北方偉業(yè)計(jì)量集團(tuán)有限公司
國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理委員會辦公室于6月23日在北京召開國家二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)評審會，山東省計(jì)量院15種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)全部通過專家評審。
在這次評審中，山東省計(jì)量院申報(bào)了鋁、硒等11種金屬溶液標(biāo)準(zhǔn)物和亞硝酸根、碘離子等4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。在會上，來自中國計(jì)量科學(xué)院、國家地質(zhì)試驗(yàn)中心等單位的12名審查員聽取了項(xiàng)目開發(fā)人員的匯報(bào)，進(jìn)行了提問、答辯，最終確定山東省質(zhì)量技術(shù)路線符合要求，準(zhǔn)許通過。
迄今為止，山東省計(jì)量院開發(fā)了36種金屬和水質(zhì)陰離子標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，滿足了生態(tài)環(huán)境和食品安全領(lǐng)域相關(guān)指標(biāo)的檢測需求。今后山東省計(jì)量院將進(jìn)一步加強(qiáng)基體及配制溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研發(fā)，注重產(chǎn)業(yè)升級和市場監(jiān)管，為山東省新舊動能轉(zhuǎn)換提供服務(wù)和支持。
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為滿足腸道集聚性大腸埃希氏菌準(zhǔn)確檢測的實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制和能力驗(yàn)證需求，研制具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)且具有全基因組測序信息的均勻穩(wěn)定的腸道集聚性大腸埃希氏菌菌體及gDNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。本研究所制備的腸道集聚性大腸埃希氏菌菌體及gDNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)所用菌株來源于我國國內(nèi)分離菌株，且具有明確的全基因組序列信息，均勻性和穩(wěn)定性均符合要求，適用性良好，能夠滿足食品檢測實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制和能力驗(yàn)證的需求。
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采用天根細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取細(xì)菌基因組，具體方法和步驟參照試劑盒說明書。所提取的菌株DNA利用核酸蛋白分析儀和Qubit熒光定量測定儀檢測基因組DNA的純度和濃度，并送北京諾禾致源科技股份有限公司進(jìn)行全基因組測序。經(jīng)電泳檢測合格的DNA樣品用超聲波破碎儀隨機(jī)打斷成長度約為350bp的片段，經(jīng)末端修復(fù)、加A尾、加測序接頭、純化、PCR擴(kuò)增等步驟完成文庫制備。
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利用NanoDrop2000對提取的CMCC44841基因組DNA進(jìn)行了純度測定，A260/280和A260/230分別為1.70和2.37。利用qubit熒光計(jì)對提取的EAECDNA測定了濃度為65ng/μL，提取的DNA能夠滿足后續(xù)全基因組測序和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備的實(shí)驗(yàn)要求。本研究利用二代高通量全基因組測序技術(shù)對CMCC44841進(jìn)行了序列測定。獲得的基因組序列信息結(jié)果通過生物信息學(xué)分析。
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將所制備的EAEC菌體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分別存放于25℃和37℃條件下，于1、3、5、7天各抽取3個(gè)樣品，通過螺旋涂布進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)結(jié)果如表5所示，EAEC菌體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)在25°C條件下保存7天穩(wěn)定性良好，在37℃環(huán)境下5天內(nèi)穩(wěn)定情況良好，第7天活菌數(shù)量下降出現(xiàn)不穩(wěn)定現(xiàn)象，但菌含量仍能維持在103CFU/樣品水平條件，即滿足定性樣品的要求。
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EAEC是造成人體中重度腹瀉的重要病原菌之一，開展食品中EAEC檢測工作對維護(hù)人類健康意義重大。本研究研制的具有自主知識產(chǎn)權(quán)和全基因組數(shù)據(jù)的EAEC菌體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和gDNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均勻性和穩(wěn)定性良好，為EAEC的檢驗(yàn)工作提供了有效參考，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，有利于保證食品質(zhì)量與安全。該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可用于實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制及實(shí)驗(yàn)室間比對，保證我國食品安全質(zhì)量檢測數(shù)據(jù)的可靠、可與國際互認(rèn)。
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