2.3 基質(zhì)效應(yīng)

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)中，基質(zhì)效應(yīng)(增強(qiáng)或抑制)是普遍存在的。以不含目標(biāo)分析物的樣品作為空白基質(zhì)，按照優(yōu)化好的方法對(duì)三種基質(zhì)進(jìn)行前處理并獲得空白基質(zhì)溶液，分別在空白基質(zhì)溶液和配制溶液中加入同等濃度(10 ng/mL)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，將各目標(biāo)分析物在空白基質(zhì)溶液中的峰面積與配制溶液中的峰面積進(jìn)行比較，基質(zhì)效應(yīng)大于100%代表基質(zhì)增強(qiáng)，反之，代表基質(zhì)抑制。如圖3所示，13種目標(biāo)分析物在膏霜?jiǎng)┬?、液體劑型、凝膠劑型中基質(zhì)效應(yīng)分別為60.7%～152.8%、57.7%～188.0%和71.2%～159.6%。

其中喹諾酮類抗生素(氧氟沙星和諾氟沙星)基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)最為明顯，在三種基質(zhì)中均大于141.1%，諾氟沙星在液體劑型中基質(zhì)效應(yīng)最高，達(dá)到188.0%。除強(qiáng)力霉素和頭孢拉定外，其余11種物質(zhì)在三種基質(zhì)中均表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)或基質(zhì)抑制效應(yīng)，且受基質(zhì)的影響較為接近。本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步比較了不同氯化鈉加入量(0.05、0.15和0.3 g)對(duì)各目標(biāo)物基質(zhì)效應(yīng)的影響，如圖4所示，隨著氯化鈉用量的增加，各目標(biāo)物質(zhì)的總體基質(zhì)效應(yīng)影響略有減小，進(jìn)一步將氯化鈉用量增至0.3 g，各目標(biāo)物質(zhì)的基質(zhì)效應(yīng)并沒有得到明顯的改變，因此，在處理液體劑型樣品時(shí)選用0.15 g氯化鈉進(jìn)行試驗(yàn)。

2.4 方法學(xué)數(shù)據(jù)

實(shí)驗(yàn)采用同位素內(nèi)標(biāo)校正法進(jìn)行定量，不僅克服基質(zhì)效應(yīng)的影響，同時(shí)消除前處理過程中目標(biāo)物損失造成的影響。其中，四環(huán)素、金霉素以四環(huán)素-D6為內(nèi)標(biāo)，土霉素以土霉素-13C22-15N2為內(nèi)標(biāo)，米諾環(huán)素以米諾環(huán)素-D6為內(nèi)標(biāo)，強(qiáng)力霉素以強(qiáng)力霉素-D3為內(nèi)標(biāo)，紅霉素以紅霉素13C-D3為內(nèi)標(biāo)，頭孢拉定以頭孢氨芐-D5為內(nèi)標(biāo)，磺胺嘧啶以磺胺嘧啶-D6為內(nèi)標(biāo)，氧氟沙星、諾氟沙星以左氧氟沙星-D8為內(nèi)標(biāo)、克林霉素以噻菌靈-D4為內(nèi)標(biāo)，甲硝唑以甲硝唑-D4為內(nèi)標(biāo)，氯霉素以氯霉素-D5。如表4所示，各目標(biāo)物質(zhì)在三種基質(zhì)中的回收率經(jīng)同位素內(nèi)標(biāo)校正后，多在100%±10%范圍內(nèi)，較好的避免了基質(zhì)效應(yīng)對(duì)定量結(jié)果的影響(圖3)。

13種目標(biāo)物質(zhì)的方法檢出限、定量限、線性相關(guān)系數(shù)見表3，加標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。各目標(biāo)物在3種劑型消毒產(chǎn)品中的方法學(xué)數(shù)據(jù)良好，13種選定的抗生素方法檢出限在2～25 μg/kg之間，滿足消毒產(chǎn)品中抗生素違法添加的檢測(cè)要求。以未檢出目標(biāo)分析物的樣品作為空白樣品，根據(jù)各目標(biāo)物質(zhì)的定量限，進(jìn)行低、中、高三個(gè)濃度水平加標(biāo)實(shí)驗(yàn)，其中紅霉素、氧氟沙星、克林霉素加標(biāo)水平為15、50和250 μg/kg，四環(huán)素、土霉素、磺胺嘧啶、諾氟沙星、甲硝唑、氯霉素加標(biāo)水平為45、100和250 μg/kg，金霉素、米諾環(huán)素、強(qiáng)力霉素、頭孢拉定加標(biāo)水平為75、250和500 μg/kg，每個(gè)濃度水平平行測(cè)定6次，各物質(zhì)低、中、高3個(gè)濃度加標(biāo)水平的回收率為71.2%～130.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于11.3%。

2.5 實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果

運(yùn)用建立好的方法，對(duì)液體劑型、凝膠劑型、膏霜?jiǎng)┬拖井a(chǎn)品中的13種目標(biāo)物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，在一份膏霜?jiǎng)┬偷南井a(chǎn)品中檢測(cè)出氧氟沙星(圖5)，含量為21.1 mg/kg，其余樣品中均未檢出相關(guān)物質(zhì)。

3 結(jié)論

本法基于超高液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，建立了適用于液體劑型、膏霜?jiǎng)┬秃湍z劑型類消毒產(chǎn)品中8類13種抗生素的檢測(cè)需求，該方法簡單、可靠、重現(xiàn)性好，覆蓋的抗生素種類多且針對(duì)性強(qiáng)，可用于打擊消毒產(chǎn)品中違法添加抗生素的行為。

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