一、引言

隨著我國國人健康意識(shí)的不斷提高，保健品需求量持續(xù)上升。由于保健品行業(yè)進(jìn)入門檻不高，導(dǎo)致我國保健品行業(yè)一直以來就存在的亂象和問題，如虛假宣傳、以次充好等，因此鑒別保健品中的功效成分是很有必要的。我國對(duì)于藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)一直有鑒別項(xiàng)規(guī)定，而對(duì)于保健食品還沒有此項(xiàng)要求。中國藥典表明，對(duì)藥物的鑒別是標(biāo)示藥物，也就是當(dāng)鑒別藥物的名稱、處方是已知的時(shí)，采用鑒別實(shí)驗(yàn)方法用來判斷其真?zhèn)?。它不足以確證其化學(xué)結(jié)構(gòu)，不能賴以鑒別未知物，只有在藥物鑒別無誤的情況下，進(jìn)行藥物的雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定才有意義。為了保證保健食品的安全性、保健功能的有效性和質(zhì)量的可控性，國家食品藥品監(jiān)督管理總局印發(fā)了《保健食品注冊(cè)審評(píng)審批工作細(xì)節(jié)》的通知，通知里指出，根據(jù)產(chǎn)品配方及相關(guān)研究結(jié)果等，可以確定產(chǎn)品鑒別方法的，應(yīng)予以全面、準(zhǔn)確的闡述。在對(duì)于保健食品注冊(cè)和延續(xù)注冊(cè)審評(píng)審批時(shí)，需要將產(chǎn)品配方中功效成分的鑒別放在重要位置。

勁骨膠囊是經(jīng)國家批準(zhǔn)的保健食品（國食健字G20060140），其主要配方是鹽酸氨基葡萄糖、白芍提取物、碳酸鈣、維生素K₁和維生素D₃等，經(jīng)混合、灌裝制成的具有增加骨密度，增強(qiáng)免疫力的保健功能。它的功效成分是鹽酸氨基葡萄糖、白芍提取物中的芍藥苷、碳酸鈣、維生素K₁及維生素D₃等。其中鹽酸氨基葡萄糖可治療和預(yù)防人體所有部位的骨關(guān)節(jié)炎，可緩解和消除骨關(guān)節(jié)炎的疼痛、腫脹等癥狀，改善骨關(guān)節(jié)活動(dòng)功能等。

目前國內(nèi)外尚未檢索到與勁骨康膠囊配方相同或相類似的產(chǎn)品鑒別方面的研究報(bào)道，只能對(duì)配方中單一原料進(jìn)行檢索，以期獲得可供借鑒的鑒別方法。其中鹽酸氨基葡萄糖在國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中有鑒別方法和分光光度法的含量測(cè)定，在GB/T20365標(biāo)準(zhǔn)中沒有鑒別方法，但有高效液相色譜法的含量測(cè)定。宮艷艷等用HPLC法，XbridgeAmide柱，蒸發(fā)散射光檢測(cè)器，測(cè)定保健食品中鹽酸氨基葡萄糖；Su等用HPLC法，柱前衍生化，紫外檢測(cè)器，測(cè)定保健食品中鹽酸氨基葡萄糖；Kosman等用HPLC法，紫外檢測(cè)器，測(cè)定藥品中鹽酸氨基葡萄糖等；Rani等用反相高效液相色譜法，紫外檢測(cè)器，測(cè)定藥物中氨基葡萄糖等。中國藥典一部針對(duì)白芍單味藥材有用薄層色譜法鑒別芍藥苷的方法，但沒有白芍提取物的鑒別方法。中國藥典二部有碳酸鈣、維生素K₁及維生素D₃單一原料的相關(guān)鑒別方法。勁骨膠囊是由多種藥材、食品添加劑和輔料組成，成分復(fù)雜，干擾因素多，鑒別及含量測(cè)定相對(duì)難度較大，上述文獻(xiàn)只能提供借鑒。針對(duì)具體的功效成分，經(jīng)研究分別采用化學(xué)反應(yīng)、薄層色譜及高效液相色譜法進(jìn)行鑒別，并對(duì)最主要的功效成分鹽酸氨基葡萄糖進(jìn)行了含量測(cè)定。鑒于此，本文開展勁骨膠囊功效成分，包括鹽酸氨基葡萄糖、白芍提取物、碳酸鈣、維生素K₁以及維生素D₃的鑒別，和鹽酸氨基葡萄糖含量測(cè)定的研究，彌補(bǔ)保健食品過去沒有鑒別項(xiàng)的空白，為該產(chǎn)品延續(xù)注冊(cè)提供研究資料，也為同類產(chǎn)品開展這方面研究工作，并能有效地管控產(chǎn)品質(zhì)量提供了借鑒。

二、材料與方法

1、儀器與試劑

2695高效液相色譜儀，配有紫外（ultraviolet，UV）檢測(cè)器（美國Waters公司）；AE-240分析天平（瑞士Mettler公司）；RQ-50DB超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；GF9070A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海邁源實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）；SX2馬弗爐（上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司）。
勁骨膠囊（批號(hào)190312、190313、190314無錫健特藥業(yè)有限公司）；鹽酸氨基葡萄糖（純度99.9%）、白芍提取物、白芍、芍藥苷（純度99.7%）、碳酸鈣（純度100%）、維生素K₁（純度99.3%）、維生素D₃（純度99.5%）等對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院）；硅膠G薄層板100cm×10cm×0.25cm（青島海洋化工廠）；甲醇、乙腈（色譜純，上?；裟犴f爾試劑有限公司）；酒石酸甲鈉、硝酸銀、茚三酮、冰醋酸、正丁醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醇等（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；水為超純水。

2、實(shí)驗(yàn)方法

（1）鹽酸氨基葡萄糖鑒別

鹽酸氨基葡萄糖的結(jié)構(gòu)圖如圖1所示。根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，并參考國家藥典委員會(huì)《中華人民共和國藥典四部》中的方法進(jìn)行鑒別。

①堿性酒石酸銅反應(yīng)法

取膠囊內(nèi)容物200mg，于10mL試管中，加水5mL溶解，作為樣品溶液；取鹽酸氨基葡萄糖對(duì)照品0.1mg，與樣品同法制成對(duì)照品溶液；按樣品配方和工藝制成不含鹽酸氨基葡萄糖膠囊內(nèi)容物200mg，與樣品同法制成陰性樣品溶液。

在上述3支試管中各加入堿性酒石酸銅試液1mL，加熱，觀察反應(yīng)顏色。

②硝酸銀反應(yīng)法

制法與堿性酒石酸銅反應(yīng)法相同，在水溶解的3支試管中，加入數(shù)滴稀硝酸試液，使呈酸性，滴加硝酸銀試液，觀察反應(yīng)顏色。

③茚三酮顯色法

取膠囊內(nèi)容物200mg，加水10mL溶解，過濾，取濾液5mL，于10mL具塞試管中，作為樣品溶液；取鹽酸氨基葡萄糖對(duì)照品25mg，于10mL具塞試管中，加水5mL溶解，制成對(duì)照品溶液；按樣品配方和工藝制成不含鹽酸氨基葡萄糖膠囊內(nèi)容物200mg，與樣品同法制成陰性樣品溶液。
在上述3支試管中，各加入茚三酮試液，0.5mL，沸水加熱10min，觀察反應(yīng)顏色。

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