會導(dǎo)致體內(nèi)抗體的死亡。飼料作為畜禽動物攝入的食物，對其所含氨基酸含量的監(jiān)測至關(guān)重要。

檢測氨基酸的方法有氨基酸分析儀法、毛細(xì)管電泳檢測紫外測定法、衍生-電位傳感法、高效液相色譜法等。氨基酸分析儀法最為常見，但分析時長在1 h以上、檢測效率低；毛細(xì)管電泳檢測紫外測定法存在精度低、檢測結(jié)果不準(zhǔn)確的缺點；高效液相色譜法檢測時長較長、需要柱前衍生、操作步驟煩瑣。所以，建立一種能快捷準(zhǔn)確的測定飼料中氨基酸含量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法迫在眉睫。目前，已有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS）檢測食品和保健品中的氨基酸含量。本研究建立能同時測定不同種類的飼料中16種氨基酸的LC-MS方法，為飼料中氨基酸含量的測定提供技術(shù)參考。

1材料與方法

1.1試驗儀器

Ulti Mate 3000液相色譜系統(tǒng)（Thermo）、TSQ Quantiva質(zhì)譜儀（Thermo）、MS205DU十萬分之一天平（Mettler Toledo）、101-1A電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司）、MTN-5800A氮吹儀（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）、渦輪混合器。

1.2試驗試劑

16種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 nmol/m L）購自德國曼默博爾公司；鹽酸（優(yōu)級純）購自四川西隴科學(xué)有限公司；甲酸（色譜純）購自賽默飛世爾科技（中國）有限公司；購自甲醇（色譜純）Sigma公司。

6 mol/L鹽酸溶液：500 m L鹽酸和500 m L等比例混合；0.1%甲酸溶液：移取1.0 m L甲酸于1 000 m L容量瓶中，用超純水定容至刻度。

1.3試驗方法

1.3.1色譜條件

色譜柱：Hypersil GOLD 50×2.1 mm,1.9μm；柱溫：40℃；流速：0.2 m L/min；洗脫程序見表1。

1.3.2質(zhì)譜條件

離子源：可加熱電噴霧離子源（H-ESI）；掃描模式：正離子掃描；噴霧電壓：3 500 V；鞘氣：35 psi；輔助氣：10 psi；離子傳輸管溫度：350℃；源溫度：300℃；16種氨基酸質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測（SRM）參數(shù)見表2。

1.3.3標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

準(zhǔn)確移取1.2中的16種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 m L于10 m L棕色容量瓶中，用0.1%甲酸水溶液稀釋并定容至刻度，配制成濃度為10μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.4樣品前處理

稱取試樣約100 mg，置于20 m L水解管中，加入6 mol/L的鹽酸溶液10.0 m L，于氮氣下充氮3 min，趕去管中空氣，加蓋；（110±2）℃的電熱鼓風(fēng)干燥箱中水解24 h，取出冷卻，搖勻，使用快速定性濾紙過濾至另一10 m L離心管中；量取0.1 m L樣液于55℃下氮氣吹干，按樣品中氨基酸含量，加入1～10 m L的0.1%甲酸水溶液復(fù)溶，過0.22μm水相濾膜后上機測定，上機溶液中各氨基酸含量應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相近。

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