過氧化苯甲酰（BPO），白色粉末，具有氧化性，是一種典型的有機(jī)過氧化物，應(yīng)用于化工、醫(yī)療和食品等領(lǐng)域。早期在食品加工中，常被用作面粉和乳粉的改良劑，具有改善粉體的外觀品質(zhì)，實(shí)現(xiàn)后熟和增白等效果。但在改善粉體品質(zhì)的過程中，過氧化苯甲酰會(huì)氧化掉面粉和乳粉中的營養(yǎng)物質(zhì)成分，并在高溫或高壓的烹飪過程中產(chǎn)生有毒的物質(zhì)，對人體健康十分不利。

近年來，食品安全問題屢屢發(fā)生，其中嬰兒乳粉的安全問題尤為突出，以往乳粉生產(chǎn)企業(yè)廣泛使用BPO作為增白劑改良乳制品，長期食用此類乳制品會(huì)導(dǎo)致嬰兒肝臟受損繼而引發(fā)慢性中毒。鑒于此，我國已明確禁止在乳制品中添加BPO，但仍是屢禁不止。常規(guī)的BPO檢測方法有碘量法、色譜法、電化學(xué)分析法和光譜法等。其中，碘量法雖然操作方便，但只適用于常量分析；高效液相色譜雖具有操作簡便、節(jié)省溶劑等優(yōu)勢，但國標(biāo)法檢測范圍較窄；氣相色譜法操作復(fù)雜，需反復(fù)提取濃縮，且與電化學(xué)法均需使用有毒試劑，綠色性較差。因此，需要構(gòu)建一種快速簡便、靈敏度高且重現(xiàn)性好的測定方法來檢測嬰兒乳粉中BPO的含量。

本研究對兩種市售品牌嬰兒奶粉中過氧化苯甲酰的檢測建立了一套系統(tǒng)的檢測方法。利用紫外分光光度法測定嬰兒奶粉制品中的BPO含量，對檢測方法進(jìn)行優(yōu)化，建立檢測工作曲線，對該方法最低檢出限、加標(biāo)回收率和精密度進(jìn)行了研究，相關(guān)研究結(jié)果將為乳制品中BPO的檢測提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料

嬰兒乳粉（哈爾濱市家樂福超市）；過氧化苯甲酰、無水乙醇、硫酸亞鐵銨、鄰菲羅啉、結(jié)晶乙酸鈉和冰乙酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

1.1. 2設(shè)備

分光光度計(jì)和數(shù)顯酸度計(jì)（杭州奧立龍儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）；離心機(jī)（北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 過氧化苯甲酰（BPO）標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

準(zhǔn)確吸取1.00mL濃度分別為0.001、0.0025、0.005、0.0075、0.01mg/mL的過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液于5個(gè)10mL離心管中，分別加入濃度為0.001mol/L的硫酸亞鐵銨溶液1.0mL、乙酸-乙酸鈉緩沖液3mL（優(yōu)化后的pH），混勻后置水浴（優(yōu)化后的溫度）中反應(yīng)一定時(shí)間（優(yōu)化后的時(shí)間），取出后冷卻至室溫，加入濃度為0.003mol/L的鄰菲羅啉溶液1.0mL，用蒸餾水定容至8mL，混勻，靜置10min，在最適的波長測定其吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.2 檢測體系的優(yōu)化

首先，在水相中優(yōu)化過氧化苯甲酰（BPO）的檢測體系，即不添加?jì)雰喝榉?。方法如下?/p>

準(zhǔn)確吸取1.00mL濃度為0.1mg/mL的過氧化苯甲酰（BPO）標(biāo)準(zhǔn)溶液于10mL離心管中，加入濃度為0.001mol/L的硫酸亞鐵銨溶液1.0mL、乙酸-乙酸鈉緩沖液（pH為3.5、3.8、4.1、4.4、4.8、5.1、5.4、6.0）3mL，混勻后置不同溫度（23、30、40、50、60和70℃）水浴反應(yīng)不同時(shí)間（1、2、4、6、8和10min），取出后冷卻至室溫，加入濃度為0.003mol/L的鄰菲羅啉溶液1.0mL，用蒸餾水定容至8mL，混勻，靜置10min，分別在480、490、500、510、520、530和540nm波長下采用1cm的比色皿測定其吸光度，確定最優(yōu)反應(yīng)條件。

1.2.3 市售嬰兒奶粉中BPO檢測工作曲線方程、線性范圍和檢出限的測定

精確稱取市售奶粉樣品2g，置于25mL離心管中，分別加入無水乙醇10.0mL并立即混勻，移取濃度為0.001、0.005、0.010、0.025、0.050、0.100和0.250mg/mL的BPO標(biāo)準(zhǔn)液10mL于離心管中。漩渦振蕩5min，取出后靜置10min，4000r/min的轉(zhuǎn)速下離心30min，取上清液1mL于10mL離心管中，依次加入0.001mol/L的硫酸亞鐵銨溶液1.0mL、乙酸-乙酸鈉緩沖液3mL（優(yōu)化后的pH），混勻后置水?。▋?yōu)化后的溫度）中反應(yīng)一定時(shí)間（優(yōu)化后的時(shí)間），取出冷卻至室溫后，再加入0.003mol/L的鄰菲羅啉溶液1.0mL，混勻后從中取出1.0mL混合液于10mL離心管中，添加5.0mL蒸餾水，混勻，靜置10min，稀釋12倍后，在最適的波長下采用1cm的比色皿測定其吸光度。參考BPO標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算體系中BPO的含量，以BPO添加濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，構(gòu)建檢測體系的工作曲線方程，并計(jì)算線性范圍和最低檢出限。

1.2.4 嬰兒奶粉加標(biāo)回收率和精密度測定

精確稱取市售奶粉樣品1g，置于25mL離心管中，分別加入無水乙醇10.0mL并立即混勻。在混勻狀態(tài)下向每個(gè)重量相等的3個(gè)管中加入濃度為0.1、0.01和0.05mg/mL的過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液各10mL，每個(gè)濃度梯度分別做6組重復(fù)試驗(yàn)，漩渦振蕩5min，取出后靜置10min，6000r/min的轉(zhuǎn)速下離心10min，取上清液1mL于10mL離心管中，依次加入0.001mol/L的硫酸亞鐵銨溶液1.0mL、乙酸-乙酸鈉緩沖液3mL（優(yōu)化后的pH），混勻后置水?。▋?yōu)化后的溫度）中反應(yīng)一定時(shí)間（優(yōu)化后的時(shí)間），取出冷卻至室溫后，再加入0.003mol/L的鄰菲羅啉溶液1.0mL，混勻后從中取出1.0mL混合液于10mL離心管中，添加5.0mL蒸餾水，混勻，靜置10min，稀釋12倍后，在最適的波長下采用1cm的比色皿測定其吸光度。參考工作曲線，計(jì)算加標(biāo)回收率與精密度。

2 結(jié)果與討論

2.1 BPO標(biāo)準(zhǔn)曲線的構(gòu)建

分別準(zhǔn)確移取質(zhì)量濃度為0.001、0.0025、0.005、0.0075和0.01mg/mL的過氧化苯甲酰標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)過上述步驟處理后以無水乙醇為空白，在波長為510nm時(shí)得到一系列對應(yīng)的吸光度值。并且以吸光度為縱坐標(biāo)，添加BPO的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖1。

由圖1可知，過氧化苯甲酰在濃度為0.1×10^-3～0.1×10^-2mg/mL范圍內(nèi)，與吸光度呈良好的線性擬合關(guān)系，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=-3.3302x+0.5583，R²=0.9951。

相關(guān)鏈接：過氧化苯甲酰，硫酸亞鐵銨，鄰菲羅啉，乙酸-乙酸鈉

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