北方偉業(yè)計量集團有限公司
甜瓜是新疆的主要經(jīng)濟支柱產(chǎn)業(yè),但是采收季節(jié)正值高溫,再加上果實含有較大的水分,糖含量高,生理代謝旺盛,在貯藏和運輸期間容易受病原菌的浸染而發(fā)生果實腐爛變質(zhì),造成大量經(jīng)濟損失。采后果實腐爛的主要病害是由Fusarium.sp引起的白霉病和Alternariaalternata引起的黑斑病,目前仍因化學(xué)殺菌劑操作方便、使用簡單、見效快被高效普遍利用,但是長時間施藥混亂、大量重復(fù)不合理使用不僅會使病菌產(chǎn)生耐藥性,而且人體健康和環(huán)境存在潛在的威脅甚至致癌、致畸,因此,尋求高效、低毒、無公害的抑菌劑代替或減少化學(xué)農(nóng)藥是急需解決的問題。
食品添加劑是食品中的重要部分,具有抗菌性強、低毒(無毒)對環(huán)境友好、不易產(chǎn)生抗藥性等諸多優(yōu)點,在食品加工中起到了舉重?zé)o輕的作用,對提高食品的質(zhì)量和貯運過程中微生物繁殖引起的腐敗變質(zhì)起到雙重作用。農(nóng)業(yè)部提出的到2020年化學(xué)藥劑使用量“零增長”計劃和國家重點研發(fā)計劃“化學(xué)肥料和農(nóng)藥減施增效綜合技術(shù)研發(fā)”專項,既符合人們對綠色健康食品的需求,而且為未來農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供了保障,給無毒、無害的防腐劑帶來了良好的發(fā)展機遇。本文以農(nóng)藥殺菌劑億度勇為對照,測定納他霉素、脫氫醋酸鈉、次氯酸鈣對甜瓜采后病原真菌菌絲生長繁殖的抑菌圈大小,分析其抑菌率和抑菌毒力,從而為甜瓜采后病害控制提供科學(xué)理論依據(jù)。
一、材料與方法
1、試驗材料
(1)供試藥劑
脫氫醋酸鈉(有效成分99%,山東西亞化學(xué)股份有限公司)、次氯酸鈣(漂白粉,有效成分65%~75%,SangonBiotech)、納他霉素(有效成分95%,Sigma)、億度勇(總有效成分53%,喹啉銅35%,噻菌靈18%,可濕性粉劑,臺灣光華化學(xué)股份有限公司)。
(2)供試菌株
鐮刀菌、鏈格孢2種供試菌株由新疆維吾爾自治區(qū)葡萄瓜果研究所甜瓜貯藏與運輸課題自行分離獲得。按照常規(guī)方法保存于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基(廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)斜面試管中于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>
2、試驗方法
(1)菌餅的制備
取滅菌的培養(yǎng)皿,每皿倒入15mL經(jīng)121℃高溫高壓滅菌20min的PDA培養(yǎng)基制成平板。
用接種針挑取供試菌株單個孢子接種到PDA平板中央,置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待菌落布滿平板后,用滅菌的打孔器直徑(10mm)在菌落上打取菌餅用于生物測定。
(2)抑菌作用的測定
采用菌絲生長速率法,將3種食品添加劑用無菌水溶解后添加至熔化后冷卻至約55℃的PDA培養(yǎng)基中,充分搖勻,倒入無菌培養(yǎng)皿中制成含藥平板(每皿約15mL),終濃度如下表。測定脫氫醋酸鈉、納他霉素、次氯酸鈣對供試病原真菌的抑制作用。
用接種針挑取菌餅(10mm)接種于含有不同終濃度的食品添加劑的PDA平板中央,不含防腐劑的PDA平板為陰性對照,含有億度勇的作為陽性對照,每個處理重復(fù)3次,每皿一塊菌餅,菌絲面朝下。將接種后的培養(yǎng)皿用保鮮袋密封保濕,然后放入28℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),3d后用十字交叉法測定各培養(yǎng)皿中菌落直徑,計算菌落純生長量及抑制率,計算公式如下:
菌落純生長量=菌落直徑—菌餅直徑(10mm)
抑菌率(%)=(對照菌落純生長量—處理菌落純生長量)/對照菌落純生長量×100%
(3)數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
采用spss17.0進行數(shù)據(jù)處理分析,利用Probit回歸模型以各食品添加劑濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)(X),菌絲生長抑制率對應(yīng)的幾率值為縱坐標(biāo)(Y),作線性回歸分析,得出不同食品添加劑對甜瓜采后病害的抑制中濃度EC50值和相關(guān)系數(shù)R2。
二、結(jié)果與分析
1、那他霉素對甜瓜采后病害病菌的抑制效果由圖1可知,那他霉素對甜瓜采后病原真菌鐮刀菌、鏈格孢的生長抑制作用都較為明顯,隨著濃度的增加其作用效果增強。濃度為50µg/mL時,對鐮刀菌的抑制率為77.27%,對鏈格孢的抑制率為58.18%;200µg/mL時對鐮刀菌的抑制率達到100%,但是對鏈格孢的抑制率能達到78.18%。由此可知,那他霉素對鐮刀菌和鏈格孢都有較好的抑制作用,且對鐮刀菌的抑制效果比對鏈格孢的顯著。
2、脫氫醋酸鈉對甜瓜采后病害病菌的抑制效果
由圖2可知,脫氫醋酸鈉對鐮刀菌的抑制作用較強,濃度為50µg/mL時就能夠完全抑制菌絲的生長;對鏈格孢的抑制作用稍弱,抑制率達到67.82%,500µg/mL時能夠抑制鏈格孢菌絲的生長率為94.55%,由此說明,脫氫醋酸鈉對鐮刀菌和鏈格孢菌絲的生長都有較好的抑制作用。
3、次氯酸鈣對甜瓜采后病害病菌的抑制效果
由圖3可知,次氯酸鈣對甜瓜采后病原菌的抑制作用較弱,當(dāng)濃度達到200µg/mL時對鐮刀菌菌絲生長的抑制率只有41.56%,對鏈格孢菌絲生長抑制率都在17.27%以下,由此可知,次氯酸鈣對鐮刀菌和鏈格孢的菌絲生長抑制效果都不明顯,不能起到更好的抑菌作用。
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