三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、不同條件提取丹參酮純度結(jié)果

通過(guò)表1發(fā)現(xiàn)當(dāng)用85%的醇在70℃回流提取丹參粉3h后旋蒸、離心得到粗提物，用80%乙醇洗脫后經(jīng)高效液相色譜儀測(cè)得丹參酮提取率為94.96%，該條件為最佳優(yōu)化條件。

2、大孔樹(shù)脂的篩選

大孔樹(shù)脂有吸附迅速、選擇性好、操作簡(jiǎn)單、綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于提取優(yōu)化天然產(chǎn)物。不同類(lèi)型的樹(shù)脂由于孔徑、極性、比表面積和對(duì)丹參酮的吸附、解吸附能力各不相同，且被吸附材料包含化合物的復(fù)雜性對(duì)樹(shù)脂吸附率也有很大影響。

由表2可見(jiàn)，D-201和AB-8的吸附量、吸附率、解析率比D-101的低且具有顯著性差異(p＜0.05)，D-290和D-301雖然吸附率很高但解析率過(guò)低，尤其是D-290。綜合以上因素，選擇D101樹(shù)脂進(jìn)行接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)。

3、吸附劑和上樣濃度對(duì)吸附率的影響

由圖1得當(dāng)提取物溶于不同濃度乙醇時(shí)，其吸附率有明顯差異，在吸附劑為55%乙醇時(shí)樹(shù)脂對(duì)丹參酮的吸附效果最好，因此選擇55%乙醇為最佳吸附劑。將提取物溶于55%乙醇上樣，上樣濃度分別為2mg/mL～10mg/mL，由圖2得當(dāng)上樣濃度在2、4、6mg/mL時(shí)的丹參酮泄露過(guò)多，樹(shù)脂過(guò)早達(dá)到穿透點(diǎn)，易造成樣品浪費(fèi)；而濃度為10mg/mL時(shí)泄漏量較低，效果最好。

4、解吸液濃度對(duì)解吸率的影響

由圖3知隨著解吸液濃度提高，解析率先增大后減小，在解吸液濃度80%時(shí)達(dá)到最高，所以因此在洗脫中選擇80%乙醇進(jìn)行洗脫。

由圖4得，解吸速度為1.0、2.0、3.0BV/h時(shí)，解吸率高于75%，而解吸速度為4.0、5.0BV/h時(shí)解吸率顯著降低。這是因?yàn)橛靡欢康囊掖冀馕?，如果解吸速度過(guò)大，會(huì)因?yàn)橛行С煞直粯?shù)脂吸附，卻沒(méi)有充足時(shí)間完全溶于乙醇而造成解吸率較低；而當(dāng)解吸速度過(guò)低時(shí)，雖然解吸率高，但解吸用時(shí)較長(zhǎng)且效率太低，還會(huì)因?yàn)榱鞒龅慕馕翰粔蚣卸霈F(xiàn)拖尾現(xiàn)象。所以，最佳解吸速度為3.0BV/h。

5、各組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間結(jié)果

通過(guò)表4發(fā)現(xiàn)，各組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。陽(yáng)性對(duì)照組與空白組比較，顯著增長(zhǎng)負(fù)重游泳時(shí)間(p＜0.05)，丹參酮低劑量組與空白組相比沒(méi)有顯著性差異，而中劑量組和高劑量組與空白組、陽(yáng)性對(duì)照組相比有顯著性差異，說(shuō)明丹參酮在一定程度上促進(jìn)了小鼠負(fù)重游泳，提高了小鼠的耐力。

6、各組小鼠抗疲勞指標(biāo)測(cè)定結(jié)果

從表5可以看出，小鼠的血清尿素氮含量結(jié)果中，丹參酮中、高劑量組相比于空白組有明顯降低且具有顯著性差異(p＜0.05)；肝糖原含量的結(jié)果中，丹參酮高劑量組較空白組具有顯著的差異(p＜0.05)，而陽(yáng)性對(duì)照組和丹參酮低、中劑量組較空白組沒(méi)有顯著性增長(zhǎng)(p＞0.05)。小鼠血清乳酸的含量中，丹參酮中劑量組相比于空白組有顯著性的降低(p＜0.05)，丹參酮高劑量具有極顯著效果(p＜0.01)。以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)說(shuō)明丹參酮具有一定的抗疲勞功效。

四、結(jié)論
疲勞是機(jī)體的一個(gè)復(fù)雜生理生化變化的過(guò)程，若長(zhǎng)期疲勞得不到緩解，還會(huì)發(fā)展為慢性疲勞，危害人身心健康。研究表明，丹參提取物具有明顯的抗疲勞、抗氧化作用，但是目前丹參酮的提取率不高。故本實(shí)驗(yàn)對(duì)丹參酮的抗疲勞功效進(jìn)行研究，并對(duì)提取分離過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)5種大孔樹(shù)脂進(jìn)行篩選，選擇D101大孔樹(shù)脂作為最優(yōu)樹(shù)脂來(lái)優(yōu)化丹參酮的提取工藝，并對(duì)優(yōu)化過(guò)程中吸附劑、上樣濃度、解吸液濃度、上樣流速進(jìn)行篩選。研究結(jié)果表明，用85%的醇在70℃回流提取3h后旋蒸、離心得到粗提物用55%乙醇溶解上樣，上樣濃度為10mg/mL，用80%乙醇以3BV/h速洗脫12BV得到丹參酮，經(jīng)高效液相測(cè)得純度為94.96%。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參提取物丹參酮可以明顯延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。當(dāng)在耐力運(yùn)動(dòng)時(shí)會(huì)消耗大量能量，肝糖原首先分解入血，避免低血糖引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)疲勞感。本實(shí)驗(yàn)顯示注射丹參酮可以增加小鼠肝糖原含量，延緩產(chǎn)生的疲勞。當(dāng)劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)，機(jī)體蛋白質(zhì)和氨基酸的分解代謝明顯增強(qiáng)，同時(shí)生成尿素，而血液內(nèi)的尿素氮含量與疲勞程度、負(fù)荷量大小、機(jī)體功能成正相關(guān)。本實(shí)驗(yàn)表明，注射丹參酮可顯著降低小鼠血清尿素氮和血乳酸的含量，減少蛋白質(zhì)分解供能，提高機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力。

綜合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得知，丹參酮的抗疲勞功效顯著，同時(shí)對(duì)其提取分離工藝進(jìn)行了優(yōu)化發(fā)現(xiàn)純度有明顯提升。但是對(duì)于抗疲勞作用還沒(méi)有進(jìn)行深入研究探討，因此在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中要進(jìn)一步研究。

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