2 結(jié)果與討論

2.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 洗脫液比例對(duì)洗脫過(guò)程的影響

上樣量3g，洗脫流速2mL/min，研究洗脫液比例(V_二氯甲烷:V_{無(wú)水甲醇})對(duì)中性氧化鋁柱分析分離純化鯊肝醇的作用效果。

由圖1可知，鯊肝醇純度隨著洗脫劑比例的減少呈先上升后下降的趨勢(shì)。在選擇洗脫液時(shí)，一般先選擇極性較小的溶劑，根據(jù)分離效果再依次增大極性。本試驗(yàn)中甲醇的極性要大于二氯甲烷。當(dāng)僅選擇二氯甲烷為洗脫劑時(shí)，其分離效果要弱于二氯甲烷與甲醇(體積比9:1)復(fù)配使用，其原因可能是二氯甲烷的極性弱，無(wú)法很好地分離鯊肝醇。而隨著甲醇比例的增加，鯊肝醇的純度不斷下降，這是由于復(fù)配洗脫劑的極性過(guò)強(qiáng)而將部分雜質(zhì)混入鯊肝醇中。最終選定洗脫劑比例(V_二氯甲烷:V_{無(wú)水甲醇})為9:1進(jìn)行優(yōu)化，此時(shí)第7管鯊肝醇純度最高。

2.1.2 上樣量對(duì)洗脫過(guò)程的影響

洗脫液比例(V_二氯甲烷：V_{無(wú)水甲醇})為9:1，洗脫流速為2mL/min，研究上樣量對(duì)中性氧化鋁柱分離、純化鯊肝醇的作用效果。

由圖2可知，上樣量在1～3g范圍，鯊肝醇純度隨上樣量的增加而增加，然而上樣量繼續(xù)增加,鯊肝醇純度呈下降的趨勢(shì)。這一結(jié)論與龔金炎等的研究結(jié)果基本一致。分析其原因可能是：當(dāng)上樣量過(guò)低時(shí)，氧化鋁層析柱無(wú)法被充分利用而造成浪費(fèi)，同時(shí)洗脫劑消耗量大，使不皂化物中的鯊肝醇與雜質(zhì)無(wú)法有效分離：而當(dāng)上樣量過(guò)大時(shí)，極易造成氧化鋁層析柱負(fù)載過(guò)大，吸附效率降低。采用上樣量3g進(jìn)行后續(xù)優(yōu)化。此外，在色譜柱負(fù)載量0.012g/g氧化鋁、上樣量3g時(shí)，第7管鯊肝醇純度最高。

2.1.3 洗脫流速對(duì)洗脫過(guò)程的影響

洗脫液比例(V_二氯甲烷：V_{無(wú)水甲醇})為9:1，上樣量為3g，研究洗脫流速對(duì)中性氧化鋁柱分離、純化鯊肝醇的作用效果。

由圖3可知，鯊肝醇純度隨洗脫流速的升高呈先增加后減小的趨勢(shì)。分析原因可能是：在較低洗脫流速下，鯊肝醇在氧化鋁層析柱中停留時(shí)間變長(zhǎng)，而中性氧化鋁具有很強(qiáng)的吸附作用，從而導(dǎo)致部分鯊肝醇被吸附在層析柱中而無(wú)法被洗脫；當(dāng)洗脫流速過(guò)高時(shí)，不皂化物快速流過(guò)層析柱而使鯊肝醇與雜質(zhì)無(wú)法有效分離。宋恭帥等認(rèn)為柱層析洗脫流速在1～2mL/min之間為宜。本研究結(jié)果與之一致。最終選定2mL/min為最佳洗脫流速。此外，在洗脫流速為2mL/min時(shí)，第7管鯊肝醇純度最高。

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)

2.2.1 模型擬合

響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表2。

對(duì)表2中數(shù)據(jù)進(jìn)行多元二項(xiàng)式回歸擬合。得到洗脫液比例A、上樣量B、洗脫流速C與鯊肝醇純度之間的二次多項(xiàng)回歸方程為：

鯊肝醇純度=18.08+0.84A+0.47B-0.84C+0.71AB+0.874AC+1.04BC-2.01A²-1.66B²-2.02C²。

由表3可知，二項(xiàng)式回歸方程的F值為35.57，其P值＜0.0001，差異極顯著；對(duì)方程進(jìn)行失擬項(xiàng)檢驗(yàn)。F值為2.46，其P值為0.2020＞0.05。不顯著；從擬合方程的相關(guān)系數(shù)可見，多元二次方程擬合相關(guān)系數(shù)高于0.90，因此擬合的回歸模型可靠，可用來(lái)預(yù)測(cè)響應(yīng)值與反應(yīng)參數(shù)之間的關(guān)系。此外，A、B、G、A2、B2和C2的P值均小于0.05，說(shuō)明它們對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響顯著，且洗脫液比例A是影響鯊肝醇純度的最主要因素。

相關(guān)鏈接：二氯甲烷，氧化鋁柱，甲醇

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