2.2.2 二次回歸模型擬合及模型分析

通過29組關(guān)于多糖提取率的響應(yīng)面實驗得到的二次多元回歸模型為：

Y=+84.74+1.55A-1.05B+1.43C+4.63D-0.87AB0.065AC-1.00AD+1.84BC+5.31BD+0.77CD-4.44A²-6.34B²-1.35C²-7.98D²

對該回歸方程的分析見表3。由表3可知，模型的F=37.59，P＜0.0001，表明該模型達到極顯著水平，且失擬項P=0.1394＞0.05，表明該模型擬合良好，具有統(tǒng)計學(xué)意義，該模型離散系數(shù)CV=1.87%，R_Pred²=0.8630，R_Adj²=0.9482。在合理范圍內(nèi)，AdeqPrecision=24.653，表明可以用來預(yù)測超聲微波協(xié)同萃取IHP的提取率。模型中A、C、D、BD、A₂、B₂、D₂對IHP提取率的影響極顯著（P＜0.01），B、BC和C₂影響顯著（P＜0.05），而交互項AB、AC、AD和CD影響不顯著，表明各因素對提取率的影響并不是簡單的線性關(guān)系。從一次項來看，根據(jù)方差分析中的F值可判斷各個因素對提取率的影響大小為D＞A＞C＞B，即料液比＞超聲時間＞微波功率＞微波時間。

2.2.3 IHP提取最優(yōu)條件的確定與驗證

根據(jù)所建立的二次回歸模型，使用Design-Expert8.06進行參數(shù)優(yōu)化分析，得到超聲波微波協(xié)同提取IHP的最佳工藝條件為：超聲時間51.45min，微波時間50s，微波功率523.89W，料液比1:33.21g:mL，在此條件下多糖的提取率可達85.92%。對軟件得到的最佳工藝參數(shù)進行調(diào)整：超聲時間51min，微波時間50s，微波功率500W，料液比1:33g:mL，在此條件下進行三次平行實驗，測得IHP的提取率平均為85.61%±1.32%，與模型的預(yù)測值較為接近，表明該回歸方程可以很好地反映IHP的提取率。

2.3 提取方法對IHP制備效果的比較分析

優(yōu)化后的超聲微波協(xié)同提取法與熱水浸提法、超聲輔助法對粗毛纖孔菌多糖的提取率對比，結(jié)果如圖6所示。

由圖6可知，三種提取方法中，超聲微波輔助法提取率最高，為85.05%，其次是超聲輔助法68.11%，提取率最低的是熱水浸提法62.36%，超聲波微波輔助提取法相對于超聲波輔助法，提取率增加24.87%，相對于熱水提取法，提取率增加36.38%。超聲輔助法可以明顯提高IHP的提取率，這主要是由于超聲波的機械效應(yīng)和空化效應(yīng)能有效的破碎粗毛纖孔菌的細胞壁，使得多糖快速溶出，從而提高IHP的提取率。超聲微波輔助法提取率明顯高于超聲輔助提取法，可能是由于超聲波和微波協(xié)同作用，對粗毛纖孔菌細胞的破碎作用增加，使多糖的溶出率提高，且超聲微波協(xié)同作用可以使微波的傳熱均勻，彌補超聲波產(chǎn)熱不足的問題，從而提高IHP的提取率。實驗結(jié)果表明，超聲微波輔助提取法可以明顯提高IHP的提取率。

2.4 提取方法對IHP體外膽酸鹽結(jié)合的影響

由圖7可知，三種不同方法提取的IHP對甘氨膽酸鈉均有一定的結(jié)合能力，且隨著質(zhì)量濃度的增加，結(jié)合率也逐漸升高，呈質(zhì)量濃度依賴性。但是三種方法提取的IHP在相同質(zhì)量濃度的條件下對甘氨膽酸鈉的結(jié)合能力存在顯著差異（P＜0.05），可以看出超聲微波輔助提取的IHP的結(jié)合率明顯高于其他兩種方式提取的多糖。當質(zhì)量濃度為20mg/mL時，三種方式提取IHP對甘氨膽酸鈉的結(jié)合率均達到最大值，分別是30.93%、27.32%和23.16%，其中超聲微波輔助法IHP結(jié)合率最高，其次是超聲輔助提取，熱水浸提得到的多糖結(jié)合率最低。說明超聲微波輔助法提取的IHP與甘氨膽酸鈉結(jié)合能力強，推測超聲微波輔助法提取的IHP降血脂效果更好。

由圖8可知，三種不同方式提取的IHP均能結(jié)合牛磺膽酸鈉，牛磺膽酸鈉的結(jié)合率隨IHP的質(zhì)量濃度的增加而增加，呈一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系。從圖中可以看出，超聲微波輔助提取IHP對牛磺膽酸鈉的結(jié)合率高于其他兩種提取方式，三種方式提取多糖質(zhì)量濃度為20mg/mL時，對?；悄懰徕c的結(jié)合率達到最高，分別是超聲微波輔助提取32.13%、超聲波輔助28.05%、熱水浸提24.82%。

三種提取方式制備的粗毛纖孔菌多糖對兩種膽酸鹽的結(jié)合能力顯示，超聲波微波輔助提取的多糖對?；悄懰徕c和甘氨膽酸鈉的結(jié)合率均高于其余兩種方式，其次是超聲波輔助提取，而熱水浸提的粗毛纖孔菌多糖對兩種膽酸鹽的結(jié)合能力最低，這可能是因為，超聲波微波輔助提取法中，由于超聲波和微波的作用使得粗毛纖孔菌多糖的官能團暴露出來，從而提高粗毛纖孔菌多糖對兩種膽酸鹽的結(jié)合量，使得粗毛纖孔菌多糖的降脂效果增加。三種方式提取的IHP對?；悄懰徕c的結(jié)合能力均強于甘氨膽酸鈉，這可能是因為?；悄懰徕c側(cè)鏈末端的磺酸基的極性更大比甘氨膽酸鈉側(cè)鏈末端的羧基解離性更強，更加易于與IHP結(jié)合。

3 結(jié)論

在單因素實驗基礎(chǔ)上，通過響應(yīng)面對粗毛纖孔菌子實體多糖超聲微波協(xié)同提取工藝進行優(yōu)化，對軟件得到的最佳工藝參數(shù)進行調(diào)整：超聲時間51min，微波時間50s，微波功率500W，料液比1:33g:mL，在此條件下IHP的提取率為85.61%，與模型的預(yù)測值較為接近。與熱水浸提法和超聲輔助法相比，提取率分別增加了24.87%、36.83%。體外膽酸鹽結(jié)合實驗表明超聲微波輔助提取的粗毛纖孔菌多糖對甘氨膽酸鈉和?；悄懰徕c的結(jié)合率優(yōu)于熱水浸提法和超聲波輔助法，呈劑量依賴性，對?；悄懰徕c的結(jié)合率高于甘氨膽酸鈉。本研究結(jié)果表明超聲微波協(xié)同提取可增加IHP的提取率促進IHP的膽酸鹽結(jié)合能力，為粗毛纖孔菌多糖開發(fā)成為一種降血脂功能食品提供理論依據(jù)，但其體內(nèi)降脂的具體機制還需進一步研究探討。

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