隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，生活方式的顯著改變，人們對(duì)養(yǎng)生保健的關(guān)注度逐漸增加，促使我國(guó)保健品市場(chǎng)迅速發(fā)展。原花青素和維生素E均具有抗氧化活性，有助于防止細(xì)胞老化、抵御自由基損害，還可幫助防止血液細(xì)胞受損，預(yù)防女性經(jīng)常性或自然流產(chǎn)，因此此類具有抗氧化功能的保健品成為市場(chǎng)新寵，此類產(chǎn)品的需求量和銷售額增長(zhǎng)速度也最快。

市場(chǎng)上此類保健品種類繁多，消費(fèi)者難辨優(yōu)劣，需要建立規(guī)范的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制。原花青素和維生素E是葡萄籽維生素E軟膠囊的兩個(gè)重要指標(biāo)，建立檢測(cè)該組分的方法對(duì)葡萄籽維生素E軟膠囊的質(zhì)量控制極其重要。原花青素是從植物中分離而來(lái)的多羥基黃烷一3一醇單元構(gòu)成的多酚化合物總稱，該化合物有較強(qiáng)的抗氧化和清除自由基的能力，葡萄籽是其重要來(lái)源，其次廣泛分布于葡萄、櫻桃、藍(lán)莓、李子中。目前，測(cè)定原花青素的方法主要有紫外或可見分光光度法、液相色譜法、薄層層析法、化學(xué)振蕩法等。其中分光光度法操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)成本相對(duì)較低，但樣品處理較為耗時(shí)，正丁醇一鹽酸比色法需要在沸水浴中顯色反應(yīng)40min，香草酸一鹽酸比色法需要避光反應(yīng)15h，實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)。

研究表明，維生素E含量測(cè)定主要分析方法有氣相色譜法、氣相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用法、高效液相色譜法、液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合同位素稀釋法、分光光度法、化學(xué)發(fā)光抑制法和熒光法等。在這些方法中，分光光度法和熒光法易受到處方中其他成分的干擾，化學(xué)發(fā)光法要求特殊儀器，液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜結(jié)合同位素稀釋法需使用自身同位素內(nèi)標(biāo)進(jìn)行定量；食品中的維生素E含量測(cè)定可參照國(guó)標(biāo)方法GB5009.82進(jìn)行，該法樣品前處理較繁瑣，增加了維生素E被氧化的風(fēng)險(xiǎn)；《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版采用氣相色譜法，檢測(cè)過(guò)程中還需添加內(nèi)標(biāo)計(jì)算校正因子，氣相色譜一質(zhì)譜法需要將氣相色譜儀與質(zhì)譜儀聯(lián)用，不僅樣品前處理復(fù)雜，且儀器費(fèi)用高，為生產(chǎn)企業(yè)帶來(lái)較高的檢測(cè)成本。

本文采用高效液相色譜法，可同時(shí)測(cè)定葡萄籽維生素E軟膠囊中原花青素和維生素E的含量，建立了一種操作簡(jiǎn)便、結(jié)果準(zhǔn)確、快速經(jīng)濟(jì)的含量測(cè)定方法，顯著縮短了檢驗(yàn)周期。

一、材料與方法

1、儀器、試劑與材料

Agilent1260型高效液相色譜儀（配備DAD紫外檢測(cè)器）：安捷倫科技有限公司；FA25型剪切分散乳化機(jī)：上海氟魯克流體機(jī)械制造有限公司；MSA225S一1CE—DU型電子天平：德國(guó)賽多利斯公司；ALl04型電子天平：瑞士梅特勒～托利多集團(tuán)；TD5102型電子天平：余姚市金諾天平儀器有限公司；UV一2450型紫外分光光度計(jì)：日本島津公司；DKZ一2型電熱恒溫振蕩水槽：杭州哈析儀器儀表有限公司；KQ一250DB型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；R206B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海申生科技有限公司；Milli—QA10型純水機(jī)：美國(guó)密理博中國(guó)有限公司。
原花青素標(biāo)準(zhǔn)品（98.0％）：上海哈靈生物科技有限公司；維生素E醋酸酯標(biāo)準(zhǔn)品（99.5％）：

國(guó)SupeIco公司；α-生育酚標(biāo)準(zhǔn)品（98.9％）：Dr．EhrenstomrGmbH公司；葡萄籽維生素E軟膠囊（批號(hào)20190115、20190116、20190117）：浙江康恩貝集團(tuán)醫(yī)療保健品有限公司；大豆油（批號(hào)JA2018/06/28/CN）：山東魯花集團(tuán)有限公司；蜂蠟：鄭州康源化工產(chǎn)品有限公司；甲醇（色譜純）：德國(guó)默克公司；無(wú)水乙醇（色譜純）：天津海普瑞精細(xì)化工有限公司；L（+）-抗壞血酸、氫氧化鉀、乙醚、石油醚（沸程30～60℃）、無(wú)水硫酸鈉（均為分析純）：永華化學(xué)科技有限公司。

2、方法

（1）樣品處理

精密稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號(hào)20190115）內(nèi)容物0.1g于25mL燒杯中，加入10mL甲醇，置于70℃水浴中加熱，振搖使內(nèi)容物分散，立即轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，再用10mL甲醇分三次洗滌燒杯，洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶，超聲提取20min，取出，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過(guò)濾，作為供試品溶液。將上述溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖（見圖1）。

（2）對(duì)照品溶液的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的原花青素對(duì)照品28.63mg和維生素E醋酸酯對(duì)照品12.42mg于同一個(gè)10mL容量瓶中，加適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到混合對(duì)照品貯備液。該貯備液避光保存。將該貯備液按一定比例稀釋后進(jìn)樣分析，其液相色譜圖見圖1。

（3）陰性對(duì)照溶液制備

按配方比例稱取大豆油、蜂蠟，混勻，將其加熱至70℃，熔化，攪拌均勻，制得陰性對(duì)照樣品。按“1.2.1”方法制備陰性對(duì)照溶液，進(jìn)樣并記錄液相色譜圖（見圖1），用于專屬性研究。

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