目的 采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)，建立消毒產(chǎn)品中8類13種抗生素的檢測(cè)方法。方法 樣品經(jīng)甲醇或乙腈提取后，經(jīng)Waters HSS T3色譜柱(100 mm×2.1 mm， 1.8μm)分離，三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)。結(jié)果 13種選定的抗生素在4～100μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.991，檢出限為2～25μg/kg。在3種不同劑型的消毒產(chǎn)品中，低、中、高3個(gè)濃度加標(biāo)水平的回收率為71.2%～130.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于11.3%，滿足消毒產(chǎn)品中抗生素違法添加的檢測(cè)要求。運(yùn)用建立的方法，在一份膏霜?jiǎng)┬偷南井a(chǎn)品中檢測(cè)出氧氟沙星，含量為21.1 mg/kg，其余樣品中均未檢出相關(guān)物質(zhì)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)單、可靠、重現(xiàn)性好，覆蓋的抗生素種類多。

抗生素作為一種殺菌劑，被廣泛應(yīng)用于臨床、畜牧業(yè)、水產(chǎn)養(yǎng)殖等行業(yè)。但由于抗生素的大量使用，其耐藥性受到越來(lái)越多的關(guān)注。眾所周知，消毒產(chǎn)品也具有殺滅細(xì)菌的作用。不同于歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，我國(guó)未將消毒產(chǎn)品納入處方藥進(jìn)行管理，原衛(wèi)生部《消毒產(chǎn)品生產(chǎn)企業(yè)衛(wèi)生規(guī)范》(2009年版)第五章第三十條明確指出“消毒產(chǎn)品禁止使用抗生素、抗真菌藥物、激素等物料”。然而，部分生產(chǎn)企業(yè)仍然違規(guī)添加抗生素類藥物，以增加消毒或抗抑菌效果，用于冒充消毒產(chǎn)品和抗抑菌產(chǎn)品，這不僅加重了抗生素的濫用情況，同時(shí)也給消毒和抗抑菌產(chǎn)品的安全使用造成隱患。

目前國(guó)內(nèi)外對(duì)抗生素的檢測(cè)主要包括環(huán)境樣本、生物樣本、肉制品、乳制品、化妝品等，而關(guān)于消毒產(chǎn)品中抗生素檢測(cè)的研究很少，鮮有的報(bào)道也只涵蓋了一兩類抗生素的檢測(cè)，尚無(wú)多類別抗生素檢測(cè)的報(bào)道。原衛(wèi)生部多次組織專項(xiàng)整治行動(dòng)，打擊違法添加行為，由于沒(méi)有完善的方法和相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，目前仍然無(wú)法對(duì)相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)行有效監(jiān)管。目前抗生素的檢測(cè)方法有酶聯(lián)免疫法、毛細(xì)管電泳法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜法及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等。本方法基于超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(ulta high perfomance chromatography tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS)，建立了對(duì)不同劑型的消毒產(chǎn)品中四環(huán)素類(四環(huán)素、土霉素、金霉素、米諾環(huán)素、強(qiáng)力霉素)、大環(huán)內(nèi)酯類(紅霉素)、β-內(nèi)酰胺類(頭孢拉定)、磺胺類(磺胺嘧啶)、喹諾酮類(氧氟沙星、諾氟沙星)、林可酰胺類(克林霉素)、硝基咪唑類(甲硝唑)、氯霉素類(氯霉素)8類13種抗生素的檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

30 A超高效液相色譜儀(日本島津公司)，QTRAP 5500三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)AB SCIEX公司)，Waters HSS T3色譜柱(100 mm×2.1 mm， 1.8 μm，美國(guó)Waters公司)。

抗生素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)包括四環(huán)素、土霉素、金霉素、米諾環(huán)素、強(qiáng)力霉素、紅霉素、頭孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、諾氟沙星、克林霉素、甲硝唑、氯霉素，同位素標(biāo)記物包括四環(huán)素-D6、土霉素-13C22-15N2、米諾環(huán)素-D6、強(qiáng)力霉素-D3、磺胺嘧啶-D6、頭孢氨芐-D5、左氧氟沙星-D8、諾氟沙星-D5、紅霉素13C-D3、克林霉素-D3、甲硝唑-D4、氯霉素-D5，均購(gòu)自德國(guó)Dr. Ehrenstorfer GmbH以及奧地利Romerlabs兩家公司。色譜級(jí)的甲醇、乙腈購(gòu)自Merck公司。色譜級(jí)的甲酸購(gòu)自阿拉丁。分析純的氯化鈉購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)。MS級(jí)水購(gòu)自飛世爾公司。0.22 μm尼龍膜購(gòu)自津滕公司。樣品來(lái)自于廠家送檢樣品(非抗生素項(xiàng)目檢測(cè)樣品)，保存在4 ℃冰箱中。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別準(zhǔn)確稱取各標(biāo)準(zhǔn)品及同位素內(nèi)標(biāo)10 mg，用甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中，配成濃度為約1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20 ℃冷凍避光保存。分別準(zhǔn)確吸取適量各單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成濃度為10 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，4 ℃冷藏避光保存；分別吸取適量單一內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配制成5 μg/mL的混合內(nèi)標(biāo)中間液，4 ℃冷藏避光保存。

1.3 樣品前處理

液體劑型：稱取0.2 g(精確至1 mg)混合均勻的樣品，置于15 mL離心管中，先加入10.0 μL混合內(nèi)標(biāo)中間液，再加3.0 mL甲醇，渦旋1 min使樣品分散，超聲提取10 min，加入0.15 g氯化鈉，渦旋混勻，9000 r/min離心5 min，吸取上清液，濾膜過(guò)濾，取0.8 mL濾液至進(jìn)樣瓶中，加入0.2 mL水，混合均勻，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

凝膠劑型：稱取0.2 g(精確至1 mg)混合均勻的樣品，置于15 mL離心管中，先加入10.0 μL混合內(nèi)標(biāo)中間液，再加3.0 mL乙腈，渦旋1 min使樣品分散，超聲提取10 min，9000 r/min離心5 min，吸取上清液，濾膜過(guò)濾，取0.8 mL濾液至進(jìn)樣瓶中，再加入0.2 mL水，混合均勻，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

膏霜?jiǎng)┬停悍Q取0.2 g(精確至1 mg)混合均勻的樣品，置于15 mL離心管中，先加入10.0 μL混合內(nèi)標(biāo)中間液，再加3.0 mL甲醇，渦旋1 min使樣品分散，超聲提取10 min，9000 r/min離心5 min，吸取上清液，濾膜過(guò)濾，取0.8 mL濾液至進(jìn)樣瓶中，加入0.2 mL水，混合均勻，供超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件

色譜柱：Waters HSS T3色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.8 μm)；流動(dòng)相：A相為0.1%甲酸水溶液，B相為乙腈；流速0.3 mL/min；柱溫40 ℃；進(jìn)樣體積5 μL；梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

1.4.2 質(zhì)譜條件

電離方式：ESI+和ESI-同時(shí)掃描；離子源溫度：550 ℃；毛細(xì)管電壓： 5.5 kV(ESI+)和 -4.5 kV(ESI-)；氣簾氣：30 psi；霧化氣：65 psi；輔助氣：65 psi；監(jiān)測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式，各目標(biāo)化合物的質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表2。

1.5 校正曲線繪制

在上述色譜條件和質(zhì)譜條件下繪制校正曲線，該曲線的縱坐標(biāo)為被測(cè)組分i定量離子峰面積Ai與內(nèi)標(biāo)物定量離子峰面積Ais之比Ai/Ais，橫坐標(biāo)為樣品中被測(cè)組分i的含量Ci。

1.6 方法檢出限和定量限的確定

選取不含目標(biāo)化合物的樣品，加入低濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，按照1.3節(jié)處理后上機(jī)檢測(cè)，獲得各目標(biāo)分析物的信噪比數(shù)據(jù)，根據(jù)加標(biāo)量，按照3倍信噪比(S/N=3)作為檢出限、10倍信噪比(S/N=10)作為定量限的原則計(jì)算方法檢出限和定量限。

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