2.4 止血粉酶解結(jié)果分析

止血粉在37℃水中溶解度小，呈混懸液。100℃加熱5min后，分成上下兩層，上層溶液澄清，下層少量止血粉呈現(xiàn)溶脹狀態(tài)。此外，若酶解產(chǎn)物的保留時(shí)間為7.7min，說(shuō)明產(chǎn)物為葡萄糖；若酶解產(chǎn)物的保留時(shí)間為16.1min，說(shuō)明產(chǎn)物為麥芽糖；保留時(shí)間為14.5min為α-淀粉酶中乳糖；其他保留時(shí)間的酶解產(chǎn)物為不同聚合度的寡糖。降解產(chǎn)物中葡萄糖、麥芽糖和乳糖的離子色譜峰面積見(jiàn)表2，降解產(chǎn)物中葡萄糖含量見(jiàn)表3，降解產(chǎn)物中麥芽糖的含量，如表4所示；止血粉α-淀粉酶降解不同時(shí)間后產(chǎn)物中未降解淀粉含量，如表5所示。

因此，止血粉在37℃α-淀粉酶作用下，淀粉含量隨著降解時(shí)間延長(zhǎng)逐步減少，從即時(shí)的95.6%至48h的8.0%，1h內(nèi)降解速率最大，約降解了67.3%。降解產(chǎn)物中除有葡萄糖單糖、麥芽糖雙糖外，還有寡糖；離子色譜圖中乳糖為α淀粉酶中物質(zhì)，在降解的48h乳糖含量保持不變。100×10^-6止血粉在37℃α-淀粉酶作用下，葡萄糖的含量從即時(shí)的0至48h的4.004×10^-6，麥芽糖的含量從即時(shí)的0ppm至48h的44.692×10^-6，1h內(nèi)麥芽糖生成速率最大，增加了36.509×10^-6。

3 結(jié)論

本研究是按照《可吸收止血產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則》要求，在體外研究微孔多聚糖止血粉的成分以及生物降解，分別利用酸降解和生物降解法對(duì)微孔多聚糖止血粉進(jìn)行體外降解研究。通過(guò)離子色譜法體外測(cè)定三氟乙酸降解微孔多聚糖止血粉生成的單糖，從而確定了止血粉的成分。隨后采用離子色譜和分光光度法測(cè)定該止血粉在37℃、pH=6.9和Ca2+存在條件下，經(jīng)過(guò)α-淀粉酶作用后所產(chǎn)生的葡萄糖，麥芽糖和淀粉含量，進(jìn)一步確定止血粉的生物降解特性。在酸降解止血粉過(guò)程中，由于淀粉是葡萄糖分子聚合而成的，因此淀粉又被分為直鏈淀粉和支鏈淀粉兩大類(lèi)型。直鏈淀粉沒(méi)有分支的螺旋結(jié)構(gòu)，支鏈淀粉具有24～30個(gè)葡萄糖殘基以α-1，4-糖苷鍵首尾相連而成，在支鏈處為α-1，6-糖苷鍵。所以經(jīng)過(guò)酸降解后，能夠形成單糖結(jié)構(gòu)。本次所采用三氟乙酸降解止血粉的結(jié)果也表明得到的單糖皆為葡萄糖，且葡萄糖的含量為（54.3±1.5）×10-6，且淀粉中單糖為葡萄糖的含量為97.8%±2.6%。

在進(jìn)行體外酶降解止血粉時(shí)，主要選用了血清淀粉酶，也被稱(chēng)之為淀粉內(nèi)切酶，這是一種α-淀粉酶，在生物體內(nèi)主要是由胰腺和唾液腺分泌。相關(guān)研究表明，α-淀粉酶從人唾液和豬胰腺中得到的α-淀粉酶的最適pH為6.0～7.0。此外，α-淀粉酶以Ca2+為必需因子并作為穩(wěn)定因子，既可以作用于直鏈淀粉，又能夠作用于支鏈淀粉，可以無(wú)差別地切斷α-1,4-鏈。其特征主要是能夠引起淀粉溶液黏度的急劇下降和碘反應(yīng)的消失，最終分解直鏈淀粉時(shí)產(chǎn)物以麥芽糖為主，此外，還有麥芽三糖及少量葡萄糖；分解支鏈淀粉時(shí)，產(chǎn)物除麥芽糖、葡萄糖外，還生成分支部分具有α-1,6-鍵的α-極限糊精。止血粉在經(jīng)過(guò)48h的體外α-淀粉酶的作用之后，所含淀粉含量逐漸降低，1h之內(nèi)淀粉降解速率最大為67.3%，生物降解產(chǎn)物中除了含有單糖葡萄糖以外，還含有雙糖麥芽糖以及少許寡糖分子。并且麥芽糖含量在1h之內(nèi)的增加速率最大為81.69%。

對(duì)于此類(lèi)微孔多聚糖止血材料的生物降解性研究也較多，Rong等對(duì)一種新型的止血栓塞復(fù)合生物材料可降解止血?jiǎng)┠肛?fù)載的海藻酸鈣微球（TACMs）進(jìn)行研究，結(jié)果表明其可以在體內(nèi)生物降解并且沒(méi)有細(xì)胞毒性和全身毒性。Shi等對(duì)復(fù)合微孔多聚糖止血粉的體外研究也表明該類(lèi)型止血材料具有良好的可降解性以及安全性。Tschan等研究證實(shí)微孔多聚糖止血材料在神經(jīng)外科手術(shù)中也是十分安全有效的。并且Singh等的研究表明微孔多聚糖的止血效果比普通明膠基質(zhì)的止血效果好。因此，認(rèn)為這些生物來(lái)源、無(wú)毒、親水性高、生物相容性和生物降解性良好的微孔多聚糖止血材料可以應(yīng)用于臨床及術(shù)中快速止血。而本研究所用到的微孔多聚糖止血粉在體外生物降解后，主要成分是葡萄糖及麥芽糖等，這些成分均是人體所需的能量物質(zhì)，不會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性，體外代謝結(jié)果表明使用微孔多聚糖止血粉1h之內(nèi)即可被機(jī)體所代謝，這也為今后微孔多聚糖止血粉在臨床的使用提供了代謝依據(jù)。

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