目的:評價(jià)不同商品化試劑定量檢測臨床血清樣本乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)性能的差異。方法:(1)應(yīng)用5種商品化HBV DNA定量試劑(2種進(jìn)口試劑A和B,3種國產(chǎn)試劑C、D和E)分別對6例混合血清樣本進(jìn)行檢測，并對結(jié)果進(jìn)行比較；3種國產(chǎn)試劑對6例混合血清樣本以及103和106兩個(gè)水平的HBV DNA國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)090137和GBW(E)090139分3個(gè)批次檢測，分析其精密度和正確度。(2)采用3種國產(chǎn)試劑定量檢測43例慢性乙型肝炎患者血清樣本HBV DNA,并分析其相關(guān)性和一致性。結(jié)果:(1)定量檢測6例混合血清樣本中HBV DNA,試劑B、C與A的檢測結(jié)果差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),而試劑D、E的檢測結(jié)果均顯著低于試劑A(P<0.05)。(2)定量檢測6例混合血清樣本以及103和106兩個(gè)水平的HBV DNA國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，3種國產(chǎn)試劑的CV均小于5%,國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的實(shí)際檢測值與靶值的差值絕對值均小于0.4 log10 IU/mL,精密度和正確度滿足行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。(3)對于43例臨床血清樣本，試劑C、D和E的陽性檢出率分別為95.35%(41/43)、95.35%(41/43)、86.05%(37/43);對于檢測結(jié)果均在3種試劑定量范圍內(nèi)的24例臨床血清樣本，HBV DNA定量檢測結(jié)果為C>D>E(P<0.05),3種試劑的檢測結(jié)果兩兩間均呈線性相關(guān)(C vs D:R2=0.93,Y=0.973X-0.164;C vs E:R2=0.61,Y=0.770X+0.210;D vs E:R2=0.69,Y=0.809X+0.270),試劑C和D、C和E、D和E的Bland-Altman分析發(fā)現(xiàn)其檢測結(jié)果差值平均值分別為0.28、0.80和0.51 log10 IU/mL,相應(yīng)的95%一致性界限分別為(-0.30,0.86)、(-0.62,2.21)、(-0.74,1.77),相應(yīng)的95%一致性界限以內(nèi)的點(diǎn)分別占95.83%(23/24)、95.83%(23/24)和91.67%(22/24),其一致性界限范圍內(nèi)檢測值的最大差異分別為0.85、1.96和1.25 log10IU/mL。試劑C和D、C和E、D和E的檢測結(jié)果差值>1.0 log10 IU/mL的血清樣本分別占0(0/24)、33.33%(8/24)和25.00%(6/24)。結(jié)論:滿足行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的不同商品化國產(chǎn)試劑定量檢測臨床血清樣本HBV DNA的性能存在顯著差異，在常規(guī)臨床實(shí)踐中互換用于臨床決策時(shí)務(wù)必慎重。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是一個(gè)嚴(yán)重的全球公共衛(wèi)生問題，據(jù)估計(jì)全球有2.92億HBV感染者(HBsAg陽性),其中我國約有8600萬。HBV可造成慢性感染，進(jìn)而發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞癌，危及患者生命。血清中高水平HBV DNA已被確定為肝硬化和肝細(xì)胞癌的主要危險(xiǎn)因素。通過抗病毒治療抑制HBV DNA復(fù)制，是預(yù)防和延緩慢性乙肝患者進(jìn)展為肝硬化、終末期肝病和肝細(xì)胞癌的重要措施。敏感、準(zhǔn)確定量HBV DNA在確定HBV感染階段、治療指征、治療終點(diǎn)、監(jiān)測治療反應(yīng)以及早期識別耐藥中起著至關(guān)重要的作用。國際肝病協(xié)會對于HBV DNA超敏定量檢測的試劑要求包括高靈敏度10～15 IU/ml、寬線性范圍1～9 log10 IU/mL、特異性強(qiáng)和重復(fù)性好。對于大多數(shù)患者HBV管理需要長期監(jiān)測HBV DNA,同一患者可能在不同的醫(yī)院監(jiān)測其體內(nèi)病毒載量，而不同的醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室可能應(yīng)用不同的檢測試劑。目前我國市場上有多種進(jìn)口和國產(chǎn)的商品化HBV DNA超敏定量試劑，并且均已獲國家藥品監(jiān)督管理局(NMPA)批準(zhǔn)，其中羅氏的AmpliPrep/COBAS TaqMan(CAP/CTM)HBV診斷試劑和雅培的RealTime HBV診斷試劑是目前國際上通用的HBV DNA檢測試劑,前者在國際上應(yīng)用更廣泛。由于不同商品化試劑的檢測性能可能存在差異，而臨床上不同的實(shí)驗(yàn)室采用不同的商品化試劑定量檢測特定患者血清中HBV DNA,可能導(dǎo)致其檢測結(jié)果不同。因此，本研究主要擬對3種不同商品化國產(chǎn)試劑定量檢測臨床血清樣本中HBV DNA的結(jié)果進(jìn)行比對，以評價(jià)不同試劑的臨床性能以及在常規(guī)臨床實(shí)踐中互換使用的可接受性。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源

收集2019年4月我院收治的慢性HBV感染患者血清若干份，制備成6個(gè)濃度的混合血清，用于檢測。收集2019年7月我院收治的43例慢性HBV感染患者血清樣本，其中男25例，女18例，年齡20～70歲。

1.2儀器與試劑

AmpliPrep/COBAS TaqMan(CAP/CTM)HBV診斷試劑(試劑A,羅氏);RealTime HBV診斷試劑(試劑B,雅培);3種國產(chǎn)HBV核酸定量檢測試劑(分別為試劑C、D和E);乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)090137和GBW(E)090139(北京康徹斯坦生物技術(shù)有限公司)。COBAS®AmpliPrep/COBAS®TaqMan®病毒載量檢測系統(tǒng)(羅氏);M2000病毒載量檢測系統(tǒng)(雅培);三家國產(chǎn)試劑相配套的半自動磁珠式核酸提取儀；COBAS®Z480全自動熒光定量PCR分析儀(羅氏)。

1.3方法

分別用6種試劑對6例混合血清樣本進(jìn)行平行檢測(表1),試劑A和B分別檢測一次，試劑C、D和E各分3批進(jìn)行3次檢測。試劑A和B分別采用各自配套的封閉系統(tǒng)進(jìn)行核酸提取和擴(kuò)增；試劑C、D和E分別采用各自配套的半自動磁珠式核酸提取儀進(jìn)行核酸提取，擴(kuò)增均在COBAS®Z480全自動熒光定量PCR分析儀上進(jìn)行。具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

分別用3種國產(chǎn)試劑C、D、E對43例慢性HBV感染患者血清樣本進(jìn)行平行檢測。核酸提取分別采用各自配套的半自動磁珠式核酸提取儀進(jìn)行，擴(kuò)增均在COBAS®Z480全自動熒光定量PCR分析儀上進(jìn)行。具體操作步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

各試劑每批次均做陰性對照和北京康徹思坦生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的GBW(E)090137(靶值1.41×103 IU/mL)、GBW(E)090139(靶值4.6×106 IU/mL)兩個(gè)水平的HBV DNA血清標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。結(jié)果判讀嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。確保質(zhì)控在控后再進(jìn)行結(jié)果分析。

定性檢測結(jié)果以檢出或未檢出表示，低于相應(yīng)試劑廠家聲稱的檢出限判定為未檢出。只有超過該試劑聲稱的定量下限且在其定量線性范圍的定量檢測結(jié)果用于進(jìn)一步分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有檢測結(jié)果均以log10 IU/mL表示，采用SPSS 17.0和Medcalc 15.2.2軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s表示，采用配對樣本t檢驗(yàn)；非正態(tài)分布的計(jì)量資料，采用Wilcoxon符號秩和檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用配對χ2檢驗(yàn)；兩種檢測方法的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性以及線性回歸分析；采用Bland-Altman圖分析兩種檢測方法的一致性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

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