2.2 單因素優(yōu)化BPO檢測體系

2.2.1 檢測波長對檢測體系的影響

2.2.1.1 最佳波長的確定

選擇不同濃度的BPO標準溶液，分別在波長480、490、500、510、520、530和540nm下采用1cm的比色皿測定其吸光度，如圖2。

根據(jù)吸光度的大小確定最適檢測波長，其中吸光度越大說明檢測體系在相應(yīng)波長下響應(yīng)性能最好，由圖2所示，該體系在510nm處BPO的吸光度最高，說明在檢測波長為510nm條件下，檢測體系的靈敏度最高，響應(yīng)性能最好，故篩選最適檢測波長為510nm。

2.2.1.2 方差分析

將在各個波長下所測的吸光度的數(shù)值進行單因素方差分析，結(jié)果見表1。如表1所示，P=0.0001，P＜0.01，所以檢測波長對BPO檢測體系具有非常顯著的影響。

2.2.2 緩沖液pH對檢測體系的影響

2.2.2.1 最佳pH的確定

由于BPO只能在酸性條件氧化Fe²⁺為Fe³⁺，發(fā)生褪色反應(yīng)，因此設(shè)定pH范圍在3～6之間。在優(yōu)化后得到的最適波長條件下，分別設(shè)定緩沖液pH為3.5、3.8、4.1、4.4、5.1、5.4和6.0時采用1cm的比色皿測定BPO標準溶液的吸光度，根據(jù)吸光度的大小確定最適緩沖液pH，其中吸光度最大處對應(yīng)緩沖液的最佳pH條件，如圖3。

由圖3所示，初期吸光度隨著緩沖液pH的升高而逐漸變大，在體系緩沖液的pH為4.4時，吸光度數(shù)值達到最高，為0.616。當緩沖液的pH繼續(xù)升高時，體系的吸光度值又開始出現(xiàn)下降趨勢。鑒于本反應(yīng)為褪色反應(yīng)，因此選擇吸光度較低的數(shù)值為最優(yōu)水平，故篩選最適緩沖液pH為6。

2.2.2.2 方差分析

將在不同緩沖液pH條件下所測的吸光度的數(shù)值進行單因素方差分析，結(jié)果見2，P=0.0001，P＜0.01，由此得出，緩沖液pH對BPO檢測體系的影響非常顯著。

2.2.3 反應(yīng)溫度對檢測體系的影響

2.2.3.1 最佳反應(yīng)溫度的確定

設(shè)定反應(yīng)溫度為室溫（約23℃）、30、40、50和60℃，采用1cm的比色皿測定BPO標準溶液的吸光度，根據(jù)吸光度的大小確定最適反應(yīng)溫度，如圖4。

由圖4可知，在反應(yīng)初期其吸光度出現(xiàn)最大值，隨著反應(yīng)溫度的升高，吸光度開始下降，當溫度為50℃時，吸光度降至最低點。但伴隨溫度的提升，吸光度又開始上升，在溫度超過60℃時，吸光度又出現(xiàn)下降趨勢，這種反復(fù)的現(xiàn)象說明，在當反應(yīng)溫度超過為50℃時，檢測體系對溫度的響應(yīng)已經(jīng)出現(xiàn)了不穩(wěn)定的情況，鑒于此篩選最適反應(yīng)溫度為50℃。

2.2.3.2 方差分析

將在各個波長下所測的吸光度的數(shù)值進行單因素方差分析，結(jié)果如表3所示。結(jié)果表明，P=0.0001，P＜0.01，所以反應(yīng)溫度對BPO檢測體系的影響非常顯著。

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