地塞米松是一種人工合成的皮質(zhì)類固醇，具有消炎、抗病毒、促進(jìn)泌乳等多種功效，在養(yǎng)殖業(yè)中被大量使用，造成不同程度藥物殘留，人體攝入過(guò)量可能會(huì)引起激素代謝紊亂、肥胖、骨質(zhì)疏松等病癥，并可能產(chǎn)生致畸、致癌等風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)我國(guó)GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》規(guī)定，地塞米松在牛奶中的最大殘留限量為0.3μg/kg。因此，為保障牛奶飲用安全，有必要建立一種安全、有效地分析牛奶中地塞米松殘留的方法。

目前，地塞米松檢測(cè)手段主要包括酶聯(lián)免疫法、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜法等。其中，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法因其具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，成為獸藥殘留檢測(cè)最有效的方法，被廣泛應(yīng)用于牛奶中地塞米松殘留的檢測(cè)。本文基于農(nóng)業(yè)部1031號(hào)公告-2-2008《動(dòng)物源性食品中糖皮質(zhì)激素類藥物多殘留檢測(cè)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，通過(guò)簡(jiǎn)化色譜條件，對(duì)比兩種樣品前處理方法的提取效果，改進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制方式，旨在建立一種安全、高效、穩(wěn)定的檢測(cè)牛奶中地塞米松殘留的方法，為相關(guān)研究提供借鑒。

一、材料與方法

（一）材料與試劑

學(xué)生飲用奶，大同市牧同乳業(yè)有限公司；地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.7%),Bepure公司；甲醇、正己烷、乙酸乙酯（色譜純），北京迪馬歐泰科技發(fā)展中心；丙酮（分析純），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；Silica固相萃取柱（500 mg/3 m L）、有機(jī)濾膜（0.22μm），上海安譜實(shí)驗(yàn)股份科技有限公司。

（二）儀器與設(shè)備

LC-30AD高效液相色譜，LCMS-8050三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（配有電噴霧離子源ESI），日本Shimadzu公司；ST40R高速冷凍離心機(jī)，美國(guó)Thermo公司；vortex genie 2渦旋混合器，美國(guó)SI公司；LE244S電子天平，德國(guó)Sartorius公司。

（三）試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1. 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制。

準(zhǔn)確稱取地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇溶解配制成濃度為100μg/m L的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。稱取5份陰性牛奶樣品2.00 g，分別準(zhǔn)確加入稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)貯備液，按照下文步驟進(jìn)行樣品前處理，以最終定容體積得到濃度為1、2、5、10、50ng/m L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

2. 樣品前處理。

（1）提取。稱取牛奶樣品2.00g于50 m L聚丙烯離心管中，加10 m L乙酸乙酯，渦旋混勻3 min，超聲提取10 min，以8 000 r/min離心5 min，移取上層乙酸乙酯，在40℃水浴下氮?dú)獯蹈桑? m L乙酸乙酯-正己烷（1∶5,V∶V）振蕩溶解殘?jiān)?，待凈化。?）凈化。將溶解液轉(zhuǎn)移到固相萃取柱上（使用前以3 m L正己烷進(jìn)行活化），自然流干，以3 m L正己烷淋洗，抽干。加3m L正己烷-丙酮（6∶4,V∶V）洗脫，收集洗脫液，在40℃水浴下氮?dú)獯蹈?，?0%乙腈水溶液定容至1 m L，過(guò)濾膜后待上機(jī)分析。

3. 色譜條件。

色譜柱為Shim-pack GIST C18(100×2.1 mm,2μm）；柱流量為0.3 m L/min；柱溫40℃；流動(dòng)相A為0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈，等度洗脫，流動(dòng)相比例A∶B為50∶50；進(jìn)樣體積為10μL。

4. 質(zhì)譜條件。

掃描方式為負(fù)離子掃描；接口電壓4.0 k V;霧化氣為氮?dú)猓? L/min；加熱氣流量為10 L/min;DL溫度為250℃；加熱塊溫度為400℃；碰撞氣為氬氣，270 k Pa；檢測(cè)方式為多反應(yīng)檢測(cè)（MRM）模式。質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

二、結(jié)果與討論

（一）色譜條件的優(yōu)化

農(nóng)業(yè)部1031號(hào)公告-2-2008標(biāo)準(zhǔn)[19]中通過(guò)3種流動(dòng)相（水-乙腈-甲酸水）對(duì)多種糖皮質(zhì)激素類藥物進(jìn)行梯度洗脫?？紤]到本試驗(yàn)僅需檢測(cè)地塞米松，因此，簡(jiǎn)化為2種流動(dòng)相0.1%甲酸水-乙腈（50∶50,V∶V）進(jìn)行等度洗脫，結(jié)果如圖1所示，在此條件下，目標(biāo)物在2 min前出峰，峰型良好，有效節(jié)約了分析時(shí)間。

（二）質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化

以5 ng/m L地塞米松進(jìn)行掃描，對(duì)其母離子、子離子、碰撞能量等條件進(jìn)行優(yōu)化，使分子離子和特征碎片離子強(qiáng)度達(dá)到最大，選擇豐度最高的碎片離子作為定性與定量特征離子，優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

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