1.3.3　 發(fā)酵棉籽粕的應(yīng)用
　 　 
孫煥林研究了枯草芽孢桿菌發(fā)酵棉籽粕對黃羽肉雞生長性能、免疫性能和肉品質(zhì)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加2％、5％、8％的發(fā)酵棉籽粕，與玉米－豆粕型基礎(chǔ)飼糧相比，粗蛋白質(zhì)、鈣、磷的表觀消化率明顯提高，8％發(fā)酵棉籽粕組的以上各營養(yǎng)物質(zhì)代謝率最高；5％發(fā)酵棉籽粕組的平均日增重和8％發(fā)酵棉籽粕組的飼料報酬最高；8％發(fā)酵棉籽粕組的肉雞屠宰率最高。 

王朝陽等研究了飼糧中添加2％、5％和8％的枯草芽孢桿菌發(fā)酵棉籽粕對黃羽肉雞屠宰性能及肉品質(zhì)的影響，結(jié)果表明，各試驗組肉雞屠宰率、半凈膛率、全凈膛率、胸肌率、腿肌率和肌肉pH45min均顯著高于對照組(飼喂玉米－豆粕－棉籽粕飼糧)，8％發(fā)酵棉籽粕組肉雞屠宰率最高；各試驗組肉雞胸肌脂肪含量提高，5％和8％發(fā)酵棉籽粕組顯著高于對照組；各試驗組腿肌脂肪含量均顯著高于對照組；由此得出，飼糧中添加2％～8％枯草芽孢桿菌發(fā)酵棉籽粕能不同程度提高黃羽肉雞屠宰率、全凈膛率、半凈膛率等屠宰性能，并且隨發(fā)酵棉籽粕添加量的提高，屠宰性能和肉品質(zhì)的提高效果越好。Wang等研究表明，肉雞前期飼糧中添加8.9％、后期飼糧中添加7.5％的發(fā)酵棉籽粕替代豆粕對生長性能無顯著影響，但是前期飼糧中添加17.9％、后期飼糧中添加15.1％的發(fā)酵棉籽粕對肉雞生長性能產(chǎn)生一定負(fù)面影響。魏蓮清等研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加6％發(fā)酵棉籽粕可顯著降低白羽肉雞血清葡萄糖、甘油三酯和總膽固醇含量，并降低了42日齡肉雞皮下脂肪厚度。此外，發(fā)酵棉籽粕調(diào)節(jié)脂
代謝的作用效果與發(fā)酵棉籽粕添加量有關(guān)，因為發(fā)酵棉籽粕可調(diào)節(jié)脂肪氧化和脂蛋白酯酶等脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)。 

羅遠(yuǎn)琴等研究了富含棉籽肽的發(fā)酵棉籽粕(枯草芽孢桿菌和扣囊復(fù)膜酵母混菌發(fā)酵)對愛拔益加(AA)肉雞生長性能和免疫功能的影響，對照組添加6％棉籽粕，試驗組分別添加4％、6％、8％富含棉籽肽的發(fā)酵棉籽粕，結(jié)果表明，肉雞飼糧中添加一定比例的富含棉籽肽的發(fā)酵棉籽粕可在一定程度上提高肉雞的生長性能、免疫器官指數(shù)、巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)和免疫性能，其中6％添加組(飼糧棉籽肽含量12.20g/kg)效果最優(yōu)，而8％添加組(飼糧棉籽肽含量16.27g/kg)對肉雞免疫性能有一定抑制作用。魏蓮清等研究了飼糧中添加3％、6％和9％用熱帶假絲酵母發(fā)酵制得的酵棉籽粕對白羽肉雞蛋白質(zhì)代謝的影響，發(fā)現(xiàn)其可通過提高肉雞養(yǎng)分表觀消化率和表觀代謝能，增加蛋白質(zhì)代謝相關(guān)酶活性和激素含量，促進(jìn)機(jī)體的蛋白質(zhì)沉積，且6％添加量效果最優(yōu)，生長前期添加效果優(yōu)于生長后期。

1.3.4　 其他發(fā)酵雜粕等的應(yīng)用
　 　 
李百安等研究了花生粕和發(fā)酵花生粕替代基礎(chǔ)飼料中魚粉對羅非魚生長性能、肌肉常規(guī)成分、氨基酸組成和消化道蛋白酶活性的影響，結(jié)果表明，在魚粉含量為6％的羅非魚飼料中，用花生粕替代1/3魚粉且發(fā)酵花生粕替代2/3魚粉時，羅非魚的增重率、飼料系數(shù)、腸蛋白酶活性無顯著變化；用花生粕替代1/3魚粉且發(fā)酵花生粕替代全部魚粉時，對羅非魚胃蛋白酶活性無顯著影響；以花生粕、發(fā)酵花生粕替代不同比例魚粉后，對羅非魚肌肉水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分和總氨基酸含量均無顯著影響；在該試驗條件下，花生粕和發(fā)酵花生粕可分別替代魚粉用量的1/3和2/3。宋鵬等研究了5％、10％和15％發(fā)酵芝麻粕(替代11.8％、23.5％和35.1％菜籽粕蛋白)對草魚生長性能、腸道形態(tài)和微生物及小肽轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因表達(dá)的影響，結(jié)果表明，使用發(fā)酵芝麻粕替代草魚飼料中11.8％～23.5％的菜籽粕蛋白時，魚體的生長性能和飼料利用率均有上升趨勢，同時可改善草魚的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)，優(yōu)化腸道菌群組成，并上調(diào)腸道中小肽轉(zhuǎn)運(yùn)相關(guān)基因的表達(dá)。
　 　 
李冰等研究獲得棕櫚仁渣最佳發(fā)酵工藝，在此工藝條件下，發(fā)酵產(chǎn)物的含水量及粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣和磷含量分別為16.20％、7.20％、7.61％、26.20％、5.20％、0.38％和0.26％，總菌落數(shù)為9.0×107CFu/g；將此發(fā)酵產(chǎn)物替代部分傳統(tǒng)粗飼料中的玉米秸稈飼喂肉牛，肉牛健康狀況良好，飼料消化吸收利用率高，育肥效果顯著。
　 　 
易春霞等研究了以玉米黃粉和玉米胚芽粕為底物的發(fā)酵飼料替代10％基礎(chǔ)飼糧對大午金鳳蛋雞生長性能、蛋品質(zhì)和抗氧化能力的影響，結(jié)果表明，發(fā)酵飼料可溶性蛋白含量由發(fā)酵前的42.06mg/g增加到118.32mg/g，總必需氨基酸含量增加了25.76％；與對照組相比，試驗組前期平均產(chǎn)蛋率顯著增加，破損蛋率顯著降低，血清丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量和過氧化氫酶(catalase，cat)活性顯著降低；試驗組后期平均產(chǎn)蛋率增加了3.85％，蛋白高度和哈氏單位均顯著提高，蛋殼厚度顯著下降，血清cat、sod和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase，gsh?px)活性均顯著增加。綜上所述，蛋雞飼糧中添加10％發(fā)酵飼料，提高了大午金鳳蛋雞生長性能和蛋品質(zhì)，并達(dá)到了改善血清和肝臟抗氧化指標(biāo)的效果。

1.4　 發(fā)酵飼料在替代抗生素上的應(yīng)用
　 　 
隨著人們生活水平的提高，消費(fèi)者對畜產(chǎn)品品質(zhì)的要求更加嚴(yán)格，安全、綠色、無抗、好吃等成為產(chǎn)品品質(zhì)的新考核指標(biāo)。許多研究表明，發(fā)酵飼料按一定比例添加到動物飼糧中，可保證飼料原料的綠色安全，同時提高肉品質(zhì)，起到與抗生素類似作用，是較好的可替代抗生素使用的新型飼料。但發(fā)酵飼料在飼用抗生素替代上的研究相對較少且不深入，僅呂航等綜述了發(fā)酵飼料在豬生產(chǎn)上的替抗研究以及相關(guān)機(jī)理。
　 　 
劉志云等研究發(fā)現(xiàn)，與未發(fā)酵組相比，乳酸菌和地衣芽孢桿菌混合發(fā)酵的玉米－豆粕型全價固體料可顯著提高生長豬的平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化效率，與抗生素組(40mg/kg桿菌肽鋅)相比，生長性能無顯著差異。這表明發(fā)酵后的全價料具有減少或替代飼用抗生素使用的能力。王玉田等研究了用屎腸球菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌和酵母菌等復(fù)合益生菌發(fā)酵玉米－豆粕為主的復(fù)合發(fā)酵飼料對“杜×長×大”三元雜交斷奶仔豬生產(chǎn)性能、腹瀉率和血液指標(biāo)的影響，結(jié)果表明，用5％或10％的發(fā)酵飼料分別替代30或60mg/kg金霉素，斷奶仔豬的平均日增重均顯著高于對照組，腹瀉率和血清尿素氮含量均顯著低于對照組；可見2組效果均好于對照組，而且用10％的發(fā)酵飼料替代60mg/kg金霉素組效果最佳。 

劉江英等研究了玉米、麩皮、豆粕復(fù)合發(fā)酵飼料對肉雞抗沙門氏菌感染的影響，設(shè)計了對照組、基礎(chǔ)飼糧＋10％未發(fā)酵飼料組、抗生素組(20mg/kg硫酸粘桿菌素)和發(fā)酵組(分別用5％、10％發(fā)酵飼料替代基礎(chǔ)飼糧中的未發(fā)酵飼料)，結(jié)果表明，沙門氏菌感染導(dǎo)致肉雞血清促炎因子［白細(xì)胞介素－1β(il?1β)、白細(xì)胞介素－6(il?6)、腫壞死因子－α(tnF?α)］、脂多糖(lipopolysaccharide，lps)、d－乳酸(d?la)含量顯著上升，toll樣受體4(toll?liｋereceptor4，tlr4)信號通路中的關(guān)鍵信號分子［tlr4、髓樣分化因子88(myd88)、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(traF6)、核因子－κB(nF?κB)］基因表達(dá)顯著上調(diào)，而抗生素組及5％、10％發(fā)酵組相關(guān)指標(biāo)均有不同程度地改善，說明多菌種聯(lián)合發(fā)酵飼料能夠通過抑制由沙門氏菌感染導(dǎo)致的tlr4?myd88?traF6?nF?κB信號通路的激活，降低促炎因子il?1β、il?6、tnF?α基因表達(dá)，從而減緩沙門氏菌感染導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)和腸道屏障受損，其效果接近20mg/kg硫酸黏桿菌素。 

李玉俠等研究了生物發(fā)酵飼料在斷奶仔豬上的應(yīng)用效果，對照組為玉米－豆粕型基礎(chǔ)飼糧，發(fā)酵飼料組添加20％發(fā)酵飼料，抗生素組添加20mg/kg恩拉霉素，結(jié)果表明，發(fā)酵飼料組豬的平均日增重和粗蛋白質(zhì)表觀消化率顯著高于對照組，料重比和腹瀉率低于對照組；發(fā)酵飼料組血清尿素氮含量顯著高于對照組，血清中igg、免疫球蛋白m(igm)、球蛋白含量顯著高于對照組，表明發(fā)酵飼料在一定程度上可以增強(qiáng)豬的分解代謝能力，提高豬的免疫能力。

2　 微生物飼料添加劑及其替代和減少抗生素使用技術(shù)進(jìn)展

2.1　 微生物飼料添加劑的定義和分類
　 　 
微生物飼料添加劑也稱飼用益生菌、微生態(tài)飼料添加劑，是用已知的有益微生物經(jīng)培養(yǎng)、發(fā)酵、干燥等特殊工藝制成的對動物安全有益的活菌制劑。微生物飼料添加劑中活的微生物菌體進(jìn)入動物腸道后可改善微生態(tài)平衡，在其生長、繁殖過程中產(chǎn)生消化酶或其他酶、維生素、多肽、氨基酸、脂肪酸、未知因子等，從而達(dá)到益生目的。隨著微生物領(lǐng)域研究的快速發(fā)展和微生態(tài)制劑制備工藝的進(jìn)步，目前可用于飼用益生菌的微生物種類已有多種，主要包括乳酸菌、芽孢桿菌、酵母菌、放線菌和光和細(xì)菌等幾大類。 

美國食品藥品管理局(Fda)和美國飼料管理協(xié)會(AAFco)于1989年公布了42種“可直接飼喂的益生菌菌種”，其中30種屬于乳酸菌。我國農(nóng)業(yè)部第2045號公告頒布的《飼料添加劑品種目錄(2013)》中，允許使用的微生物飼料添加劑有34種，其中22種屬于乳酸菌。此外，在國內(nèi)外還陸續(xù)有新的菌種在飼料中研究和應(yīng)用，如丁酸梭菌(clostridiumBu?tyicum)、芽孢乳桿菌(lactoBacillussporogens)、解淀粉芽孢桿菌(BacillusamyloliｑueFaciens)等。
　 　 
按照劑型，飼用益生菌分為水溶液劑型和固體劑型。其中，前者易利用水溶液中的營養(yǎng)物質(zhì)繼續(xù)生長代謝，因此，菌體處于不穩(wěn)定狀態(tài)，保存期較短；后者是在添加保護(hù)劑和載體等前提下，利用低溫?zé)犸L(fēng)、冷凍等干燥手段，將活的菌體進(jìn)行慢速干燥，使其處于穩(wěn)定的干燥休眠狀態(tài)，再利用可飼用的物質(zhì)作為填充物混合均勻，制成較為穩(wěn)定的粉劑或顆粒型微生物飼料添加劑。按照菌種組成，飼用益生菌劃分為單一型微生態(tài)制劑和復(fù)合型微生態(tài)制劑；前者是以單獨(dú)菌種為主要成分，輔以淀粉、無機(jī)鹽等載體，發(fā)揮單一菌體的生理活性；后者是由同一或不同菌株益生菌及其代謝產(chǎn)物和生長促進(jìn)物質(zhì)組成，協(xié)同發(fā)揮生理作用。

2.2　 飼用益生菌優(yōu)良菌株安全性和有效性的評價技術(shù)
　 　 
目前，益生菌菌株的評價主要包括安全性和有效性2個方面，而安全性和有效性評價又分為體內(nèi)和體外的評價。國內(nèi)外對于飼用微生物的安全性和有效性的評價技術(shù)體系還不健全，所用指標(biāo)及評價方法很不一致，對于不同指標(biāo)的可靠性和評價技術(shù)缺乏深入系統(tǒng)的研究，評價技術(shù)沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。此外，從實際應(yīng)用出發(fā)，如何選擇科學(xué)的評價技術(shù)指標(biāo)并建立評價技術(shù)規(guī)程仍是國內(nèi)外有待研究的課題。比如，如何科學(xué)建立各項體內(nèi)和體外評價指標(biāo)的遞進(jìn)關(guān)系問題，以及如何確立體外評價和體內(nèi)評價的對應(yīng)關(guān)系問題等。研究解決這些問題是建立科學(xué)和行之有效的評價技術(shù)規(guī)程的關(guān)鍵，也是促進(jìn)益生菌行業(yè)持續(xù)發(fā)展的
基礎(chǔ)。
　 　 
綜合近20年來益生菌益生評價的研究報道，及歐洲食品安全委員會(eFsa)、歐洲動物營養(yǎng)科學(xué)委員會(scan)、歐洲委員會(eu)和聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織(Fao/Ｗho)等關(guān)于益生菌益生評價的規(guī)程和指南性文件，目前已報道的體外安全性評價指標(biāo)，包括溶血性、膽汁鹽水解酶活性、毒力因子、抗生素抗性、產(chǎn)有毒代謝產(chǎn)物、對胃黏膜蛋白的分解能力、血小板凝集、明膠液化、尿素降解等。已報道的體外有效性評價指標(biāo)，包括耐酸、耐膽鹽、耐人工胃腸液、黏附特性、抑制有害菌活性、抗病毒活性、細(xì)胞表面特性、免疫調(diào)節(jié)、抗癌和抗誘變特性、生物膜的形成、蛋白水解酶和纖維素酶等活性和產(chǎn)胞外多糖等。對這些指標(biāo)的檢測意義、檢測方法和生產(chǎn)實際中可以滿足的檢測條件進(jìn)行詳細(xì)分析，筆者認(rèn)為體外安全性評價指標(biāo)中，溶血性、毒力因子、抗生素抗性和產(chǎn)有毒代謝產(chǎn)物等4個指標(biāo)適合形成標(biāo)準(zhǔn)化、可操作的評價指標(biāo)；體外有效性評價指標(biāo)中，耐人工胃腸液、黏附性、抑菌活性等3個指標(biāo)適合形成標(biāo)準(zhǔn)化、可操作的評價指標(biāo)。
　 　 
我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部于2015年10月頒布實施了國家標(biāo)準(zhǔn)化指導(dǎo)性技術(shù)文件《飼料原料和飼料添加劑畜禽靶動物有效性評價試驗技術(shù)指南》(gB/Ｚ31813—2015)。然而，國內(nèi)外針對飼用益生菌體內(nèi)有效性評價的相關(guān)體系與標(biāo)準(zhǔn)較少。通過大量文獻(xiàn)調(diào)研，目前研究者對飼用微生物的體內(nèi)有效性評價指標(biāo)主要有：生長性能、蛋雞生產(chǎn)性能、腹瀉率、對各腸段及糞便pH與微生物菌群的影響、對血液生化指標(biāo)的影響、對免疫能力的影響、對小腸絨毛發(fā)育和養(yǎng)分吸收的影響、抗病原菌感染 、對肉品質(zhì)的影響和對蛋品質(zhì)的影響等。

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相關(guān)鏈接：氧化，丙二醛，肽鋅