2.2適宜條件的選擇

2.2.1反應(yīng)酸度

取甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)操作液1.00mL?維多利亞藍(lán)B操作液2.00mL時(shí)，按1.4節(jié)方法考察1.00mLpH3.0~9.8范圍的Tris-HCl溶液對甜蜜素-維多利亞藍(lán)B體系ΔIRLS的影響，結(jié)果見圖2?從ΔIRLS-pH曲線可知，甜蜜素與維多利亞藍(lán)B反應(yīng)所需加入的Tris-HCl溶液的pH為9.27，當(dāng)加入的溶液的pH>9.27或<9.27時(shí)，體系的ΔIRLS均有不同程度降低，pH9.27時(shí)，體系的ΔIRLS較大，靈敏度較高?故實(shí)驗(yàn)選用pH9.27Tris-HCl溶液來控制該反應(yīng)的酸度?

2.2.2Tris-HCl溶液(pH9.27)的用量

取甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)操作液1.00mL?維多利亞藍(lán)B操作液2.00mL，按1.4節(jié)方法考察0.50~3.00mL范圍的pH9.27Tris-HCl溶液對甜蜜素-維多利亞藍(lán)B體系ΔIRLS的影響，結(jié)果見圖3?從ΔIRLS-VpH9.27曲線可知，甜蜜素與維多利亞藍(lán)B反應(yīng)所需加入Tris-HCl溶液(pH9.27)的最適用量為1.50mL，溶液用量大于或小于1.50mL，體系的ΔIRLS均有不同程度下降?故實(shí)驗(yàn)選擇體系靈敏度最大時(shí)的Tris-HCl(pH9.27)溶液用量為1.50mL?

2.2.3維多利亞藍(lán)B濃度取甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)操作液1.00mL?pH9.27Tris-HCl溶液1.50mL，按1.4節(jié)方法考察0.50~3.00mL范圍的維多利亞藍(lán)B操作液對甜蜜素-維多利亞藍(lán)B體系ΔIRLS的影響，結(jié)果見圖4?從ΔIRLS-c維多利亞藍(lán)B曲線可知，維多利亞藍(lán)B的最適濃度為2.50×10-5mol/L(即維多利亞藍(lán)B操作液的最適用量為2.50mL)，當(dāng)維多利亞藍(lán)B濃度大于或小于該值時(shí)，體系ΔIRLS均有不同程度下降，當(dāng)<2.50×10-5mol/L時(shí)，維多利亞藍(lán)B用量不夠，與甜蜜素反應(yīng)不完全;當(dāng)>2.50×10-5mol/L時(shí)，又因維多利亞藍(lán)B過量使自身聚集作用增強(qiáng)從而影響與甜蜜素間的反應(yīng)，靈敏度隨之下降?故實(shí)驗(yàn)選擇體系靈敏度最大時(shí)的維多利亞藍(lán)B溶液的濃度即2.50×10-5mol/L?

2.2.4試劑加入順序

取甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)操作液1.00mL?pH9.27Tris-HCl溶液1.50mL?維多利亞藍(lán)B操作液2.50mL，按1.4節(jié)方法考察這幾種物質(zhì)在加入順序不同時(shí)對體系ΔIRLS的影響?結(jié)果顯示，這幾種物質(zhì)加入的先后順序?qū)μ鹈鬯嘏c維多利亞藍(lán)B反應(yīng)的ΔIRLS有一定影響?當(dāng)加入順序?yàn)榫S多利亞藍(lán)B溶液?Tris-HCl溶液?甜蜜素溶液時(shí)，體系的ΔIRLS=1315(相對于其他加入順序，該順序的ΔIRLS最大)，靈敏度相對其他順序最高?故實(shí)驗(yàn)選擇此最佳順序加入各物質(zhì)?

2.2.5反應(yīng)時(shí)間及穩(wěn)定性

按上述選定的最佳條件，考察甜蜜素與維多利亞藍(lán)B的反應(yīng)在5~100min范圍內(nèi)對體系ΔIRLS的影響?結(jié)果顯示，反應(yīng)從開始至20min時(shí)，隨著反應(yīng)時(shí)間的增加，體系ΔIRLS逐漸增大，表明此時(shí)間段的反應(yīng)并未完全;當(dāng)反應(yīng)至20~70min范圍，隨著反應(yīng)時(shí)間的增加，體系的ΔIRLS不再增大，基本處于穩(wěn)定狀態(tài)，表明此時(shí)間段內(nèi)反應(yīng)已完全，并可穩(wěn)定50min;當(dāng)反分析與檢測2020年第46卷第5期(總第401期)273應(yīng)至70min后，體系的ΔIRLS隨時(shí)間的增加而逐漸下降，表明生成的新物質(zhì)在此段時(shí)間已不再穩(wěn)定?故測定時(shí)間選在新物質(zhì)穩(wěn)定時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行?

2.3工作曲線及相關(guān)參數(shù)

按1.4節(jié)的實(shí)驗(yàn)方法，配制0.00?0.50?1.00?1.50?2.00mL甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)操作液的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，掃描RLS光譜，作甜蜜素的標(biāo)準(zhǔn)曲線，見圖5?該方法的一元線性回歸方程為ΔIRLS=14.20+7038ρ，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，線性范圍為0.004~0.4mg/L，檢出限為0.0035mg/L，面包和餅干的定量限為2.69mg/100g，飲料的定量限為29.2mg/L?

2.4離子強(qiáng)度的影響
 

室溫下，考察了不同質(zhì)量濃度的NaCl溶液對體系ΔIRLS的影響?結(jié)果顯示，7400倍的NaCl溶液對甜蜜素的測定無影響?故離子強(qiáng)度不影響甜蜜素的測定?

2.5共存物質(zhì)的影響

室溫下，考察了某些外來物質(zhì)對測定0.201mg/L甜蜜素的影響?結(jié)果顯示，相對誤差≤±5%時(shí)，500倍的Ca2+?Cu2+?K+?Mn2+?Mg2+?Sr2+?NO-3?I-?L-組氨酸?L-谷氨酸?L-丙氨酸?L-色氨酸?葡萄糖?麥芽糖?蔗糖?檸檬酸三鈉，200倍的L-賴氨酸?L-白氨酸?L-亮氨酸?甘氨酸?L-異亮氨酸?乳糖?NH+4?Fe2+?C2O2-4?SO2-3?SO2-4?S2O2-3，50倍的檸檬酸?蘋果酸?山梨酸?酒石酸?尿素?淀粉?維生素B12?安賽蜜?Sn2+?Fe3+?Ba2+?Al3+?Pb2+?CO2-3?Ac-?PO3-4等不干擾測定?故本法有很好的選擇性?

2.6樣品分析
 

準(zhǔn)確移取各待測液0.20mL代替1.4節(jié)實(shí)驗(yàn)方法中的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)操作液，加入最佳條件下的維多利亞藍(lán)B和Tris-HCl溶液，用水定容至10mL?按實(shí)驗(yàn)方法測定面包?餅干及飲料中的甜蜜素含量，并與GB1886.37—2015比較?從表1數(shù)據(jù)可知，測定結(jié)果與GB法基本一致，統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果表明新方法具有可靠性?加標(biāo)回收試驗(yàn):準(zhǔn)確稱取1#和2#已粉碎?混勻的面包?餅干樣品各3份，每份2~3g(精確至±0.0001g)，分別置于小燒杯中;準(zhǔn)確移取3#和4#飲料各3份，每份10.00mL，分別置于小燒杯中?在1#~4#的小燒杯樣液中，分別往同一樣液的3份燒杯中加入0.50?1.50和3.00mL甜蜜素貯備液，后續(xù)操作按1.3節(jié)樣品處理方法進(jìn)行，制得各待測液?取各待測液0.20mL，按實(shí)驗(yàn)方法測定各待測液中甜蜜素的含量(n=5)，求回收率，以判斷方法的準(zhǔn)確度?結(jié)果見表2?表2中加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表明新方法有較高的準(zhǔn)確度和精密度?
 

結(jié)論
 

維多利亞藍(lán)B-甜蜜素體系用于食品中甜蜜素的測定，該方法具有操作簡單?靈敏度高?選擇性好等優(yōu)點(diǎn)，準(zhǔn)確度和精密度滿足定量分析要求，并有較寬的線性范圍?測定結(jié)果的準(zhǔn)確度與國標(biāo)法相比無顯著性差異?本方法適用于焙烤食品中低脂低蛋白的面包?餅干及飲料中甜蜜素的快速測定?

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