3.2奶粉樣品中沙門氏菌的檢測(cè)分析

3.2.1樣品中沙門氏菌的平板分離

樣品經(jīng)２次增菌后，劃線接種于BS瓊脂平板、XLD瓊脂平板和沙門氏菌顯色平板上進(jìn)行分離培養(yǎng)，結(jié)果見(jiàn)表2：W樣品在BS、XLD以及沙門氏菌顯色3種平板上均出現(xiàn)可疑沙門氏菌菌落，其中在BS和XLD平板上可見(jiàn)典型沙門氏菌落③和④，而在沙門氏菌顯色平板上均為可疑菌落?、俸廷?個(gè)菌落鑒定。Q樣品在BS平板無(wú)可疑菌落，而在XLD和沙門氏菌顯色平板上無(wú)典型菌落，可能是非典型菌落或干擾菌。

沙門氏菌屬能產(chǎn)生特異性較強(qiáng)的辛酯酶，具有辛酯酶活性的干擾菌有銅綠假單胞菌、粘質(zhì)沙雷氏菌和蜂窩哈夫尼亞菌，這些菌在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上會(huì)生成紫紅色干擾菌。腸炎沙門菌雙相亞利桑那亞種在沙門氏菌顯色培養(yǎng)基上呈現(xiàn)因培養(yǎng)基廠家不同而不同墨綠到藍(lán)色菌落，這容易與其它腸桿菌混淆。楊云斌比較了沙門氏菌和干擾菌在3種分離平板上的特點(diǎn)，見(jiàn)表3。從表２和表３可以發(fā)現(xiàn)，在BS平板上，典型沙門氏菌落和沙門氏菌主要干擾菌的菌落特點(diǎn)容易區(qū)分開(kāi)來(lái)，而在其他2種平板上則容易混淆。

3.2.2奶粉樣品中沙門氏菌生化和血清鑒定結(jié)果

由于弗氏檸檬酸桿菌和大腸埃希氏菌的許多抗原與沙門氏菌的抗原完全或部分相同，且這2種菌與沙門氏菌屬O多價(jià)A-F診斷血清會(huì)發(fā)生交叉凝集反應(yīng)，因此血清鑒定陽(yáng)性者必須進(jìn)一步做其它生化鑒定。通常情況，做TSI和血清學(xué)鑒定后，只對(duì)血清鑒定陽(yáng)性菌落進(jìn)一步做后續(xù)生化鑒定。為慎重起見(jiàn)，本次對(duì)疑似陰性的考核樣品的菌落仍然做了后續(xù)生化鑒定。

W和Q樣品平板分離出的6種可疑菌落TSI和血清學(xué)鑒定結(jié)果見(jiàn)表４。表4表明，W樣品在沙門氏菌顯色平板上分離到的紫紅色可疑菌落中2個(gè)菌落(菌落①和②)為血清學(xué)鑒定陰性，而在BS和XLD 2個(gè)平板上挑出的２個(gè)可疑菌落(菌落③和④)血清學(xué)鑒定陽(yáng)性，且生化鑒定符合，判定為沙門氏菌檢出，菌落①②③和④屬于同一樣品，因而①②無(wú)須生化再鑒定。Q樣品在XLD平板上的可疑菌落(菌落⑤和⑥)經(jīng)生化和血清鑒定，結(jié)果為非沙門氏菌。在能力考核中，檢出陽(yáng)性的判斷比陰性樣品的要容易，而對(duì)于諸多形態(tài)可疑菌落的陰性樣品，需對(duì)可疑菌落逐個(gè)鑒定，否則易犯錯(cuò)。

3.3奶粉樣品中阪崎腸桿菌的檢測(cè)分析

3.3.1平板分離

阪崎腸桿菌在歷史上一直被誤認(rèn)為是黃色陰溝腸桿菌，因此兩者互為干擾菌；阪崎腸桿菌顯色平板是利用其α-葡萄糖苷酶陽(yáng)性，在TSA中加入XαGlc(5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷酸)，α-葡萄糖苷酶作用于XαGlc而使阪崎腸桿菌生成特異性藍(lán)綠色菌落。樣品V在阪崎腸桿菌顯色平板出現(xiàn)可疑藍(lán)綠色菌落(表５)，于是挑取10個(gè)可疑菌落于1 mL無(wú)菌生理鹽水中，稀釋混勻后在TSA劃線分離培養(yǎng)，借助放大鏡觀察菌落，結(jié)果出現(xiàn)2種菌落，有黃色菌落和淡黃粉色菌落，再進(jìn)一步做生化鑒定。樣品G無(wú)阪崎腸桿菌可疑菌落，判為未檢出。挑取可疑菌落是關(guān)鍵步驟，挑取的位置和個(gè)數(shù)盡可能增大捕捉概率，如果僥幸調(diào)取2~3個(gè)可疑菌落，則可能會(huì)漏檢。

3.3.2生化鑒定

對(duì)樣品V在TSA平板上生長(zhǎng)的2種菌落⑦和⑧進(jìn)行生化鑒定，如表6，結(jié)果表明，可疑菌落⑦產(chǎn)黃色素，氧化酶、山梨醇、賴氨酸陰性，精氨酸雙水解酶、鼠李糖、蔗糖、蜜二糖、苦杏仁甙陽(yáng)性，鑒定結(jié)果符合阪崎腸桿菌生化特征。菌落⑧的生化鑒定結(jié)果不符合阪崎腸桿菌生化特征。由此可見(jiàn)，α-葡萄糖苷酶陽(yáng)性是阪崎腸桿菌的屬性，但是并非唯一；阪崎腸桿菌顯色培養(yǎng)基對(duì)阪崎腸桿菌的特異性是有限的，這與吳清平等的論述一致。當(dāng)在顯色平板上發(fā)現(xiàn)有可疑菌落，若鑒定為陰性時(shí)，需用全排除法，否則容易出現(xiàn)假陰性。

3.4奶粉樣品中沙門氏菌和阪崎腸桿菌檢測(cè)結(jié)果

W樣品檢出沙門氏菌，Q樣品未檢出沙門氏菌；V樣品檢出阪崎腸桿菌，G樣品未檢出阪崎腸桿菌，檢測(cè)結(jié)果滿意。

4結(jié)論和討論

在分離鑒別沙門氏菌時(shí)，BS平板具有重要的決定性作用，而其它2種平板上容易受干擾菌的影響，只能起輔助鑒別作用。這一結(jié)論與與楊云斌等的“沙門顯色培養(yǎng)基的分離鑒定效果最好”的結(jié)論不同，但與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.4-2016的技術(shù)規(guī)范主旨一致。

辛酯酶是沙門氏菌顯色培養(yǎng)選擇設(shè)計(jì)的主要依據(jù)，其對(duì)沙門氏菌的靈敏度和特異度分別為100%和84.09%。本次實(shí)驗(yàn)中，W樣品在顯色平板上明顯都是沙門氏菌可疑菌落，挑選2個(gè)菌落實(shí)驗(yàn)但是血清鑒定結(jié)果卻是陰性，原因是顯示辛酯酶陽(yáng)性菌除了多數(shù)沙門氏菌外，還有銅綠假單胞菌、粘質(zhì)沙雷氏菌、蜂窩哈夫尼亞菌、熒光假單孢菌和惡臭假單孢菌等。

此外，在此次實(shí)驗(yàn)中本實(shí)驗(yàn)室還積累了兩點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)：第一，在準(zhǔn)備過(guò)程中，有意設(shè)計(jì)了兩種標(biāo)準(zhǔn)菌交互培養(yǎng)和分離的實(shí)驗(yàn)，主要目的為積累知識(shí)，增強(qiáng)辨別能力。第二，能力驗(yàn)證樣品不同于普通食品樣，應(yīng)試過(guò)程對(duì)于典型菌，一般操作者不容易犯錯(cuò)，確證相對(duì)容易；但對(duì)于非典型菌，則需要耐心做出后續(xù)鑒定，而不能輕易下結(jié)論；對(duì)于初篩是疑似陽(yáng)性者后續(xù)鑒定為陰性時(shí)，則需增多可疑菌的鑒定，必要時(shí)用全排除法。

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