維生素B12是一種人體必需的水溶性維生素，對(duì)人體健康十分重要。在許多營養(yǎng)強(qiáng)化食品、保健品中，維生素B12被作為一種食品添加劑使用，為了保證食品安全，近年來出現(xiàn)了多樣化的維生素B12檢測(cè)方法，各有優(yōu)缺點(diǎn)，相比較而言，高液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法最佳。

一、維生素B12與人體健康

維生素B12是一類含有類似氰鉆氨素維生素活性物質(zhì)的總稱，又稱氰鈷氨素，是目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)結(jié)構(gòu)最大、最復(fù)雜，且唯一含有金屬離子的水溶性維生素分子。維生素B12在人體血清中的含量很低，只有100-300μg/mL，普通成人每天的攝入量也只需要3μg。

維生素B12在人體中的作用是不容忽視的，主要參與制造骨髓紅細(xì)胞，能夠促進(jìn)紅細(xì)胞的發(fā)育和成熟，使肌體處于正常的造血狀態(tài)，防止惡性貧血造成大腦神經(jīng)受到破壞，以維護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)健康。它還參與脂肪、碳水化合物的代謝、促進(jìn)脫氧核酸劑蛋白質(zhì)的合成，可有效預(yù)防惡性貧血、老年癡呆、抑郁癥等疾病。

二、維生素B12的檢測(cè)方法

微生物法。微生物法就是利用萊士曼氏乳酸桿菌對(duì)維生素B12的特異性和靈敏性，在含有除了維生素B12以外的營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基中添加標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液以及未知液，并通過測(cè)定添加了標(biāo)準(zhǔn)曲線工作液以及未知液的培養(yǎng)基中微生物生長產(chǎn)生的透光率來確定未知液的維生素B12的含量。國標(biāo)GB5413.14-20100就是運(yùn)用微生物法檢測(cè)嬰幼兒食品及乳品中的維生素B12。雖然微生物法成本低、可操作性強(qiáng)、靈敏度高，適合于長期穩(wěn)定、大批量的試樣測(cè)定分析，但是此方法步驟繁瑣、耗費(fèi)時(shí)間長，并且成本也不低。當(dāng)樣品含有維生素B12類似物時(shí)會(huì)使結(jié)果偏高，另外當(dāng)待測(cè)樣品中含有抗生素時(shí)，測(cè)定結(jié)果也會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤或偏低。

試劑盒微生物法。試劑盒微生物法是對(duì)傳統(tǒng)微生物法的優(yōu)化改進(jìn)，是利用成品的維生素B12試劑盒，使用酶標(biāo)儀測(cè)定渾濁度，并根據(jù)相關(guān)軟件處理數(shù)據(jù)獲得未知樣品中維生素B12的含量。這個(gè)方法檢測(cè)準(zhǔn)確率高，標(biāo)準(zhǔn)參考樣品的回收率可達(dá)95％一105％，選擇性好、靈敏度高、實(shí)用性強(qiáng)。但是微生物法費(fèi)用昂貴，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性依然通常需要儀器分析法進(jìn)一步驗(yàn)證。

液相色譜法。利用液相色譜法檢測(cè)維生素B12，首先對(duì)樣品進(jìn)行提取凈化富集，再通過液相色譜分離，利用μV檢測(cè)器或PDA檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于含有淀粉和蛋白質(zhì)的食品，需要沉淀蛋白，或者用蛋白酶、淀粉酶水解蛋白和淀粉，處理起來容易破壞維生素B12，使樣品回收率降低。其中沉淀蛋白的方法有三氯甲烷、三氯乙酸、乙腈、等電點(diǎn)沉淀蛋白等方法，另外對(duì)于基質(zhì)復(fù)雜的食品，檢測(cè)結(jié)果容易被其他物質(zhì)干擾，不能滿足檢測(cè)要求，并且儀器檢出限比較高，不能用于食品中的微量或痕量維生素B12的定量檢測(cè)。

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法與高效液相色譜法相似，不同點(diǎn)是儀器檢測(cè)器是質(zhì)譜儀，通過分離不同質(zhì)荷比，檢測(cè)維生素B12的含量。該方法檢出限低、分析速度快、靈敏度高、定量準(zhǔn)確，不容易受其他物質(zhì)干擾，缺點(diǎn)是檢驗(yàn)成本高，不利于大批量的檢測(cè)。

原子吸收光譜法。原子吸收光譜法是通過測(cè)定氰鈷氨素中鈷的含量，來確定維生素B12的含量，但是由于沒有進(jìn)行有效分離，檢測(cè)結(jié)果較同樣容易受到樣品中無機(jī)鈷元素的影響而造成測(cè)定結(jié)果比實(shí)際值高。

另外還有紫外可見光分光度法，其只適用比較簡(jiǎn)單的樣品，不能用于食品中的微量或痕量維生B12的測(cè)定。表面等離子共振(sμrfaceplasmonresonance，SPR)技術(shù)，雖然前處理簡(jiǎn)單，同時(shí)也縮短了測(cè)量時(shí)間，是一種高效便捷的測(cè)量方法，但前處理中需要?jiǎng)《疚锴杌飦磲尫疟镜祝入y采購又十分危險(xiǎn)。

通過對(duì)比各種儀器方法的優(yōu)缺點(diǎn)可以發(fā)現(xiàn)，液相色譜質(zhì)譜法無論在定性方面還是定量方面，都具備優(yōu)勢(shì)。但它也不是十分完美，在國家科技水平以及人民生活水平還較低的情況下，對(duì)于這種成本較高的方法應(yīng)用得還較少。隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，高效液相質(zhì)譜聯(lián)用法將更加廣泛地應(yīng)用到食品檢測(cè)中。

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