（7）DPPH自由基清除力測(cè)定

根據(jù)DPPH與乙醇溶液顯色，當(dāng)有抗氧化劑存在時(shí)，使DPPH乙醇溶液顏色消退，從而導(dǎo)致吸光強(qiáng)度發(fā)生改變的方法測(cè)定DPPH自由基清除能力。參照Sun等的實(shí)驗(yàn)方法并做適當(dāng)修改。分別精確配制0.125mg/mL、0.25mg/mL、0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL、2.0mg/mL樣品多糖溶液，用95％乙醇溶液配制0.2mmol/LDPPH溶液，依次在反應(yīng)體系中加入2.0mLDPPH乙醇溶液(0.2mmol/L)和2.0mL不同濃度的多糖溶液。將反應(yīng)體系混勻，在室溫下靜置30min，在517nm處測(cè)定各反應(yīng)液的吸光值?？瞻捉M的多糖溶液由95％乙醇溶液代替。對(duì)照組用同等濃度的VC溶液代替多糖溶液。按照下式計(jì)算DPPH自由基的清除率。

DPPH自由基清除率(％)=(Ao-A)/Ao×100％，其中，Ao：空白組的吸光值；A：樣品組的吸光值。

二、結(jié)果與分析

1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

以葡萄糖含量為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)吸光值為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程(如圖2)：

2、樺剝管菌多糖提取的單因素實(shí)驗(yàn)

（1）水浴溫度對(duì)樺剝管菌多糖得率的影響

從圖3可以看出，水浴溫度在40℃～70℃范圍內(nèi)時(shí)，隨著水浴溫度的增高，樺剝管菌多糖得率不斷增加，當(dāng)水浴溫度達(dá)到70℃時(shí)，多糖得率最大，在水浴溫度進(jìn)一步增高時(shí)，多糖得率有所降低。當(dāng)溫度較低時(shí)，多糖的溶解與滲透能力較低，樺剝管菌多糖不易有效溶出。當(dāng)溫度較高時(shí)，高溫“崩解”細(xì)胞并增強(qiáng)分子熱運(yùn)動(dòng)，促使部分多糖鏈降解更易溶出。但當(dāng)溫度過高時(shí)，又會(huì)破壞多糖成分，引起多糖降解，從而導(dǎo)致提取率的下降。因此選擇水浴溫度60、70、80℃進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)分析。

（2）超聲溫度對(duì)樺剝管菌多糖得率的影響

從圖4可以看出，樺剝管菌多糖得率隨著超聲溫度的升高，呈現(xiàn)出先升后降的趨勢(shì)，超聲溫度在70℃時(shí)，多糖得率最大，為7.28％，但與其他超聲溫度影響下的多糖得率相差不大，因此不選擇超聲溫度進(jìn)行后續(xù)的響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)分析。

（3）超聲時(shí)間對(duì)樺剝管菌多糖得率的影響

從圖5可以看出，超聲時(shí)間在10～30min范圍內(nèi)時(shí)，隨著超聲時(shí)間的增加，樺剝管菌多糖得率為6.24％～6.99％，變化不明顯，與其他因素相比較，超聲時(shí)間影響較小，因此不選擇超聲時(shí)間進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)分析。

（4）超聲功率對(duì)樺剝管菌多糖得率的影響

從圖6可以看出，超聲功率在60～100W的范圍內(nèi)，樺剝管菌多糖得率變化較明顯，當(dāng)超聲功率在80W時(shí)，其多糖得率達(dá)到相對(duì)最大值，超聲功率也是影響多糖得率的因素之一，多糖得率在超聲功率為90W時(shí)下降可能是由于超聲波過強(qiáng)的剪切力和沖擊波對(duì)多糖分子有所破壞，導(dǎo)致多糖得率有所降低。因此選擇超聲功率70、80、90W進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)分析。

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