（4）液相色譜條件

色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，DikmaDiamons訂C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：甲醇；流速：1.0mL/min；檢測波長：284nm柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。

（5）標(biāo)準(zhǔn)溶液工作曲線

精密稱取105℃干燥至恒重的原花青素對照品28.63mg和維生素E醋酸酯對照品12.42mg于同一個10mL容量瓶中，加適量甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得到混合對照品貯備液。該貯備液避光保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)貯備液適量，逐級稀釋，配制成原花青素濃度為0.2806、0.8417、1.4028、1.9640、2.8057mg/mL，維生素E醋酸酯濃度為0.1236、0.3707、0.6179、0.8651、1.2358mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，DikmaDiamons訂C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：甲醇；流速：1.0mL/min；檢測波長：284nm柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。的色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，對照品濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，原花青素在0.2806～2.8057mg/mL濃度范圍內(nèi)，維生素E醋酸酯在0.1236～1.2358mg/L濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。二者的線性相關(guān)系數(shù)均為0.999以上，兩組分線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)如表1所示。

二、結(jié)果與分析

1、紫外最大吸收波長的選擇

將維生素E醋酸酯對照品溶液注入液相色譜儀（配備DAD紫外檢測器），開啟光譜采集，在主成分峰位置觀察最大吸收波長（見圖2）。結(jié)果表明：維生素E醋酸酯對照品的最大吸收波長與檢測波長284nm一致。

2、樣品處理時超聲時間的選擇

本試驗同時考察5個不同超聲提取時間，分別為5min，10min，20min，30min，40min，對原花青素及維生素E加標(biāo)樣品的提取效果，回收率隨時間變化關(guān)系如圖3。

結(jié)果顯示，在超聲提取5min情況下，樣品中原花青素和維生素E兩組分提取不完全，回收率較低；當(dāng)超聲時間延長至10min時，兩組分回收率有所增加，當(dāng)超聲提取時間延長至20min時，提取液中兩組分回收率均達(dá)到最高；超聲提取30min、40min后兩組分回收率基本穩(wěn)定且略有下降，因此實驗采用超聲提取20min的方法可有效提取葡萄籽維生素E軟膠囊中的原花青素和維生素E。

3、穩(wěn)定性考察

稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號20190115）內(nèi)容物約100mg，精密稱定。精密稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號20190115）內(nèi)容物0.1g于25mL燒杯中，加入10mL甲醇，置于70℃水浴中加熱，振搖使內(nèi)容物分散，立即轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，再用10mL甲醇分三次洗滌燒杯，洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶，超聲提取20min，取出，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。分別于制備后0，2，4，6，8，10，12h進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，計算得12h內(nèi)原花青素色譜峰面積RSD為0.3％，維生素E醋酸酯色譜峰面積RSD為0.1％，說明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定（見表2）。

4、重復(fù)性試驗

稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號20190115）內(nèi)容物6份，每份約100mg，精密稱定。精密稱取葡萄籽維生素E軟膠囊（批號20190115）內(nèi)容物0.1g于25mL燒杯中，加入10mL甲醇，置于70℃水浴中加熱，振搖使內(nèi)容物分散，立即轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，再用10mL甲醇分三次洗滌燒杯，洗滌液轉(zhuǎn)入容量瓶，超聲提取20min，取出，冷卻至室溫，用甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.22μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。計算得6份樣品原花青素與維生素E（以α-生育酚計）含量平均值分別為41.44g/1009（RSD為0.9％）、16.80g/100g（RSD為1.1％），表明本法重復(fù)性良好（見表3）。

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