2.5 指紋圖譜建立及相似度評價

將16批黃蛭益腎膠囊按照“2.3.1”項(xiàng)方法制備供試品溶液，根據(jù)“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，得到16批樣品色譜圖。將色譜圖導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)（2012版）”軟件，以S1為參照圖譜，時間寬度0.1 min，進(jìn)行mark峰匹配，以中位數(shù)法生成黃蛭益腎膠囊的對照指紋圖譜，共匹配了24個共有峰。其中16號峰毛蕊異黃酮保留時間適中，峰形較好，故選擇為參照峰（S）。16批樣品的相似度在0.925～0.995。結(jié)果見表1和圖1。

2.6 指紋圖譜中共有峰的化合物結(jié)構(gòu)鑒定及藥味歸屬

取黃蛭益腎膠囊供試品溶液、混合對照品溶液、對照藥材溶液、各味藥的陰性樣品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件、“2.2”項(xiàng)下質(zhì)譜條件，分別在正、負(fù)離子模式下，進(jìn)行掃描檢測，得到一級準(zhǔn)分子離子峰和二級裂解碎片，通過各對照品的二級質(zhì)譜裂解規(guī)律和相關(guān)文獻(xiàn)報道，對黃蛭益腎膠囊的24個共有峰進(jìn)行化合物結(jié)構(gòu)鑒定，并進(jìn)一步用對照品比對確定了其中8個峰。通過與每味藥的陽性藥材以及缺每味藥的陰性樣品對比，24個峰被分別歸屬到7味藥材中：黃芪、杜仲、車前子、墨旱蓮、益母草、三七及玄參。其中7號峰毛蕊異黃酮葡萄糖苷、12號峰美迪紫檀苷、13號峰黃芪異黃烷苷、16號峰毛蕊異黃酮、17號峰6''-O-乙?；⒈ㄜ?、20號峰芒柄花黃素、21號峰7,2'-二羥基-3',4'-二甲氧基異黃烷共7個黃酮類成分歸屬于君藥黃芪；1號峰京尼平苷酸、2號峰原兒茶酸、4號峰綠原酸、6號峰松脂醇二葡萄糖苷、8號峰松脂醇單葡萄糖苷、15號峰杜仲醇6種成分來源于杜仲；11號峰人參皂苷Rg1、19號峰人參皂苷Rh1、22號峰三七皂苷T5、23號峰人參皂苷Rh4、24號峰人參皂苷Rh4異構(gòu)體5種皂苷類成分來源于三七；4號峰綠原酸和5號峰丁香酸來源于益母草；1號峰京尼平苷酸和3號峰車前素來源于車前子；2號峰原兒茶酸、4號峰綠原酸、18號峰木犀草素來源于墨旱蓮；9號峰安格洛苷C和14號峰肉桂酸推斷來源于玄參。黃蛭益腎膠囊中的24個化合物鑒定結(jié)果見圖2和表2。

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