2 結(jié)果

2.1 流動(dòng)相的選擇

實(shí)驗(yàn)比較了不同水相及有機(jī)相作為流動(dòng)相時(shí)各目標(biāo)物的響應(yīng)。首先，以0.1%甲酸水作為水相，分別比較了甲醇和乙腈作為有機(jī)相時(shí)各目標(biāo)物的響應(yīng)情況。結(jié)果表明，當(dāng)有機(jī)相使用甲醇時(shí)，氯霉素、強(qiáng)力霉素、金霉素的響應(yīng)有所提高，且峰形有所改善，但其余目標(biāo)物質(zhì)響應(yīng)均有所下降，且米諾環(huán)素的峰形變差。其次，以0.1%甲酸水作為水相，進(jìn)一步比較了有機(jī)相酸度的影響，有機(jī)相分別為乙腈和0.1%甲酸乙腈溶液。結(jié)果表明，當(dāng)使用0.1%甲酸乙腈溶液時(shí)，磺胺嘧啶、克林霉素、米諾環(huán)素響應(yīng)略有提高，諾氟沙星和強(qiáng)力霉素的響應(yīng)有所降低，其余目標(biāo)物質(zhì)基本無影響。

最后，以乙腈作為有機(jī)相，比較了純水、0.05%甲酸水、0.1%甲酸水作為水相時(shí)各目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)情況。結(jié)果表明，隨著酸度的增加，氯霉素、紅霉素、磺胺嘧啶、頭孢拉定的響應(yīng)呈下降趨勢(shì)；氧氟沙星、諾氟沙星、金霉素、土霉素、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素的峰形變好，響應(yīng)變強(qiáng)；克林霉素的峰形變好，強(qiáng)度基本不變；米諾環(huán)素和強(qiáng)力霉素在使用純水或0.05%甲酸水作為水相時(shí)不出峰。綜上所述，由于本方法所檢測(cè)的13種目標(biāo)物質(zhì)中，除氯霉素為負(fù)離子模式外，其余12種目標(biāo)物質(zhì)均為正離子模式，而通常情況下酸能增強(qiáng)正離子模式下目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)，抑制負(fù)離子模式下目標(biāo)物質(zhì)的響應(yīng)，通過以上實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，酸的增加抑制了氯霉素的響應(yīng)但能滿足實(shí)驗(yàn)需求，而如果水相中酸的含量低于0.1%，強(qiáng)力霉素和米諾環(huán)素不出峰，綜合考慮下，本方法選取了0.1%甲酸水-乙腈作為流動(dòng)相，各目標(biāo)物的整體響應(yīng)和分離良好。抗生素及其同位素內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)色譜圖見圖1和圖2。

1：四環(huán)素-D6；2：土霉素-13C22-15N2；3：米諾環(huán)素-D6；4：強(qiáng)力霉素-D3；5：磺胺嘧啶-D6； 6：頭孢氨芐-D5；7：左氧氟沙星-D8；8：紅霉素-13C-D3；9：噻菌靈-D4；10：甲硝唑-D4；11：氯霉素-D5

2.2 樣品前處理?xiàng)l件的選擇

研究分別比較了3 mL甲醇、甲醇+水(1∶1，V/V)、甲醇+0.1 mol/L鹽酸(1∶1，V/V)提取效率，發(fā)現(xiàn)甲醇+0.1 mol/L鹽酸(1∶1，V/V)對(duì)于氯霉素的提取效率較差，這主要是由于氯霉素采用負(fù)離子模式采集，而酸抑制了負(fù)離子的響應(yīng)，最終導(dǎo)致氯霉素回收率較低；當(dāng)采用甲醇+水(1∶1，V/V)提取膏霜?jiǎng)┫井a(chǎn)品中的抗生素時(shí)，提取液呈乳濁狀，經(jīng)微孔濾膜過濾后仍無法澄清；另外，由于液體劑型類消毒產(chǎn)品中的水能與甲醇互溶，這會(huì)導(dǎo)致水溶性的雜質(zhì)隨目標(biāo)物質(zhì)一起被提取出來，因此加入適量的氯化鈉，有助于水相與甲醇相分層，從而使目標(biāo)物質(zhì)保留在甲醇相中，一些水溶性的目標(biāo)物則留在水相中，從而達(dá)到去除部分水溶性雜質(zhì)的目的。然而對(duì)于凝膠類消毒產(chǎn)品，以上提取模式均不適用，這主要基于凝膠的特殊性質(zhì)，既不溶解于甲醇也不溶于水，因此進(jìn)一步比較了乙腈、乙腈+水(1∶1，V/V)的提取效率，發(fā)現(xiàn)乙腈能使凝膠類消毒產(chǎn)品變性沉淀，同時(shí)能提取目標(biāo)物質(zhì)，而乙腈+水(1∶1，V/V)體系則使得凝膠類消毒產(chǎn)品呈“漿糊狀”，無法分離提取目標(biāo)物。

針對(duì)3種劑型的消毒產(chǎn)品，分別采用1、3和5 mL溶劑進(jìn)行提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，使用1 mL溶劑提取時(shí)，由于提取溶劑過少，提取不充分，進(jìn)一步增加提取溶劑的用量(3和5 mL)，各目標(biāo)物質(zhì)回收率均能滿足試驗(yàn)要求，由于使用5 mL溶劑提取時(shí)，受稀釋效應(yīng)的影響，各目標(biāo)物質(zhì)的方法定量限高于使用3 mL提取溶劑，因此，本實(shí)驗(yàn)采用3 mL溶劑提取目標(biāo)分析物。綜上所述，最終確定了液體劑型、膏霜?jiǎng)┬汀⒛z劑型不同的前處理方式，詳見1.2.2。

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