1.2.3反應(yīng)摩爾比的確定

取0.1 mL二茂鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和1 mL不同濃度（3.15～44.15 mmol/L）的過氧化氫異丙苯溶液于不同的試管中，加入用異丙醇定容至5 mL，加入0.1 mL甲酸后用異丙醇定容至5 mL。在60℃的恒溫水浴條件下加熱40 min，結(jié)束后立即用流動(dòng)水冷卻至室溫，使用異丙醇校準(zhǔn)基線在310 nm處檢測(cè)吸光度值，通過二茂鐵與過氧化氫異丙苯在不同摩爾比時(shí)的吸光度確定二者反應(yīng)的飽和摩爾比。

1.2.4酸催化劑的選擇

試管中加入1 mL二茂鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液后，加入1 mL濃度為15.77 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液，然后分別加入0.1 mL有機(jī)酸（甲酸，乙酸）和無機(jī)酸（硫酸），異丙醇定容至5 mL。60℃的恒溫水浴鍋中反應(yīng)40 min，反應(yīng)完成后在200～600 nm下進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。

1.2.5溫度和時(shí)間的影響

選擇30，40，50，60，70℃5組不同的溫度。每個(gè)樣品中分別加入1 mL二茂鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和1 mL濃度為15.77 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液，加入0.1 mL甲酸后用異丙醇定容至5 mL，在不同的反應(yīng)溫度下加熱40 min，反應(yīng)后冷卻至室溫在310 nm處進(jìn)行檢測(cè)。設(shè)置10，20，30，40，50 min反應(yīng)時(shí)間，同樣的反應(yīng)條件下在310 nm處檢測(cè)吸光度變化。

1.2.6過氧化氫異丙苯標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取0.1，0.2，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，1.0 mL濃度為15.77 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液于試管中，加入1 mL二茂鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.1 mL甲酸，異丙醇定容至5 mL，在最佳檢測(cè)條件下以過氧化氫異丙苯的濃度(x)為橫坐標(biāo)，吸光度值(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。按式（2）計(jì)算油脂過氧化值。

式中：

PV——過氧化值，mmol/kg；

Y——樣品的吸光度；

B——空白的吸光度；

A——標(biāo)準(zhǔn)曲線的系數(shù)；

M——取樣量，g；

V——定容體積，mL。

1.2.7檢出限和定量限

參照文獻(xiàn)的方法確定二茂鐵法的檢出限。在玻璃管種分別加入0.0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0 mL的1.58 mmol/L的過氧化氫異丙苯溶液，再加入1 mL二茂鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL（相當(dāng)于樣品中過氧化氫異丙苯濃度為0.00，0.03，0.06，0.10，0.13，0.16，0.19，0.22，0.252，0.28，0.32 mmol/L）。在恒溫水浴鍋中60℃加熱40 min，加熱結(jié)束后立即用流動(dòng)水冷卻至室溫，在310 nm處檢測(cè)其吸光度。得到檢出限的估計(jì)值后按照加標(biāo)濃度為估計(jì)檢出限的1～5倍范圍確定過氧化氫異丙苯添加量，在干凈的試管中加入合適的過氧化氫異丙苯溶液（15.77 mmol/L），再加入1 mL二茂鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL，在60℃下加熱40 min，加熱結(jié)束后立即用流動(dòng)水冷卻至室溫，在310 nm處檢測(cè)吸光度值，共檢測(cè)7組平行。根據(jù)式（3）求得方法檢出限，以方法檢出限的3.3倍為定量限。

式中：

LD——方法檢出限，mmol/L；

s——加標(biāo)樣品測(cè)試結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差；

t——自由度為n-1時(shí)的Student's值，可查值表得到，當(dāng)n=7時(shí)，在99%置信區(qū)間（α=0.01）下，t=3.14；

n——加標(biāo)樣品數(shù)量，一般取7。

1.2.8回收率

在試管中分別加入1 mL空白油樣、低加標(biāo)油樣（3.15 mmol/L過氧化氫異丙苯）、中加標(biāo)油樣（7.89 mmol/L過氧化氫異丙苯）、高加標(biāo)油樣（12.62 mmol/L過氧化氫異丙苯），再加入1 mL二茂鐵標(biāo)準(zhǔn)溶液和0.1 mL的甲酸，用異丙醇定容至5 mL，在60℃條件下加熱40 min，然后在310 nm下檢測(cè)樣品的吸光度值。

1.2.9滴定法測(cè)定過氧化值

按GB 5009.227—2016執(zhí)行。

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