（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線方程

采用確定的色譜條件，分別對不同濃度索馬甜標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖3所示。所得索馬甜標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=3.62568X-47.04715，相關(guān)系數(shù)為0.9983，表明在10～500mg／L濃度范圍內(nèi)其線性關(guān)系良好。

（4）檢出限及定量限

重復(fù)測定20次含有10mg／L索馬甜的基質(zhì)樣品，以結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差的3倍計算出方法的檢出限為1.6mg／L，以結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍計算出定量限為5.3mg／L，表明該方法能滿足食品中甜味劑的檢測要求。

（5）回收率和精密度

采用本文所建立的方法對市售的15個批次的飲料類產(chǎn)品(包括碳酸類飲料可樂、雪碧，茶類飲料紅茶、綠茶、花茶，果汁飲料，維生素飲料)進(jìn)行分析檢測，均未發(fā)現(xiàn)索馬甜的檢出，與其產(chǎn)品標(biāo)簽成分中未明示使用索馬甜的情況一致。

為驗證方法的可行性，進(jìn)一步對飲料樣品進(jìn)行加標(biāo)試驗。在此過程發(fā)現(xiàn)，直接向各類飲料中加入索馬甜，均無法檢出，分析其原因可能是由于各類飲料中高濃度的糖含量引起蛋白聚沉所導(dǎo)致的，因此，加標(biāo)回收試驗均是在對飲料進(jìn)行10倍稀釋后的基礎(chǔ)上添加。不同樣品的索馬甜加標(biāo)試驗超高效液相色譜結(jié)果如圖4所示，索馬甜加標(biāo)回收率及精密度試驗結(jié)果見表1。

根據(jù)表1結(jié)果，不同樣品索馬甜加標(biāo)回收率在82.8％～102.3％，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均在6％以內(nèi)，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確度和重復(fù)性。

2、SDS-PAGE分析方法的建立

SDS-PAGE是分析蛋白質(zhì)常用的方法，能夠?qū)崿F(xiàn)定性及半定量分析。配制不同濃度的索馬甜蛋白水溶液，其SDS-PAGE結(jié)果如圖5所示。

由圖5可以看出，索馬甜蛋白條帶超過20kD，與文獻(xiàn)中報道的分子量22kD大小吻合，隨著濃度的增大條帶顏色逐漸加深、條帶變寬，其中濃度為10mg／L時，蛋白條帶隱約可見，濃度為增加至25mg／L時，條帶已更加清晰、明顯，由此可見，SDS-PAGE法滿足GB2760-2014最大允許使用量0.025g／kg的分析要求。

對各類飲料進(jìn)行10倍稀釋后隨機(jī)添加不同濃度索馬甜標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照前述的電泳分析方法進(jìn)行處理并電泳，其結(jié)果如圖6所示。由圖中可以看出，各加標(biāo)樣品電泳條帶與索馬甜標(biāo)準(zhǔn)樣品一致，由此可見利用SDS-PAGE法能夠?qū)崿F(xiàn)對飲料中索馬甜進(jìn)行分析。

三、結(jié)論

本論文分別基于超高效液相色譜法和SDS-PAGE法建立了飲料中索馬甜的分析測試方法。通過樣品加標(biāo)實驗，結(jié)果表明兩種方法均可實現(xiàn)對飲料中索馬甜的檢測，其靈敏度都可滿足GB2760-2014中最大限值使用的檢測要求。此外，對于較為復(fù)雜的基質(zhì)樣品，通過采用兩種方法進(jìn)行相互佐證，能夠獲得更為可靠的結(jié)果。

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