2.2 不同天麻添加量對灰樹花發(fā)酵基質(zhì)總黃酮含量的影響

如圖3所示，通過相同天麻添加比例，不同接菌方式：一組為未發(fā)酵組（未接菌），一組為發(fā)酵組（接菌），對比每組總黃酮含量，結(jié)果表明灰樹花在生長發(fā)酵的同時(shí)能夠分解總黃酮，使得總黃酮含量明顯降低。天麻參與灰樹花固態(tài)發(fā)酵能夠一定程度的促進(jìn)灰樹花分解總黃酮，在天麻添比例分別為10%、20%、30%、40%、50%相比于空白組（0%）分解總黃酮的能力分別提高了1.05、1.24、1.2、1.3和1.01倍。

此結(jié)果驗(yàn)證了灰樹花能夠在以苦蕎為主要基質(zhì)的培養(yǎng)基進(jìn)行正常的生長，是由于其能夠?qū)|(zhì)中富含的總黃酮類物質(zhì)進(jìn)行分解代謝提供自身的生長需求。同時(shí)也驗(yàn)證了添加一定比例的天麻參與灰樹花發(fā)酵能夠一定程度的促進(jìn)其分解代謝總黃酮的能力。通過提高總黃酮類物質(zhì)的分解能力，提高大分子黃酮類物質(zhì)轉(zhuǎn)化為小分子黃酮苷類物質(zhì)，并且增加其水溶性和分子利用程度，進(jìn)而提高菌質(zhì)食藥用價(jià)值。

2.3 不同天麻添加量對灰樹花發(fā)酵基質(zhì)蘆丁及異槲皮苷含量的影響

由圖3和圖4研究結(jié)果可知，以苦蕎為主要發(fā)酵基質(zhì)，灰樹花會對總黃酮類物質(zhì)進(jìn)行分解。為進(jìn)一步探究對灰樹花發(fā)酵基質(zhì)中總黃酮類物質(zhì)中具體成分含量的影響，采用HPLC對基質(zhì)中蘆丁和異槲皮苷進(jìn)行含量檢測，結(jié)果表明在發(fā)酵12 d后，發(fā)酵基質(zhì)中蘆丁和異槲皮苷的含量均有不同程度的降低。

如圖5可知，隨著天麻添加量的增加，發(fā)酵基質(zhì)中蘆丁的含量減少程度更高，相比于空白組（未添加天麻）在天麻添加比例為10%、20%、30%、40%和50%時(shí)，蘆丁含量降低量分別增加了1.37、1.70、1.03、1.13和4.0倍（P<0.01）。

與空白組相比均具有極顯著性差異，說明在天麻添加比例為50%時(shí)，對灰樹花分解蘆丁具有最大的促進(jìn)作用；如圖6可知，在天麻添加比例為分別為20%、30%、40%和50%時(shí)，對灰樹花分解異槲皮苷具有極顯著地促進(jìn)作用，相比于空白組（未添加天麻），對異槲皮苷的降低量分別提高了1.06、1.09、1.08和1.08倍（P<0.01）。文獻(xiàn)記載，橙皮苷酶可以將蘆丁有效地轉(zhuǎn)化為異槲皮苷，在此次實(shí)驗(yàn)中，分別對同一基質(zhì)中的蘆丁和異槲皮苷物質(zhì)進(jìn)行含量測定，異槲皮苷的含量并未升高，可以排除蘆丁含量的減少是由于灰樹花分泌的橙皮苷酶將其轉(zhuǎn)化為異槲皮苷，而是灰樹花在生長過程中對蘆丁進(jìn)行了分解利用。

2.4 灰樹花對不同添加比例天麻主要成分的影響

微生物在生長代謝的同時(shí)會向外界分泌多種胞外酶：如纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶等，分泌的胞外酶會按照各種酶的專一性選擇性地分解代謝有機(jī)物轉(zhuǎn)化為小分子?；覙浠ǚ置诘陌饷竿瑯涌梢宰饔糜谔炻榈某煞?，選擇天麻所含的四種主要成分（天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛、巴利森苷）進(jìn)行HPLC檢測，探究灰樹花對天麻四種成分的影響。結(jié)果表明，在天麻添加量為10%~50%時(shí)，與未接種灰樹花（未發(fā)酵組）相比，接種灰樹花（發(fā)酵組）能夠幾乎完全分解天麻素。

由表1可知，在天麻添加比例為10%，灰樹花對對羥基苯甲醇及對羥基苯甲醛的分解最為顯著，表明高比例的天麻參與灰樹花固態(tài)發(fā)酵能夠抑制灰樹花對天麻本身對羥基苯甲醇和對羥基苯甲醛的分解；在天麻添加量分別為5個(gè)添加比例時(shí)，都能夠提高巴利森苷的含量，其中50%天麻添加量是提高其含量最為顯著。表明在天麻參與灰樹花固態(tài)發(fā)酵時(shí)，整個(gè)發(fā)酵體系存在著巴利森苷成分不同程度的生物轉(zhuǎn)化。文獻(xiàn)表明在微生物參與谷物進(jìn)行發(fā)酵時(shí)，能夠改變整個(gè)發(fā)酵體系的生物活性的種類和含量進(jìn)而提高發(fā)酵物的食藥用價(jià)值。

3 結(jié)論

以貴州特色藥食同源作物苦蕎、薏仁米等為主要基質(zhì)，接種灰樹花作為發(fā)酵菌種，灰樹花在此基質(zhì)上能夠正常的生產(chǎn)代謝，灰樹花能夠有效分解利用苦蕎及薏仁米等基質(zhì)，試研發(fā)創(chuàng)新一種新的適合灰樹花菌絲體生長的培養(yǎng)基質(zhì)。

以不同比例的中藥天麻參與灰樹花的固態(tài)發(fā)酵，研究天麻對發(fā)酵基質(zhì)中主要活性成分含量的影響。結(jié)果表明：不同比例的天麻參與固態(tài)發(fā)酵，對灰樹花的菌絲體的生長沒有明顯的抑制作用，同時(shí)天麻的加入能夠不同程度地促進(jìn)灰樹花對基質(zhì)中總黃酮物質(zhì)的分解，通過提高總黃酮類物質(zhì)的分解能力，提高大分子黃酮類物質(zhì)轉(zhuǎn)化為小分子黃酮苷類物質(zhì)，并且增加其水溶性和分子利用程度，進(jìn)而提高菌質(zhì)食藥用價(jià)值，并且灰樹花也能夠?qū)μ炻樗饕煞痔炻樗亍αu基苯甲醇、對羥基苯甲醛等物質(zhì)進(jìn)行分解，與未發(fā)酵組相比都存在不同程度的分解，后期的研究重點(diǎn)主要研究總黃酮類和3種主要天麻活性成分的具體轉(zhuǎn)化物質(zhì)。

發(fā)酵體系中巴利森苷的含量與未發(fā)酵組相比反而含量有所提高，表明通過灰樹花的發(fā)酵，可以進(jìn)行巴利森苷成分的生物合成和富集。試驗(yàn)驗(yàn)證了灰樹花在非傳統(tǒng)基質(zhì)上仍然能夠進(jìn)行正常的生長，并且能夠分解總黃酮類物質(zhì)和改變基質(zhì)的表觀和內(nèi)部結(jié)構(gòu)，天麻參與其發(fā)酵能夠促進(jìn)其分解總黃酮類物質(zhì)。拓展了中藥資源與大型真菌共發(fā)酵的思路和前景，為創(chuàng)新藥物菌質(zhì)的品種提供了一種新的思路。

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