建立簡便、快速測定面包、餅干、果味飲料及碳酸飲料中甜蜜素的高靈敏共振光散射新方法。在pH9.27Tris-HCl介質(zhì)中，甜蜜素與維多利亞藍B以靜電作用生成離子締合物，使共振光散射(resonancelightscat-tering，ＲLS)顯著增強，并在369nm處產(chǎn)生一個特征散射峰的新共振光散射光譜，甜蜜素的質(zhì)量濃度在0.004～0.4mg/L范圍內(nèi)與共振光散射增強強度(ΔIＲLS)呈線性關系，檢出限為0.0035mg/L，樣品的定量限分別為2.69mg/100g(面包和餅干)和29.2mg/L(飲料)，樣品的加標回收率和相對標準偏差(n=5)分別為97.5%～103%和1.8%～2.6%。該法簡便、快速，有很高的靈敏度，適用于實際樣品分析。

食品添加劑分為化學合成物質(zhì)和天然物質(zhì)兩大類，合成添加劑的毒性大于天然添加劑，尤其在添加劑本身質(zhì)量不純，混有有害物質(zhì)或超量使用時很容易對人體造成危害，而食品業(yè)使用的絕大多數(shù)添加劑是化學合成物質(zhì)，甜蜜素就是人工合成的一種甜味添加劑，它的甜度為蔗糖的30～50倍，現(xiàn)被廣泛用于糕點、飲料及其他食品中。由于過度使用甜蜜素，會對人體造成一定危害，如引起人體病變，出現(xiàn)畸形、癌癥、損壞腎功能等，因此，我國食品安全標準GB2760中對甜蜜素在食品中的使用范圍和使用限量作了明確規(guī)定，如面包和糕點中甜蜜素不得大于1.6g/kg，餅干和飲料中甜蜜素不得大于0.65g/kg，盡管如此，食品業(yè)的超限量、超范圍違規(guī)使用仍時有發(fā)生。目前，國內(nèi)外對食品中甜蜜素的研究方法主要有：高效液相色譜法、氣相色譜法、分光光度法、電化學法、液-質(zhì)聯(lián)用法及氣-質(zhì)聯(lián)用等。

我國食品安全國家標準GB1886.37—2015對甜蜜素的檢測方法為高氯酸滴定法，此法所用的部分試劑具有毒性或腐蝕性，所用的溶劑冰乙酸就是一種酸性腐蝕性物質(zhì)，有強烈的刺激性，對人體健康有一定危害；而滴定劑高氯酸不僅具有毒性、強的腐蝕性，還具有燃燒爆炸的危險性。而現(xiàn)在研究較多的高效液相色譜法、氣相色譜法及液-質(zhì)、氣質(zhì)聯(lián)用等對樣品的前處理工作較為繁瑣、尤其是凈化處理耗時較多。分光光度法雖操作簡便，有較高的準確度和精密度，但靈敏度和選擇性欠佳。

電化學法的條件要求較為苛刻?；诖?，研究簡便、快速、靈敏的甜蜜素檢測方法很有必要。本實驗采用高靈敏共振光散射技術，借維多利亞藍B與甜蜜素反應生成離子締合物，使顯著增強的共振光散射信號與甜蜜素的質(zhì)量濃度呈線性關系，建立了測定低脂、低蛋白類焙烤食品及飲料中甜味添加劑———甜蜜素的檢測方法，該方法目前尚未見文獻報道。

1材料與方法

1.1材料與試劑

甜蜜素(cyclamate)標準物質(zhì)：GBW(E)100066，99.3%，中國食品藥品檢定研究院；維多利亞藍B(victoriablueB)：99%，武漢易泰科技有限公司上海分公司；三羥甲基氨基甲烷(tris)：99.9%，上海吉至生化科技有限公司；鹽酸：AＲ級，重慶川東(化工)集團有限公司；樣品：面包(1#)、餅干(2#)、果味飲料(3#)、可樂型碳酸飲料(4#)，市售。甜蜜素標準溶液：貯備液為1.00×10－3mol/L水溶液，操作液由貯備液稀釋配制成1.00×10－5mol/L水溶液，冰箱4℃保存。維多利亞藍B溶液：貯備液為1.00×10－3mol/L水溶液，操作液由貯備液稀釋配制成1.00×10－4mol/L水溶液；Tris-HCl溶液：由Tris溶液和HCl溶液混合，用pH計測定，配成pH3.0～9.8的系列溶液。

1.2儀器與設備

F-2500型熒光分光光度計，日本日立公司；EL104型電子天平，上海精密儀器儀表有限公司；TD5A-WS型離心機，湖南湘儀離心機儀器有限公司；KQ-200VDE超聲波清洗機，昆山市超聲儀器有限公司；pHS-3C型精密酸度計，上海虹益儀器儀表有限公司。

1.3樣品處理

準確稱取已粉碎、混勻的低脂、低蛋白面包及餅干樣品各2～3g(精確至±0.0001g)，加適量水，攪拌、浸提10min，再超聲20min、離心(4500r/min)5～10min，上清液用水定容至100mL，得到待測液1#和2#。準確移取3#和4#飲料各10.00mL，在溫熱水浴中超聲20min，用水定容至500mL，得到待測液3#和4#。

1.4實驗方法

于10mL具塞比色管中，準確加入2.50mL維多利亞藍B操作液、1.50mLpH9.27Tris-HCl溶液及0.00～2.00mL甜蜜素標準操作液，用水稀釋至刻度，搖勻。靜置20min后，在熒光分光光度計上設λex=λem=220nm，狹縫5nm，掃描共振光散射光譜，在光譜曲線的特征峰369nm處測定體系溶液的共振光散射強度IＲLS及試劑空白的共振光散射強度I0，再由IＲLS-I0求得體系溶液的共振光散射增強強度ΔIＲLS。

2結果與討論

2.1甜蜜素與維多利亞藍B的ＲLS光譜特征

從圖1可知，單獨的甜蜜素標準操作液的ＲLS信號非常微弱，如曲線1所示。

單獨的維多利亞藍B操作液的ＲLS信號較弱，在400nm處有一最大散射峰，如曲線2所示。當在維多利亞藍B操作液中加入Tris-HCl(pH9.27)溶液后，ＲLS信號顯著增強，如曲線3所示。在曲線3溶液的基礎上加入0.00～2.00mL的甜蜜素標準操作液，從曲線3～7可知，光譜曲線在369nm處有一最大特征散射峰，此峰與單獨的維多利亞藍B相比較，紅移31nm。在體系溶液的特征峰處，一定濃度范圍的甜蜜素的質(zhì)量濃度(或物質(zhì)的量濃度)與體系溶液的共振光散射增強強度ΔIＲLS呈線性關系。故選擇369nm作為測定波長，用于甜蜜素的定量分析。

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