采用亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法進(jìn)行腎上腺酮的定量分析研究。紫外-可見吸收光譜顯示，腎上腺酮與顯色試劑顯色后，溶液在498 nm出現(xiàn)強(qiáng)吸收峰?？疾炱鋸?qiáng)度與腎上腺酮濃度間的數(shù)學(xué)關(guān)系，得到498 nm處峰強(qiáng)與腎上腺酮濃度負(fù)對(duì)數(shù)之間的線性方程、線性范圍和檢測限，從而實(shí)現(xiàn)腎上腺酮的定量分析，為該類藥物的質(zhì)量控制等提供一定研究基礎(chǔ)。

腎上腺酮的檢測方法主要包括高效液相色譜法、電化學(xué)法等。有文獻(xiàn)報(bào)道利用金納米粒子/聚吡咯復(fù)合物修飾的PGE電極進(jìn)行腎上腺酮的電化學(xué)定量分析，實(shí)現(xiàn)了藥物血清和尿液加標(biāo)后腎上腺酮的含量測定，檢測限為0.09μM。雖然相比于未修飾的PGEs，新型電極將腎上腺酮的氧化電流增大了5倍，但其制備過程也需要較長時(shí)間。劉琪等人利用UPLC-MS/MS法定量分析類固醇激素，其中腎上腺酮的定量限為0.530 ng/mL。郭黛蘋等人采用反相離子對(duì)高效液相色譜法檢測腎上腺素與腎上腺酮，其檢測限為2.8 mg/L。

比色法因儀器價(jià)廉、操作簡便、通用性強(qiáng)等特點(diǎn)得到廣泛應(yīng)用。其原理是利用待測物自身顏色或加入顯色劑后的顏色深度與待測物濃度間的關(guān)系來進(jìn)行分析。

腎上腺酮作為藥物，使用時(shí)劑量過高會(huì)增加產(chǎn)生副作用的風(fēng)險(xiǎn)，因此有必要建立更加方便快捷、靈敏通用的腎上腺酮分析方法。本文基于亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法，對(duì)腎上腺酮定量分析進(jìn)行系統(tǒng)研究。

1儀器與試劑

1.1儀器

T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限公司)，分析天平(梅特勒托利多)。

1.2試劑

腎上腺酮鹽酸鹽(西格瑪奧德里奇有限公司)，亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉(北京化工廠)。

2方法

2.1腎上腺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

10 mg腎上腺酮鹽酸鹽粉末精密稱定，用超純水溶解、稀釋并定容至10 mL量瓶中，制成濃度為1.00 mg/mL的儲(chǔ)備溶液，低濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液均由儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋而得。

2.2顯色過程

1 mL腎上腺酮儲(chǔ)備溶液加入至0.5 mL亞硝酸鈉溶液(5%)，混勻放置6分鐘，再加入0.5 mL硝酸鋁溶液(10%)搖勻放置6分鐘，最后加入氫氧化鈉溶液(5 mol/L)，混勻作用15分鐘顯色即可。

3結(jié)果與討論

3.1顯色后溶液的穩(wěn)定性考察

將1 mg/mL腎上腺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液與顯色劑顯色，考察顯色后1小時(shí)內(nèi)溶液的紫外-可見吸收光譜變化(圖1)。從圖中可以看出，顯色1分鐘后特征吸收498 nm即出現(xiàn)，且隨著顯色時(shí)間的不斷增加，其峰強(qiáng)緩慢增加，但1小時(shí)內(nèi)其峰強(qiáng)變化不大，相對(duì)穩(wěn)定。綜合考慮檢測時(shí)間和顯色完全程度兩個(gè)因素，最終本實(shí)驗(yàn)選擇15分鐘作為顯色時(shí)間，既保證顯色相對(duì)完全，又保證了較短的檢測時(shí)間。

3.2分析方法的建立

分別將1 mg/mL、0.1 mg/mL、10μg/mL、1μg/mL、等體積水溶液與顯色劑顯色，顯色后溶液經(jīng)適當(dāng)稀釋，采集紫外-可見吸收光譜，見圖2(A)，隨著腎上腺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度降低，498 nm處的峰強(qiáng)也逐漸降低，進(jìn)一步根據(jù)498 nm處的峰強(qiáng)隨腎上腺酮標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度變化關(guān)系進(jìn)行線性擬合，見圖2(B)。得到峰強(qiáng)與濃度負(fù)對(duì)數(shù)間的線性方程為y=3.67218-0.72556x,R2=0.99901，線性范圍為10μg/mL-1 mg/mL，根據(jù)信噪比(S/N)大于3，計(jì)算出檢測限(limit of detection,LOD)為9.06μg/mL。

3.3分析方法的驗(yàn)證

配制濃度分別為50μg/mL和0.5 mg/mL的腎上腺酮溶液，按照所建立的分析方法測定其498 nm處峰強(qiáng)，每個(gè)樣品測5次，5個(gè)數(shù)據(jù)取平均值，并計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，來驗(yàn)證方法的重復(fù)性。進(jìn)一步將峰強(qiáng)平均值帶入線性方程中，求得其濃度的測定值，由測定值與真實(shí)值的比值-回收率驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果見表1，由表1可以看出，該方法具有較高測定準(zhǔn)確度和精度。

4結(jié)論

本文基于亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法對(duì)腎上腺酮進(jìn)行了定量分析，建立了498 nm處峰強(qiáng)度與腎上腺酮濃度負(fù)對(duì)數(shù)間的線性關(guān)系，并對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果表明，本文所建立方法可以快速、準(zhǔn)確的測定腎上腺酮的含量，為該藥物的質(zhì)量控制和臨床用藥體內(nèi)藥物監(jiān)測等提供通用、便捷的檢測手段。

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