2 結(jié)果

2.1 透射電子顯微鏡（TEM）分析

通過TEM觀察MoS2和MPRS的外貌特征，結(jié)果如圖1所示，從圖1a可觀察到MoS2呈片狀結(jié)構(gòu)，分散均勻，平均粒徑～100nm；從圖1b觀察到MPRS呈花瓣狀，分散均勻，平均粒徑～200nm。MPRS較MoS2粒徑變大，形狀也發(fā)生變化，表明MPRS成功合成。

2.2 X-射線光電子能譜（XPS）

分析圖2是MoS2、MP、MPR、MPRS材料的XPS全譜圖，從圖2a可以明顯看到C1s、O1s、Mo3d和S2p的特征峰，而圖2b的Mo3d和S2p元素的特征峰幾乎不被觀察到，這一步是在MoS2表面上修飾LA-PEG-COOH，C1s和O1s的峰明顯增強(qiáng)以及Mo3d和S2p的峰明顯減弱，可初步說明硫辛酸聚乙二醇羧酸成功連接在MoS2納米片上并覆蓋于其表面。圖2c和圖2b比較，發(fā)現(xiàn)C1s的峰明顯減弱，這可能是因為修飾RGD后，由于RGD覆蓋MP表面，RGD較LA-PEG-COOH含有較少的C原子，可認(rèn)為RGD靶向分子被引入。在引入SPDP交聯(lián)劑后，圖2d的C1s、O1s和S2p的峰和圖2c的C1s和O1s和S2p的峰有明顯的區(qū)別，這是由于SPDP分子含有較多的C原子，較少的O原子以及引入S原子的緣故，可證明SPDP連接于MPR上。

2.3 粒徑分布和Zeta電位的分析

納米載藥體系的粒徑和電位在一定程度上會影響細(xì)胞對納米材料的攝取，粒徑分布和Zeta電位的測試是納米材料的重要表征手段，是確定納米載藥體系是否理想的重要標(biāo)志。從圖3a可以看到MoS2、MP、MPR、MPRS和MPRS-DOX的粒徑大小無明顯差別，粒徑在200nm左右。從圖3b可以看到MoS2、MP、MPR、MPRS、MPRS-DOX的電位大小分別為-57mV，-35mV，-30.5mV，-35.6mV，+28.2mV，連接上DOX后，發(fā)生了電位翻轉(zhuǎn)，由負(fù)電荷轉(zhuǎn)為正電荷。DOX帶正電荷，說明DOX成功負(fù)載上MPRS。細(xì)胞膜表面為負(fù)電荷，而制備得到的納米載藥體系MPRS-DOX帶正電荷，這有利于細(xì)胞對納米載藥體系的攝取。

2.4 載藥性能分析

根據(jù)文獻(xiàn)報道，DOX和DOX-SH的紫外圖譜無明顯差別，這是因為巰醇基團(tuán)不會影響DOX的光譜特征，因此，利用阿霉素代替巰基化的阿霉素進(jìn)行紫外表征。圖4為所建立的阿霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線，制備不同濃度的阿霉素溶液，檢測其在480nm波長處的吸光度值，并擬合出線性回歸方程，該方程為：A=0.01883C+0.03262（r2=0.9997）(3)其中A為480nm波長處的吸光度值，C為所測溶液的濃度值，R2達(dá)到0.999，表明DOX濃度在5滋g/mL~40滋g/mL之間具有良好的線性關(guān)系。從圖5可以看到MPRS納米載體在200~800nm波長范圍內(nèi)無明顯的吸收峰，DOX在480nm處有一個寬的吸收峰，MPRS-DOX在500nm波長處有一個寬的吸收峰，MPRS-DOX的特征峰較DOX的特征峰紅移了20nm[35]，可以確定DOX已經(jīng)共價連接MPRS。為了優(yōu)化MPRS和DOX的反應(yīng)質(zhì)量比，進(jìn)行了MPRS-DOX載藥量的考察，結(jié)果如圖6a所示，隨著DOX質(zhì)量的增加，載藥量逐漸增大后趨于平緩，圖6b顯示載藥效率先增大后下降。當(dāng)MPRS和DOX的質(zhì)量比為1:1時，載藥效率最大（86.8%），載藥量為53.5%。因此，后續(xù)采用該質(zhì)量比制備MPRS-DOX。

2.5 MPRS-DOX的雙重響應(yīng)性分析

腫瘤細(xì)胞的環(huán)境為高濃度的GSH和pH呈弱酸性，而血液循環(huán)和體液中的GSH濃度低且pH呈中性，因此，利用這一區(qū)別研究MPRS-DOX在這些環(huán)境下釋放DOX的情況。結(jié)果見圖7，在10mmol/LGSH和pH=5.5的環(huán)境下，MPRS-DOX的DOX釋放量最大，在10mmol/LGSH和pH=7.4的環(huán)境下DOX的釋放量次之。在不含GSH以及2滋mol/LGSH的條件下，DOX的釋放量與pH有關(guān)，pH=5.5和pH=7.4相比，pH=5.5的環(huán)境下DOX釋放量較多。插圖為MPRS-DOX釋放實驗的上清液，c代表的是10mmol/LGSH和pH=5.5條件下反應(yīng)的上清液，溶液呈紅色，表明釋放的DOX含量較多；f代表的是10mmol/LGSH和pH=7.4條件下反應(yīng)的上清液，溶液為淡紅色，表明釋放DOX次之。a表示的是在PBS（pH=5.5）條件下反應(yīng)的上清液，溶液呈無色透明；b表示的是在2滋mol/LGSH和pH=5.5的條件下反應(yīng)的上清液，溶液也呈無色透明，表明釋放的DOX相對較少。d表示的是在PBS（pH=7.4）的條件下反應(yīng)的上清液，溶液為無色透明溶液；e代表的是在2滋mol/LGSH和pH=7.4的條件下反應(yīng)的上清液，溶液也為無色透明溶液，表明釋放的DOX少，幾乎不釋放。所以制備得到的MPRS-DOX納米載藥體系在模擬的腫瘤微環(huán)境下（10mmol/LGSH，pH=5.5）DOX釋放量最大，在模擬的血液循環(huán)和體液中DOX釋放量最少。

3 討論

腫瘤微環(huán)境響應(yīng)釋放藥物一直是腫瘤納米載藥體系的一個研究熱點(diǎn)，目前利用腫瘤細(xì)胞內(nèi)高濃度的GSH以及弱酸性條件釋放納米輸送系統(tǒng)中藥物的研究也取得了一定的研究進(jìn)展。但是和pH響應(yīng)的納米載藥體系相比，GSH和弱酸環(huán)境下響應(yīng)的納米載藥體系的研究仍然較少。本研究利用鉬酸銨和硫脲為原料，成功合成了MoS2納米片，然后利用硫辛酸聚乙二醇羧酸連接靶向分子RGD，再利用雙官能團(tuán)試劑SPDP共價鍵合DOX藥物分子，最終成功合成了一種GSH和pH雙重響應(yīng)的MoS2納米復(fù)合物MPRS-DOX，其粒徑大小適中，表面帶正電荷，有利于被細(xì)胞攝取。期間采用TEM、XPS和UV-vis等手段進(jìn)行表征。載藥結(jié)果表明MPRS具有高的載藥性能，釋藥實驗表明MPRS-DOX在模擬的腫瘤微環(huán)境下具有顯著增加的藥物釋放速率，在模擬的血液循環(huán)和體液微環(huán)境中藥物釋放量很少。以上結(jié)果表明MPRS-DOX具有良好的應(yīng)用前景，下一步可對其進(jìn)行體外以及體內(nèi)的抗腫瘤研究。

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