北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
Yan等通過鏈霉親和素突變體(Strep-Tactin)瓊脂糖凝膠和SEC純化了親水性多肽標(biāo)簽(FLAG-tag)標(biāo)記中性氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(B0AT1)和鏈霉親和素結(jié)合肽標(biāo)簽(Strep-Tag)標(biāo)記ACE2,研究在有無RBD的情況下，ACE2與B0AT1復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)差異，推動(dòng)病毒感染的分子基礎(chǔ)研究。Hillen等利用組氨酸標(biāo)記(HisTrap)親和色譜柱純化冠狀病毒復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的主要RNA聚合酶(Nsp 12)及其輔助因子Nsp 7和Nsp 8,分析這些蛋白質(zhì)與RNA依賴性聚合酶的結(jié)構(gòu)，應(yīng)用于病毒RNA復(fù)制研究。
Gao等用Ni-NTA親和色譜柱純化了Nsp 12、Nsp 7和Nsp 8,解析了該聚合酶與抗病毒藥物瑞德西韋(remdesivir)的結(jié)合方式。Riva等利用Ni-NTA親和色譜柱對(duì)SARS-CoV-2的木瓜蛋白酶樣蛋白酶(PLpro)和主蛋白酶(Mpro)進(jìn)行純化，從約 12 000 個(gè)臨床階段的小分子藥物中篩選出13種具有治療效果的小分子抑制劑。Yuan研究組將Protein G親和柱用于患者體內(nèi)SARS-CoV特異性人類單克隆抗體(CR3022)的純化，研究發(fā)現(xiàn)CR3022可有效結(jié)合SARS-CoV-2的RBD蛋白，是一種潛在的抗病毒藥物。Ju等使用Protein A親和柱對(duì)SARS-CoV-2感染者B細(xì)胞中RBD特異性單克隆抗體進(jìn)行純化，從206種純化的單克隆抗體中發(fā)現(xiàn)抗SARS-CoV-2中和活性抗體，且該抗體基本不結(jié)合SARS-CoV和MERS-CoV。
表1統(tǒng)計(jì)了上述AC和SEC純化的多種新型冠狀病毒相關(guān)蛋白質(zhì)，并列舉了純化使用的蛋白標(biāo)簽。
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在新型冠狀病毒肺炎疫情暴發(fā)以來，武漢病毒研究所申請(qǐng)的瑞得西韋治療2019新型冠狀病毒的用途專利引起了廣泛關(guān)注，盡管用途發(fā)明是醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域?qū)＠闹匾问?，但是人們?duì)其的認(rèn)識(shí)程度卻并不深刻，本文將從用途發(fā)明的定義、分類及具體案例探討醫(yī)藥化學(xué)領(lǐng)域用途發(fā)明的創(chuàng)造性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)及撰寫策略。
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目前核酸檢測(cè)試劑品牌眾多，檢測(cè)靶標(biāo)位置、靈敏度不盡相同，為更好地滿足新冠核酸檢測(cè)需求，中國(guó)計(jì)量院全新推出新型冠狀病毒全序列假病毒標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
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親和色譜和尺寸排阻色譜是Nature, Science和Cell期刊報(bào)道文獻(xiàn)中使用最頻繁的蛋白質(zhì)純化技術(shù)。其中，AC是通過生物分子與功能配基的特異性作用對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化，是實(shí)驗(yàn)室中生物大分子分離純化最具特異性和高效性的技術(shù)，但配基昂貴且偶聯(lián)技術(shù)復(fù)雜，限制了其應(yīng)用；SEC是根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量差異對(duì)待測(cè)物中各組分進(jìn)行分離，優(yōu)勢(shì)在于分辨率高，操作簡(jiǎn)單，但對(duì)于樣品純度要求很高，因此常用于親和色譜后蛋白質(zhì)的進(jìn)一步純化。在當(dāng)前新型冠狀病毒研究中，AC與SEC常被用于純化病毒表面S蛋白、ACE2、S蛋白
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Gao等用Ni-NTA親和色譜柱純化了Nsp 12、Nsp 7和Nsp 8,解析了該聚合酶與抗病毒藥物瑞德西韋(remdesivir)的結(jié)合方式。Riva等利用Ni-NTA親和色譜柱對(duì)SARS-CoV-2的木瓜蛋白酶樣蛋白酶(PLpro)和主蛋白酶(Mpro)進(jìn)行純化，從約 12 000 個(gè)臨床階段的小分子藥物中篩選出13種具有治療效果的小分子抑制劑。Yuan研究組將Protein G親和柱用于患者體內(nèi)SARS-CoV特異性人類單克隆抗體(CR3022)的純化，研究發(fā)現(xiàn)CR3022可有效結(jié)合SA
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新型冠狀病毒研究已取得一定進(jìn)展，分離技術(shù)在其中發(fā)揮著重要作用。其中，AC和SEC廣泛用于病毒相關(guān)蛋白質(zhì)純化中；精密儀器制造業(yè)的發(fā)展，促使HPLC分離效率的提升，是完成高靈敏度、快速解決病毒代謝組學(xué)分析的關(guān)鍵手段；新材料和電子技術(shù)的進(jìn)步，帶動(dòng)磁珠和微納分離技術(shù)的靈敏度提升和應(yīng)用范圍拓展，尤其是對(duì)化學(xué)試劑消耗降低，實(shí)現(xiàn)了對(duì)環(huán)境的友好，是解決細(xì)胞分析、核酸分離和免疫學(xué)檢測(cè)的首選技術(shù)；傳統(tǒng)的離心技術(shù)在病毒顆粒和細(xì)胞分離中發(fā)揮著不可替代的作用；電泳技術(shù)主要用于PCR產(chǎn)物分析。
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