目的采用HPLC法同時(shí)測(cè)定和胃降逆膠囊中大黃素和齊墩果酸的含量。方法采用AgilentZorbaxSB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1mol·L-1磷酸溶液（85∶15），梯度洗脫，流速1mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm。結(jié)果大黃素和齊墩果酸的峰面積與進(jìn)樣量間的線性關(guān)系良好，r均超過(guò)0.9993，RSD不超過(guò)2%，平均回收率均大于95%。結(jié)論所用方法重復(fù)性好、回收率高，適用于和胃降逆膠囊的質(zhì)量控制。

和胃降逆膠囊為臨床常用中成藥，主要由朱砂七、天仙藤、赭石、老龍皮、楤木、蒲公英等藥材組成，具有活血理氣、清熱化淤、和胃降逆的功效。處方中的朱砂七是“太白七藥”中的名貴品種，主治“七勞五傷”；天仙藤具有活血止痛、利水消腫，解毒的功效；赭石可以用于胃氣上逆嘔吐、呃逆、噫氣；楤木可發(fā)揮鎮(zhèn)痛、抗炎、護(hù)肝等藥理作用；而老龍皮具有抗氧化作用；蒲公英則具有抗腫瘤、抗氧化的功效。和胃降逆膠囊在臨床上主要用于治療多種胃炎、胃食管反流等，與其他藥物聯(lián)用也可治療食欲不振

。參考課題組對(duì)于其他處方中成分的含量測(cè)定，現(xiàn)采用HPLC法同時(shí)測(cè)定和胃降逆膠囊中大黃素和齊墩果酸兩種有效成分的方法，有利于和胃降逆膠囊的質(zhì)量控制。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試藥

LC-20AT型高效液相色譜儀、ΜV-1750型紫外分光光度計(jì)。大黃素、齊墩果酸對(duì)照品（110756-201512、110709-201607）；和胃降逆膠囊方中所有藥材；和胃降逆膠囊（自制，規(guī)格：0.4g）；水為純化水；甲醇、磷酸為色譜純；其余試劑為分析純。

1.2方法與結(jié)果

1.2.1色譜條件

采用AgilentZORBAXSB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為甲醇-0.1mol·L-1磷酸溶液，梯度洗脫（0～15min、30%～85%甲醇，15～30min、85%甲醇），檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，流速為1mL·min-1，柱溫為室溫，進(jìn)樣量10μL。

1.2.2溶液的制備

參照2015年版《中國(guó)藥典》中一清膠囊項(xiàng)下大黃的測(cè)定方法制備供試品溶液。取4粒樣品內(nèi)容物，研細(xì)混勻，取約1.0g，精密稱(chēng)定，加20mL甲醇，混勻，靜置30min，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)?0mL2.5mol·L-1硫酸溶液，超聲處理（250W，50kHz）5min，轉(zhuǎn)移至100mL錐形瓶中，再加15mL三氯甲烷，于70℃水浴上加熱回流30min，冷卻，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，分取三氯甲烷液，用三氯甲烷加熱回流酸液（10mL×2），每次20min，分取三氯甲烷液，酸液再用10mL三氯甲烷振搖提取，合并三氯甲烷液，蒸干，甲醇溶解殘?jiān)?，轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中，加甲醇定容，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

分別對(duì)供試品溶液制備過(guò)程中的水解時(shí)間和提取次數(shù)進(jìn)行了驗(yàn)證，以峰面積與取樣量比值為評(píng)價(jià)指標(biāo)，比值越大，說(shuō)明水解越完全，提取越徹底。結(jié)果水解30min和提取2次后，峰面積與取樣量的比值不再增加，說(shuō)明已經(jīng)水解和提取完全，結(jié)果與《中國(guó)藥典》中的方法一致。分別精密稱(chēng)取0.5mg大黃素、0.7mg齊墩果酸對(duì)照品，置小燒杯中，加甲醇溶解，超聲30min，使徹底溶解，冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入10mL量瓶中，加甲醇定容，制得大黃素、齊墩果酸終濃度分別為50、70μg·mL-1的混合對(duì)照品溶液。按照處方制備不含老龍皮、楤木和朱砂七的陰性樣品，按上述方法操作，即得不含相關(guān)藥材的陰性對(duì)照溶液。

1.2.3專(zhuān)屬性的試驗(yàn)

分別取供試品、對(duì)照品和陰性對(duì)照溶液，在“1.2.1”項(xiàng)色譜條件下分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。陰性樣品在大黃素與齊墩果酸色譜峰相應(yīng)的位置上未檢出色譜峰，表明處方中其他藥材的成分不會(huì)干擾測(cè)定（圖1）。

1.2.4線性關(guān)系的考察

吸取3、6、9、12、15、18μL含大黃素與齊墩果酸的混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣測(cè)定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得大黃酸、齊墩果酸的回歸方程為：Y1=2.0706×103X-2.6883×105（r2=0.9997）、Y2=947.08X-1.6826×105（r2=0.9998），線性范圍分別為0.1533～0.9198、0.2133～1.2798μg。

1.2.5精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性的考察

分別精密取10μL大黃素、齊墩果酸混合對(duì)照品溶液進(jìn)樣，共6次，記錄峰面積，計(jì)算得大黃素、齊墩果酸峰面積的RSD分別0.80%、0.82%，表明精密度良好。取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10h時(shí)測(cè)定峰面積，計(jì)算得大黃素、齊墩果酸峰面積的RSD分別0.50%、0.80%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性較好。取同一批樣品共6份，按“1.2.2”項(xiàng)方法制成供試品溶液，分別精密量取10μL進(jìn)樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中大黃素和齊墩果酸的含量。6次含量測(cè)定的平均含量分別為2.944、4.099mg·g-1，RSD分別為1.65%、1.73%。

1.2.6加樣回收率的考察

取同一批樣品，共6份，每份約0.5g，精密稱(chēng)定，分別精密加入44.6μg·mL-1大黃素、296μg·mL-1齊墩果酸對(duì)照品溶液1mL，分別按“1.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，取10μL進(jìn)樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中大黃素和齊墩果酸的含量并計(jì)算回收率（表1）?；厥章屎蚏SD均在合理范圍內(nèi)，符合含量測(cè)定的要求。

1.2.7樣品的含量測(cè)定

取3批和胃降逆膠囊，按“1.2.2”項(xiàng)方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，通過(guò)外標(biāo)法計(jì)算大黃素和齊墩果酸的含量。3批樣品中，每粒分別含大黃素1.18、1.18、1.19mg、齊墩果酸1.63、1.63、1.64mg。

2討論

朱砂七是和胃降逆膠囊中的主藥，其主要有效成分是大黃素，而老龍皮和楤木是輔藥，其主要有效成分都含有齊墩果酸，因此，選擇大黃素和齊墩果酸作為含量測(cè)定的指標(biāo)。大黃素是一種蒽醌衍生物，而齊墩果酸屬于三萜皂苷，二者皆可溶解于甲醇中，都具有酸性，酸化濾液殘?jiān)笏嵝晕镔|(zhì)以游離形式存在，再用三氯甲烷回流，大黃素和齊墩果酸會(huì)進(jìn)入氯仿層，分取有機(jī)層，重復(fù)多次操作，則可充分提取樣品中的大黃素和齊墩果酸。對(duì)大黃素和齊墩果酸在200～400nm掃描，在210nm處大黃素和齊墩果酸均有強(qiáng)吸收，因此，設(shè)定210nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。文中所用方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可更好地控制和胃降逆膠囊的質(zhì)量。

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