目的：分析鹽炙對(duì)廣西余甘子中黃酮類(lèi)成分清除DPPH自由基（1,1-二苯基-2-苦肼基）譜效關(guān)系的影響。方法：采用高效液相色譜法，建立13批廣西不同產(chǎn)地余甘子鹽炙前后黃酮類(lèi)成分的HPLC指紋圖譜，結(jié)合DPPH自由基體外抗氧化實(shí)驗(yàn)，用改進(jìn)的灰色關(guān)聯(lián)分析法分析整體的指紋圖譜與藥效之間的關(guān)聯(lián)。結(jié)果：確定了20個(gè)特征共有峰，清除DPPH自由基作用是這20個(gè)特征共有峰所代表的化學(xué)成分組成的化學(xué)成分群共同作用的結(jié)果，鹽炙后清除DPPH自由基作用增強(qiáng)。結(jié)論：鹽炙后廣西余甘子黃酮類(lèi)成分的HPLC指紋圖譜與清除DPPH自由基作用增強(qiáng)具有相關(guān)性，為其鹽炙品質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供參考。

余甘子為大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果實(shí)，又名牛甘子、喉甘子、魚(yú)木果等 ，廣西是其原植物主要分布區(qū)之一。其具有清熱涼血、消食健胃、生津止咳等功效。余甘子主要含酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)化合物，現(xiàn)代藥理研究顯示余甘子中黃酮類(lèi)化合物具有抗氧化、抑制肝癌細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)免疫功能、抗炎等作用。指紋圖譜作為綜合性可量化的現(xiàn)代分析手段，充分的展現(xiàn)提取物質(zhì)的獨(dú)特信息。本文在前期研究的基礎(chǔ)上，以廣西余甘子的生品和鹽炙品為研究對(duì)象，建立13批廣西不同產(chǎn)地余甘子鹽炙前后黃酮類(lèi)成分的HPLC指紋圖譜，結(jié)合DPPH自由基體外抗氧化實(shí)驗(yàn)，用改進(jìn)的灰色關(guān)聯(lián)分析法分析整體的指紋圖譜與藥效之間的關(guān)聯(lián)，建立譜效關(guān)系，為進(jìn)一步分析廣西余甘子鹽炙后黃酮類(lèi)成分的抗氧化藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為其鹽炙品質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 1260 Infinity Ⅱ液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），Water SunFire C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，XS205DU型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司），GZX-GF-Ⅱ型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司），DTA-42型超聲波清洗機(jī)，DK-98-Ⅱ型電熱恒溫水浴鍋（天津市泰斯特儀器有限公司），EV311型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）。

1.2 試藥

30~60目聚酰胺（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)20150413）；蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100080-200306，供HPLC法測(cè)定純度91.7%）；食用鹽（孝感廣鹽華源制鹽有限公司，批號(hào)20160721C，經(jīng)測(cè)定，按氯化鈉計(jì)，氯化鈉含量99.61%）；乙腈、甲醇和磷酸均為色譜純；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。所有樣品經(jīng)挑選為飽滿、質(zhì)實(shí)、無(wú)發(fā)霉、無(wú)蟲(chóng)害者，并經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)郭敏副教授鑒定均為大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的成熟果實(shí)。將挑選后的樣品用超純水洗凈，干燥，去核，粉碎制成直徑為0.5~0.8 cm的粗顆粒，充分混合均勻，再按四分法取樣，每份約200 g，備用。藥材詳情見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品炮制

2.1.1 生品

取余甘子粗顆粒100 g，粉碎，過(guò)4號(hào)篩，混合均勻，備用。

2.1.2 鹽炙品

取余甘子粗顆粒約100 g，按前期優(yōu)選工藝鹽炙，加入鹽水200 mL（含5 g食用鹽），拌勻并吸盡，悶透12 h后，攤薄在瓷盤(pán)上，立即放入105 ℃烘箱中，烘干（溫度偏差＋0.5℃）時(shí)取出，放涼，粉碎，過(guò)4號(hào)篩，混合均勻，備用。

2.2 色譜條件

色譜柱C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫（0~10 min，5%~10%A；10~20 min，10%~13%A；20~25 min，13%~14%A；25~35 min，14%~15%A；35~55 min，15%~20%A；55~56 min，20%~40%A；56~70 min，40%A），流速：1 mL·min-1，柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm。

2.3 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

取蘆丁對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇配成蘆丁1.860 7 mg·mL-1的溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備

分別取“2.1.1”項(xiàng)下生品和“2.1.2”項(xiàng)下鹽炙品約2 g，精密稱(chēng)定，置圓底燒瓶中，在文獻(xiàn)報(bào)道的基礎(chǔ)上，加入60%乙醇溶液190 mL，加熱回流5.5小時(shí)，放冷，過(guò)濾，濾液減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0.08 g·mL-1的樣品提取液。取浸泡好的聚酰胺樹(shù)脂，濕法裝柱（內(nèi)徑為1.2 cm，柱高為15 cm），用水洗至無(wú)醇味，精密量取上述樣品提取液20 mL，用水60 mL洗脫，棄去洗脫液，再用50%乙醇溶液70 mL（0.5 mL·min-1）洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 線性關(guān)系

分別精密吸取“2.3”項(xiàng)下的對(duì)照品儲(chǔ)備液0.15、0.3、0.6、1.2、2.5、4.8 mL置5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，按“2.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），得回歸方程：Y=19.9215X-101.9104（r=0.9999），線性范圍為0.0558~1.7863 mg·mL-1。

2.5.2 精密度實(shí)驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)下生品（S1）供試品溶液，按“2.2”項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄指紋圖譜。以蘆丁為參照峰，計(jì)算共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。24個(gè)共有峰的相對(duì)保留時(shí)間RSD小于1.0% , 相對(duì)峰面積RSD小于4.0%，表明儀器精密度良好。

聲明：本文所用圖片、文字來(lái)源《中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志》，版權(quán)歸原作者所有。如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)與本網(wǎng)聯(lián)系刪除。

相關(guān)鏈接：余甘子，氯化鈉，色譜柱